摘要：目的 檢測廣西南寧市部分市面流通的金銀花的中綠原酸的含量。方法 采用高效液相色譜法，以綠原酸為檢測指標對購置于南寧市場上28批不同單位的金銀花進行含量測定。結(jié)果所測定的28個廣西南寧市流通的金銀花樣品中所含綠原酸的量均超過藥典規(guī)定的1.5%標準。結(jié)論 本次試驗檢測廣西南寧市流通的金銀花樣品的綠原酸含量均符合國家藥典標準。

關(guān)鍵詞：金銀花；綠原酸；HPLC

金銀花為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb）的干燥花蕾或帶初開的花。其性甘寒氣芳香，甘寒清熱而不傷胃，芳香透達又可祛邪，既能宣散風熱，還善清解血毒，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等證，均效果顯著[1]。綠原酸作為金銀花中的一種次生代謝物，為中國藥典控制金銀花的質(zhì)量指標之一[2]；其具有清除自由基、抗菌消炎、降糖、降血脂、保肝利膽等多種功效[3-5]。金銀花在廣西南寧常用于治療急性呼吸道感染、肺部感染、感冒、急性扁桃體炎、肺炎、流行性腦脊髓膜炎等疾病[6]。因此本實驗研究以綠原酸為檢測指標對廣西南寧市流通金銀花進行質(zhì)量監(jiān)控具有一定現(xiàn)實意義。

1 儀器與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀；Waters Symmetry C-18液相色譜柱（150×4.6mm，5μm）；德國賽多利斯公司BP211D電子分析天平；Millipore simplicity-185超純水器；SB3200T超聲波清洗器；乙腈（色譜純）；甲醇（分析純）；超純水；其他試劑為分析純。綠原酸（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200413）；28批金銀花樣品均于2015年3月購置于南寧是不同區(qū)域的藥店、藥房、醫(yī)院及批發(fā)部。經(jīng)過廣西中醫(yī)藥大學廖月葵高級實驗室鑒定為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb）的干燥花蕾或帶初開的花。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 采用高效液相色譜法進行含量測定，以綠原酸為供試品定量指標，色譜條件為：Waters Symmetry C18液相色譜柱（150×4.6mm，5μm），乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動相，柱溫：35℃，檢測波長為327nm。

2.2試液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取經(jīng)變色硅膠減壓干燥至恒重的綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含121.6μg的溶液，即得（10℃下避光保存）。

2.2.2供試品溶液的制備 精密稱取各金銀花樣品粉末（過四號篩）0.5g，精密稱定，分別置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷，用補足減失的重量，搖勻，精密吸取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3空白溶液 以上述實驗同一50%甲醇溶液為空白溶液，作為陰性對照。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、空白陰性對照溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，如圖1～圖3所示。結(jié)果表明：空白對照在綠原酸峰處無干擾。

2.4線性關(guān)系考察 分別精密吸取綠原酸對照品溶液（0.1216μg/μL）1、2、4、8、10、12μl，注入液相色譜儀，按上述2.1項下的色譜條件測定峰面積，以峰面積A對進樣量C（μg）進行回歸，得標準曲線方程：A=1875 C，r=1。表明綠原酸在0.1216～1.4592μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液（1號樣品）10μl，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，測定綠原酸峰面積RSD為0.08%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取新鮮配制的本品供試品溶液，室溫下放置，分別在0、2、6、12、20、25、48h精密進樣10μl，結(jié)果峰面積RSD為0.41%（n=7）。表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復性試驗 取同一批號樣品，按2.2.2項下供試品溶液的制備方法進行制備，制得6份供試品溶液，分別精密進樣10μl，每個樣品進兩針，將測定所得的峰面積。代入上述實驗線性方程中計算得到該樣品中綠原酸的平均百分含量為2.23%，RSD為2.87%（n= 6）。表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.8加樣回收試驗 取已知含量（樣品中綠原酸的百分含量為2.23%）的金銀花樣品粉末（過四號篩）6份，每份0.25g，精密稱定，加入綠原酸對照品溶液50ml，按樣品提取測定方法測定，測得回收率為100.33%，RSD=0.88%（n=6）。

2.9綠原酸含量測定 按2.2.2項下供試品溶液制備方法進行樣品制備后，按測定得到各樣品的峰面積如表1所示，代入回歸方程求得綠原酸的質(zhì)量，再計算出金銀花樣品中綠原酸的百分含量。

3 討論與結(jié)論

3.1本實驗購買樣品均為南寧正規(guī)的藥材或藥品銷售單位。在購買實驗樣品時盡量將采購的區(qū)域及單位散布于南寧市范圍內(nèi)，因此購買得到的樣品對當時南寧市市場上流通的金銀花樣品具有一定的代表性。

3.2本實驗的測定結(jié)果表明：所購置的各實驗樣品中綠原酸的含量均超過了《中華人民共和國藥典》規(guī)定的1.5%標準，含量的最低為國大杭州店，其含量為2.06%；最高含量為同濟群益店，其含量為3.55%。由金銀花中的綠原酸易見光分解，因此其含量與樣品采集、加工及貯存有密切關(guān)系，本次實驗檢測沒有發(fā)現(xiàn)不合格的樣品。本實驗還對所購置的樣品進行水分、總灰分、酸不溶性灰分等項目檢測，實驗結(jié)果表明：所有購置的樣品的水分、總灰分、酸不溶性灰分等項目均符合藥典標準。

參考文獻：

[1]趙樹欣.配制酒生產(chǎn)技術(shù)[M].北京市：化學工業(yè)出版社，2008：205.

[2]國家藥典委員會.中國藥典2010年版一部[M].北京：化學工業(yè)出版社，2010：205-206.

[3]郭力.中藥化實驗[M].北京市：科學出版社，2008：169.

[4]侯玉澤，李松彪.食品衛(wèi)生快速檢驗技術(shù)[M].北京市：中國農(nóng)業(yè)出版社，2008：313.

[5]林強，葛喜珍.中藥材概論[M].北京市：化學工業(yè)出版社，2007：258.

[6]潘其旭，覃乃昌.壯族百科辭典編纂委員會編[M].南寧市：廣西人民出版社，1993：867.

編輯/哈濤