摘要：早期艾滋病病毒（HIV）感染僅僅會表現(xiàn)出輕微癥狀或者無癥狀，只有通過實驗室檢測才可以準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)HIV感染者/艾滋?。ˋIDS）患者。但是在實驗室檢測的過程中很容易由于各種問題影響實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為了有效避免漏檢、誤檢現(xiàn)象，本文主要分析了目前較為常見的幾種實驗室檢測方法中應(yīng)該注意的問題，以期提高艾滋病檢測的有效性、準(zhǔn)確性。

關(guān)鍵詞：艾滋?。粚嶒炇覚z測；注意問題

艾滋?。ˋIDS）主要是由于人類免疫缺陷病毒（HIV）導(dǎo)致的免疫缺陷性疾病，目前臨床上還沒有研究出有效預(yù)防艾滋病的疫苗，也沒有研究出有效的治療方法。實驗室檢測是診斷HIV感染者/AIDS患者的主要手段，其中血清HIV抗體檢測是診斷各時期艾滋病的重要方法，假如處于HIV感染“窗口期”或者HIV抗體結(jié)果無法確定的情況下，還需要通過抗原檢測、HIV特異性抗體檢測、核酸檢測、病毒分離培養(yǎng)等多種方式輔助診斷，才可以確定屬于HIV感染[1]。其次，臨床很多學(xué)者已經(jīng)經(jīng)過實踐研究證明[2]，核酸檢測、CD+4 T細(xì)胞檢測對于患者用藥療效觀察。

1 HIV抗體檢測中需要注意的幾點問題

1.1試劑盒 HIV抗體檢測中，選用的試劑盒必須得到國家藥品監(jiān)督管理局的注冊或者批準(zhǔn)，而且需要經(jīng)過中國藥品生物制品檢定所的嚴(yán)格審批、檢查合格，經(jīng)過國家艾滋病預(yù)防及控制中心進(jìn)行實驗室評估后的質(zhì)量為優(yōu)良等級。同時，應(yīng)該仔細(xì)檢查試劑盒的有效使用期限，必須要求使用的產(chǎn)品在有效期內(nèi)，應(yīng)該仔細(xì)檢查試劑盒的批號，如果試劑盒批號不同的情況下，有的試劑是不允許混合使用的。

1.2做好實驗前的相關(guān)準(zhǔn)備工作 稀釋液以及酶標(biāo)板等只有在室溫的條件下才可以開始實驗，因此在正式開始實驗前應(yīng)該將其從冰箱中提前取出來。其次，因為有的時候酶標(biāo)板上的蓋膜會存在一些縫隙，這些縫隙會改變酶標(biāo)小球的顏色以及體積，一旦發(fā)現(xiàn)酶標(biāo)小球出現(xiàn)變化后一定要及時更新。

1.3加樣環(huán)節(jié) 實驗室采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（E LISA）試劑盒大部分都會選擇全自動或者半自動酶標(biāo)儀，酶標(biāo)儀的質(zhì)量對于實驗室檢測結(jié)果有很大的影響。全自動酶標(biāo)儀主要是儀器自動進(jìn)行加樣。酶標(biāo)儀在日常使用過程中，一定要做好清洗工作，保證加樣針能夠保持暢通，而且應(yīng)該準(zhǔn)確把握加樣量。其次，檢測者應(yīng)該及時檢查、核對樣本管編號和儀器上的編號位置是否相符，還應(yīng)該注意儀器有沒有將樣品添加到酶標(biāo)板中的正確位置，總之，檢測者應(yīng)該密切注意觀察整個儀器加樣過程。假如是手工加樣的情況下，首先應(yīng)該確保準(zhǔn)確的吸樣量，同時還應(yīng)該確保酶標(biāo)板上樣品添加到正確的位置上。這樣可有效預(yù)防由于加樣失誤而出現(xiàn)假陽性或者假陰性等情況。

1.4溫育條件 加樣后應(yīng)該選擇水浴法進(jìn)行溫育，避免溫度不均勻。放置酶標(biāo)板之前，應(yīng)該提前將溫度調(diào)節(jié)到實驗需要的溫度，確保能夠擁有充足的溫育時間。其次，需要注意的是，不能反復(fù)應(yīng)用封板用的膜。

1.5洗板 在實驗的過程中，一定要嚴(yán)格根據(jù)說明書中的要求確定洗板的洗液量、浸泡時間、洗板次數(shù)。同時，應(yīng)該定時清理洗板機的吸液孔，避免標(biāo)本纖維蛋白絲以及被洗液結(jié)晶將吸液孔堵塞，保證所有的洗液空以及吸液孔能夠在洗板的過程中保持正常、高效的運行狀態(tài)。如果洗板沒有清理干凈的情況下，很容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

1.6質(zhì)量控制環(huán)節(jié) 每一次進(jìn)行試驗的過程中，都應(yīng)該將內(nèi)外部對照質(zhì)控血清包含進(jìn)來，這樣可大大提高HIV檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性。對于內(nèi)部質(zhì)控血清，一定要特別注意批號，如果試劑盒的批號不同的情況下，禁止混合使用。其次，每次試驗都必須添加外部質(zhì)控血清，結(jié)束試驗后，一定要檢查當(dāng)天的質(zhì)控結(jié)果有沒有控制在合理允許的范圍中。

臨床上有的懷孕婦女、惡性疾病患者、器官移植化患者、輸血患者以及自身免疫性疾病患者，因為其他非病毒蛋白抗體之間產(chǎn)生的交叉反應(yīng)，極易導(dǎo)致患者的身體出現(xiàn)一些抗體，這種反應(yīng)非常類似于HIV p24核心蛋白抗體引發(fā)的一系列反應(yīng)，患者初篩、復(fù)檢的吸光度值都相對比較低。一旦發(fā)生這樣的情況，一定要和接診醫(yī)生及時聯(lián)系，詳細(xì)詢問患者的病情后，再決定需不需要送往實驗室進(jìn)行確證試驗。大部分確證試驗雖然結(jié)果表明都是陰性，但是檢測者也不能習(xí)慣性的將初篩陰性報告發(fā)出去，避免出現(xiàn)漏檢情況。

2 核酸檢測

臨床上已經(jīng)廣泛推廣應(yīng)用了第四代HIV抗體試劑，大大提前了HIV臨床感染窗口期，然而早期HIV感染患者并沒有明顯的臨床癥狀，這種情況下需要輔助進(jìn)行核酸檢測。很多學(xué)者提出[3]，HIV感染后患者血漿中病毒載量和患者的病情發(fā)展速度呈正相關(guān)性，也就是說血漿中病毒載量越多，患者的病情發(fā)展越快。在實驗過程中還存在很多因素會對核酸檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性造成很大的影響。因此，需要注意以下幾點：①相對于其他采血管RNA水平而言，EDTA抗凝采血管采集到的血漿會有一定偏高，而且隨著時間的不斷變化，并不會有很大的損失，因此在標(biāo)本采集的過程中，采血管應(yīng)該采用EDTA抗凝采血管。②采全血后4～6 h將血漿分離的效果最好，采集血樣標(biāo)本后，應(yīng)該將血漿盡快分離，并且冰凍保存。③根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)研究顯示，血漿樣本的HIV RNA含量保存在-20℃的環(huán)境下12 w，其含量會低于保存在-80℃環(huán)境。到了20～24 w，HIV RNA含量會降低30%～80%。因此將血漿分離后，應(yīng)該立即進(jìn)行檢測，不然應(yīng)該將其保存于-80℃環(huán)境中。

3 CD4+T淋巴細(xì)胞檢測

現(xiàn)階段，CD4+T淋巴細(xì)胞亞群檢測方法較為常用的是流式細(xì)胞術(shù)，因為CD4+T淋巴細(xì)胞的水平值波動幅度比較大。為了有效確保臨床檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性，應(yīng)該注意以下幾點：①采集標(biāo)本的過程中，應(yīng)該盡量采用EDTA抗凝采血管，在采血的過程中也應(yīng)該及時將血液標(biāo)本搖勻，避免出現(xiàn)凝塊。②最好在室溫2 h內(nèi)及時檢測標(biāo)本，假如無法及時進(jìn)行檢測的情況下，在室溫下將標(biāo)本保存的時間應(yīng)該在2 d以內(nèi)。加入抗體的過程中，千萬不能將加樣槍頭觸碰到管底部微球，避免吸頭會吸附微球，降低管內(nèi)微球數(shù)量，增加CD+4 T淋巴細(xì)胞計數(shù)。③加樣量的準(zhǔn)確性會對CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)結(jié)果有直接的影響，因此必須定期校正加樣槍，采用反向加樣法進(jìn)行加樣。④一定要保證流式細(xì)胞儀的工作狀態(tài)保持最佳狀態(tài)。當(dāng)天使用完儀器后，應(yīng)該立即清洗，為了確保管路保持更好的狀態(tài)，可以先用次氯酸鈉進(jìn)行清洗后，再采用具備去蛋白作用的清洗液再進(jìn)行一次清洗，而且應(yīng)該定期進(jìn)行一次大沖洗。

綜上所述，想要有效確保艾滋病檢測結(jié)果的質(zhì)量，要求實驗室應(yīng)該具備較高的硬件水平，并且制定嚴(yán)格的管理制度以及科學(xué)的操作規(guī)程。而實驗室檢測人員也應(yīng)該具備較高的專業(yè)素質(zhì)以及技術(shù)水平，提高艾滋病診斷正確性，為臨床診治艾滋病提供科學(xué)、可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]潘品良，影響血樣樣本中HIV-1病毒載量檢測值的因素分析[J].中國艾滋病性病，2006，12（5）：476-478.

[2]肖瑤，張桂云，裴麗健，等.存放溫度及時間對于HIV/AIDS患者外周血CD4、CD8細(xì)胞測定結(jié)果的影響[J].中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，2004，18（2）：129-131.

[3]姜兆金.艾滋病篩查實驗室保證檢測質(zhì)量應(yīng)注意的問題[J].中國民族民間醫(yī)藥，2008，06（02）：52-54.編輯/羅茗柯