亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        破血化瘀、填精補(bǔ)髓法對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠血腫周圍腦組織GSK—3β信號(hào)通路的作用研究

        2015-04-29 00:00:00程遠(yuǎn)趙建軍
        醫(yī)學(xué)信息 2015年14期

        摘要:目的 探討破血化瘀、填精補(bǔ)髓法對(duì)大鼠腦出血血腫周圍組織GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)的影響。方法 應(yīng)用WISTAR大鼠復(fù)制腦出血大鼠模型,觀察破血填精法在改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損及大鼠血腫周圍組織GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)情況。結(jié)果 與模型組相比,陽(yáng)性藥和受試藥各組大鼠在給藥1d和3d后能明顯改善大鼠神經(jīng)系統(tǒng)體征,降低神經(jīng)功能缺損評(píng)分;在給藥第3、7、14d,與模型組比較,受試藥高劑量和中劑量均明顯增加了損傷腦區(qū)GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)數(shù)量(P<0.05或P<0.01,P<0.05)。結(jié)論 破血填精法方劑能明顯改善腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損;其作用機(jī)制可能為調(diào)高腦出血血腫周圍損傷組織中GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)有關(guān)。

        關(guān)鍵詞:腦出血;GSK-3β;破血化瘀;填精補(bǔ)髓

        Abstract:Objecttive To investigate the effect of decoction of Poxue and Tianjing on the expression of brain derived neurotrophic factor GSK-3βand its receptor to the perihematomal tissue in experimental ICH Rats.Methods Using WISTAR rats as the model rats of cerebral hemorrhage.It is designed to observe the effect of the behavioristic index that how the Decoction of Poxue and Tianjing could improve the neurological deficit of the rats.There is also a experiment which is designed to observe the protein expression of GSK-3β.Results Compared with the model control group,the positive drug group and the investigational drug groups rats'neurological signs are improved after 1 and 3 days'administration.At the third,the seventh and fourteenth day of administration,compared with the model group,high and medium-dose group damaged brain area GSK-3βquantity are clearly increased(P<0.05 or P<0.01,P<0.05). Conclusion The experiment has proved that the intracerebral hemorrhage rats'neurological deficit has been evidently improved by the Poxue and Tianjing prescription.And it has been proved from the molecular level that the mechanism might be increasing the expression of GSK-3βto the perihematomal tissue in experimental ICH rats.

        Key words:Intracerebral hemorrhage;GSK-3β;Poxue and Tianjing

        近十年來(lái)對(duì)腦出血后腦損傷發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)得到快速的發(fā)展。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)了作為出血結(jié)果的初期的機(jī)械性創(chuàng)傷、凝血衍生因子和腫塊效應(yīng)的作用。中醫(yī)藥治療腦出血的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究也在逐年開展,目前在促進(jìn)血腫吸收,減輕腦水腫,提高實(shí)驗(yàn)大鼠神經(jīng)功能評(píng)分方面得到了證實(shí)。同時(shí)中醫(yī)藥在減輕腦出血后自由基損傷、減輕炎性反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡也有大量的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究力求從蛋白水平證明其作用機(jī)制,通過(guò)運(yùn)用破血填精法中藥湯劑針對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)的影響。

        1資料與方法

        1.1一般資料 清潔級(jí)體重為250~300g Wistar大鼠,由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供,取雌雄各50%。破血化瘀、填精補(bǔ)髓法方劑:(瓜蔞20g、生蒲黃和石菖蒲各15g、生大黃10g、三七10g、龜板膠10g、水蛭8g、虻蟲5g),采用傳統(tǒng)煎藥方法,去渣之后取藥液進(jìn)行濃縮,使1ml藥液中含1g生藥,4℃保存。醒腦健神膠囊(吉林省中醫(yī)院制劑室,批號(hào):921116)。Western Blot全套系統(tǒng)采用美國(guó)Bio-Rad技術(shù)公司。鼠腦立體定位儀(STOELTING,America);光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS,Japan);手持式牙科鉆(上海齒科器械);生物組織包埋機(jī)BMJ-1(天津航空機(jī)電);組織切片機(jī)RM2235(LEICA,germany)。

        1.2方法

        1.2.1實(shí)驗(yàn)分組 取150只清潔級(jí)雌雄各半WISTAR大鼠,隨機(jī)分配為7組:其中正常對(duì)照組6只;陽(yáng)性給藥對(duì)照組、模型組、受試高、中、低劑量藥物組、假手術(shù)組每組各24只;每組分別分為1d、3d、7d、14d四個(gè)時(shí)間點(diǎn),其中每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。

        1.2.2實(shí)驗(yàn)大鼠模型制備 參照張朋奇[1]方法制備實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠模型。用350mg/kg(體重)10%水合氯醛對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉,于大鼠腹側(cè)尾根部1.5cm處縱行切開,游離鼠尾動(dòng)脈,用微量進(jìn)樣器抽取50ul未經(jīng)肝素化的尾動(dòng)脈血液。大鼠腦立體定位儀調(diào)整好,大鼠俯臥位固定于立體定位儀上,使前囟、后囟位于同一水平面。沿大鼠頭部正中線切開皮膚暴露顱骨、冠狀縫和前囟。參照大鼠腦立體定位圖譜,將前囟作為0點(diǎn),于0點(diǎn)右側(cè)旁開3.0 mm除,前0.4 mm處鉆孔至硬腦膜表面。帶有50ul動(dòng)脈血的微量進(jìn)樣器垂直刺入顱骨外表面下6.0mm處,以10μl/min的速度注入右側(cè)尾狀核,大約5min將動(dòng)脈血全部注入。留針30min,緩慢出針1mm,繼續(xù)留針10min,然后緩慢將針完全取出,將鉆孔用骨臘封住。局部涂抹青霉素粉末并縫合切口。假手術(shù)組操作過(guò)程同上,但不向腦內(nèi)注入尾動(dòng)脈血。

        1.2.3給藥方法 正常對(duì)照組:自由飲水飲食;模型組和假手術(shù)組:采用1ml/100g生理鹽水灌胃,1次/d;高劑量藥物治療組:2ml/100g湯藥灌胃,1次/d;中劑量藥物治療組:1ml/100g湯藥灌胃,1次/d;低劑量藥物治療組:0.5ml/100g湯藥灌胃,1次/d。陽(yáng)性對(duì)照組:醒腦健神膠囊30mg/100g劑量溶于2ml水灌胃,1次/d。

        1.2.4大鼠腦神經(jīng)功能評(píng)分 使用Longa評(píng)分法對(duì)神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分,分為以下幾個(gè)等級(jí):0分:無(wú)神經(jīng)功能缺損;1分:不能完全伸展左側(cè)前爪;2分:大鼠行走時(shí)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈;3分:大鼠行走時(shí)身體向左側(cè)傾倒;4分:不能自發(fā)行走,意識(shí)出現(xiàn)喪失。

        1.2.5 Western Blot檢測(cè)GSK-3β信號(hào)通路表達(dá) 大鼠經(jīng)水合氯醛腹腔注射麻醉后,打開胸腔,剝離出心臟,用止血鉗夾封閉胸主動(dòng)脈和下腔靜脈,剪開右心耳,將靜脈留置針刺入大鼠左心室,用生理鹽水進(jìn)行灌注,待流出清澈液體后,改灌注10%多聚甲醛,待頸部及上肢僵硬后,進(jìn)行斷頭取腦,在經(jīng)DEPC處理的培養(yǎng)皿(放置在冰盤上)上分離右側(cè)腦組織,以之前注血的針孔處為中心取約100 mg腦組織,置于凍存管中,-80℃保存?zhèn)溆?。組織固定,Bio-Rad微型凝膠電泳,免疫印跡操作-轉(zhuǎn)膜,一抗與靶蛋白的結(jié)合,酶標(biāo)記二抗與一抗的結(jié)合,化學(xué)發(fā)光,最后在Quantity One軟件(Bio-Rad)下進(jìn)行Western blot分析。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的形式表示,采用單因素方差分析方法,應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)于不同組別之間采用LSD法進(jìn)行兩兩比較。當(dāng)P<0.05時(shí)即認(rèn)為差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2結(jié)果

        2.1神經(jīng)系統(tǒng)體征及功能缺損評(píng)分與假手術(shù)組大鼠相比較,模型組的大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)功能病理體征;實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)了左側(cè)肢體廢用的偏癱癥狀,并以前肢較為重,行走時(shí)呈順時(shí)針追尾狀。與模型組大鼠相比較,陽(yáng)性給藥組和受試藥物各組大鼠在給藥1d和3d后上述癥狀均得到明顯改善,到第7d時(shí)基本恢復(fù)正常,見表1。

        2.2 Western Blot檢測(cè)結(jié)果 在給藥7d后陽(yáng)性藥組與模型組大鼠比較GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)量略顯升高,但差異并不顯著(P>0.05);中劑量和高級(jí)量受試藥物組大鼠GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)量較模型組明顯增加(P<0.05,P<0.05)。而低劑量受試藥物組大鼠與模型組比較發(fā)現(xiàn)GSK-3β信號(hào)通路表達(dá)量沒(méi)有出現(xiàn)顯著性差異(P>0.05)。

        3討論

        糖原合成激酶3β(Glycogen synthase kinase 3p,GSK-3β)是由活化的47-KDa絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶所構(gòu)成,早在20多年前,人們就己經(jīng)把它作為一種能降低糖原合成活性的激酶提純出來(lái)。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,GSK-3有兩種亞型,即51kDa的GSK-3α和47kDa的GSK-3β。它們的催化結(jié)構(gòu)域DNA序列具有高度的相似性,GSK-3α的活性由Tyr279和Ser21位點(diǎn)的磷酸化調(diào)節(jié);而GSK-3β的活性則由Tyr216和Ser9位點(diǎn)的磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)。但是Tyr279/216和Ser21/9位點(diǎn)在調(diào)節(jié)GSK-3功能上的作用是相反的,即Ser2I/9位點(diǎn)的磷酸化會(huì)下調(diào)GSK-3的活性,而Tyr279/216位點(diǎn)的磷酸化則會(huì)上調(diào)GSK 3的活性[2-4]。在這兩種GSK-3亞型中,GSK-3β在神經(jīng)系統(tǒng)中有特異性的表達(dá)。GSK-3是一種活性激酶,主要是通過(guò)抑制其活性來(lái)調(diào)節(jié)其功能的。通過(guò)對(duì)GSK-3β的Ser9位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化而抑制其活性,在缺血再灌注損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。相反,GSK-3β的Thr216位點(diǎn)磷酸化則會(huì)增加其活性,多見于神經(jīng)元變形的時(shí)候。GSK-3β是一種擁有40多個(gè)亞基的多功能激酶,它不僅能調(diào)控糖代謝,而且在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及死亡中也發(fā)揮了重要作用[5-8]。

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各組實(shí)驗(yàn)大鼠在腦出血后,通過(guò)破血化瘀、填精補(bǔ)髓法進(jìn)行中藥干預(yù),明顯改善了其神經(jīng)功能缺失損傷,高、中劑量受試藥物組中大鼠各種腦出血相關(guān)癥狀在3d后即可消失。破血填精法各組大鼠與模型組相比較,GSK-3β的表達(dá)量在第7d達(dá)到高峰,14d便可恢復(fù)到基本水平,且高劑量受試藥組在重復(fù)的單因素方差分析下效果最為顯著,并與給藥的劑量成正相關(guān)。

        最終得知,通過(guò)對(duì)腦出血實(shí)驗(yàn)大鼠的治療發(fā)現(xiàn),運(yùn)用破血化瘀,填精補(bǔ)髓法中藥湯劑方法可明顯減輕腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損的癥狀,是通過(guò)調(diào)節(jié)GSK-3β信號(hào)通路這一其內(nèi)在機(jī)制來(lái)顯著減輕腦神經(jīng)損傷,并促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞修復(fù)。

        編輯/申磊

        日本免费大片一区二区三区| 草草网站影院白丝内射| 国产乱人伦偷精品视频免| 开心激情站开心激情网六月婷婷| av网站不卡的av在线| 18国产精品白浆在线观看免费| 欧洲一卡2卡三卡4卡免费网站| 国产亚洲女在线线精品| 白白色青青草视频免费观看| 强d乱码中文字幕熟女免费| 亚洲日产精品一二三四区| 五月婷婷激情综合| 成人综合激情自拍视频在线观看| 乱码窝窝久久国产无人精品| 永久免费av无码入口国语片| 精品国产AⅤ无码一区二区| av男人的天堂手机免费网站| 中文字幕一区二区三区视频| 亚洲乱码中文字幕综合| 精品一区二区av天堂| 麻豆国产成人av高清在线| 亚洲综合网国产精品一区| 精品久久久中文字幕人妻| 91精品国产免费青青碰在线观看| 中文字幕亚洲综合久久久| 人妻少妇精品久久久久久| 婷婷五月综合缴情在线视频 | 免费播放成人大片视频| 免费人成网站在线观看欧美| 99爱这里只有精品| 成人久久久久久久久久久| 91白浆在线视频| 青青草在线公开免费视频| 免费大片黄国产在线观看| 狠狠色狠狠色综合日日不卡| 国产精品一区成人亚洲| 国产精品高潮呻吟av久久黄| 亚洲色欲久久久综合网| 丰满少妇又紧又爽视频| 久久精品亚洲国产av网站| 婷婷色婷婷开心五月四房播播|