摘要： 目的 建立以0.2%醋酸-甲醇為流動(dòng)相的梯度洗脫反相高效液相色譜法同時(shí)測定5種水溶性維生素的分析方法?方法 用反相高效液相色譜法進(jìn)行分析?儀器為日本島津LC-10Avp高效液相色譜儀；流動(dòng)相為0.2%的醋酸（A）和100%的甲醇（B）；采用梯度洗脫?結(jié)果 5種水溶性維生素方法的線性范圍良好；檢出限低；重復(fù)性好；加標(biāo)回收率為 82.5%～112.0%?結(jié)論 本方法簡單?快速?準(zhǔn)確?分離效果好；適用于多維片和飲料中多種水溶性維生素的同時(shí)測定?

關(guān)鍵詞： 反相高效液相色譜法；水溶性維生素；梯度洗脫；多維片；飲料

【中圖分類號(hào)】R453.3 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-8602（2015）04-0523-01

維生素為維持生物體正常機(jī)能的必需物質(zhì)，常作為營養(yǎng)強(qiáng)化食品的添加因子，它廣泛存在于飲料?保健品?果蔬和谷類等加工品中，因此，維生素的檢測對(duì)食品?保健品?冷飲等領(lǐng)域都有非常重要的意義.

本文選用廉價(jià)?低毒的醋酸-水/甲醇體系作為流動(dòng)相，采用的梯度洗脫的方法，不僅成功的分離出五種水溶性維生素，更優(yōu)化了高效液相色譜法分離測定的條件?本實(shí)驗(yàn)方法時(shí)間短?速度快，分離效果好，準(zhǔn)確，靈敏度高；已成功應(yīng)用于多維片和飲料中5中常見水溶性維生素的同時(shí)測定?

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器和試劑

1.1.1儀器 日本島津LC-10Avp高效液相色譜儀，附紫外檢測器；配有兩元梯度泵?色譜柱為Waters AtlantisC18（Waters公司） 150mm×4.8mm?

1.1.2試劑 維生素C（分析純），維生素B1，維生素B2，維生素B6，煙酰胺：上海試劑二廠；醋酸（HAc），鹽酸：天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；甲醇（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)公司?

本實(shí)驗(yàn)所用水為蒸餾水精純水裝置進(jìn)行去離子處理，其它所用試劑除指名外均為生物純（BR）?流動(dòng)相A：0.2% HAc；流動(dòng)相B：甲醇?均經(jīng)0.45m濾膜過濾，超聲脫氣后使用?

1.2樣品處理

1.2.1多維片

數(shù)片碾勻，準(zhǔn)確稱取0.100g 于25ml容量瓶中，加入0.01mol/L HCl 20ml，超聲震蕩30min，加水至刻度，混勻靜置片刻，取上清液經(jīng)0.45 m微孔濾膜過濾后進(jìn)樣?

1.2.2飲料

吸取一定量經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾后進(jìn)樣分析?

1.3色譜條件

流動(dòng)相：A 0.2% HAC； B 甲醇?采用梯度洗脫：流動(dòng)相A?B從進(jìn)樣時(shí)的A+B=100+0線性變化為7min時(shí)的A+B=60+40；保持5min；從12min開始至17min，再線性還原為A+B=100+0?流速1ml/min；進(jìn)樣體積10l?檢測波長：0～4min為245nm，4～6min為290nm，6～17min為266nm?

2 結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

維生素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：VC臨用新配；VB1?VB6 ?煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.00g/L，0.01mol/L HCl中）；VB2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.100g/L，0.01mol/L HCl中）?分別準(zhǔn)確吸取上述儲(chǔ)備液依次稀釋成20.0g/ml?10.0g/ml?5.00g/ml?2.00g/ml（VB2為2.00g/m?l.00g/ml?0.500g/ml?0.200g/ml）的混合使用液，臨用新配?按上述色譜條件，分別進(jìn)樣10l，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），用最小二乘法計(jì)算出相應(yīng)的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表1 ?

2.2線性范圍

對(duì)1～1000g/ml上述五種維生素的使用液進(jìn)行進(jìn)樣檢測，記錄峰面積，并對(duì)濃度作回歸，結(jié)果見表1?線性相關(guān)系數(shù)r在0.9963～0.9998，說明線性關(guān)系良好?

2.3 檢出限

以2倍基線噪聲作為方法的檢出限，測五種維生素的檢出限?結(jié)果見表1?

2.4精密度

采用20.0g/ml的混合液測方法的精密度，測定5次，記錄峰面積，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：VB1 2.53%，VC 1.77%，VB6 2.43% 1.79%，煙酰胺1.80%，VB2 3.27%?

2.5準(zhǔn)確度

采用加標(biāo)回收的方法評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度?

結(jié)果表明，在多維片中，VB1的加標(biāo)回收率為88.6%～102.3%，VC的加標(biāo)回收率為82.5%～112.0%，VB6的加標(biāo)回收率為99.4～103.5%，煙酰胺的加標(biāo)回收率為92.1%～107.0%，VB2的加標(biāo)收率為 82.5%～99.6%?

2.2.6重復(fù)性

取多維片若干，碾磨均勻，每次取0.1g，按照上述樣品處理方法進(jìn)行處理后進(jìn)樣，色譜分析，記錄峰面積，共進(jìn)行5次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差?

所得結(jié)果如下：VB14.40%，VC 5.34%，VB6 11.69%，煙酰胺 4.76%，VB2 6.95%?證明試驗(yàn)的重復(fù)性較好?

2.4樣品測定

本文在市場上選取了幾種添加了水溶性維生素的樣品，包括功能性飲料，國內(nèi)市場（多維片1）和國外市場（多維片2）上選購的多維片等?使用本文所述的實(shí)驗(yàn)方法，測定了3種樣品中水溶性維生素的含量，結(jié)果見表2?

本文建立的多種水溶性維生素同時(shí)測定的高效液相色譜法，可一次性處理同時(shí)分析多種水溶性維生素，簡單?快速?準(zhǔn)確?分離效果好，適合于飲料和多維片中水溶性維生素的測定?

參考文獻(xiàn)

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