【摘要】凝膠色譜法通常又被人們叫做凝膠色譜技術，這種技術是一種應用方法非常簡單的分離技術，因為這種技術所使用的設備非常的簡單，操作中也不會對操作人員有非常高的要求，所以這種方法在測定頭孢菌素類藥物中高分子雜質(zhì)方面有著非常廣泛的應用。

【關鍵詞】頭孢菌素類藥物；凝膠色譜技術；高分子雜質(zhì)

在國內(nèi)和國外的很多臨床試驗研究中，很多抗生素在應用中產(chǎn)生的速發(fā)型國民反應很大程度上都是因為藥品當中存在著一些高分子的雜質(zhì)，這些高分子雜質(zhì)會對藥品整體的質(zhì)量產(chǎn)生非常重大的影響，所以就要采取有效的措施降低雜質(zhì)的含量。

一、儀器與實驗準備上的注意事項

1、儀器準備

在實驗準備的過程中，如果采用廠家自行配置的儀器，通常會包含三個單元，它們分別是輸液單元、檢測單元和數(shù)據(jù)處理單元。輸液單元在這一過程中可以起到穩(wěn)定流速的作用，檢測單元可以很好的適應紫外線檢測的相關要求，同時它也可以向色譜站或者是記錄儀輸出模擬信號，這樣就可以對信號和數(shù)據(jù)進行適當?shù)奶幚恚孕信渲玫膬x器的過程中也可以參照相關的規(guī)定來制定技術指標，定期對設備進行檢查，保證實驗的準確性。

2、凝膠色譜柱準備

在色譜柱的規(guī)格選定方面，一定要充分的考慮到系統(tǒng)的最大進樣極限，樣品自身溶于水的能力以及檢測儀器的功能，一般情況下，膠凝色譜柱在體積上和柱床相比要小一些，因此一般柱床的體積應該選擇60毫升以上的類型。

3、玻璃柱管的分端及凝膠介質(zhì)的選取

在玻璃柱管的分端位置，通常開口的玻璃管柱封堵是可以采用玻璃棉和開口膠塞的組合方式，也可以在一段燒結石英過濾板的方式。凝膠色譜法在凝膠介質(zhì)的選擇方面一定要十分注意選擇的合理性，當前凝膠色譜的使用最為廣泛的一種是葡聚糖凝膠，這種凝膠在使用中要使得水分充分的溶脹，在應用的過程中也可以根據(jù)凝膠柱柱床的體積進行定量的計算，可以在溶脹的過程中要使用蒸餾浸泡的方法，也可以將其在溫度為4攝氏度的冰箱中冷凍四十八個小時，或者是在沸水中煮一個小時，都是可以保證溶脹的充分程度的。在溶脹的過程中，要注意及時的攪拌，去除其中的氣泡，如果有需要，還可以采用真空脫氣的方式。

4、裝柱

在裝柱的過程中。要將溶脹充分的凝膠介質(zhì)直接用蒸餾水經(jīng)過一段時間的懸浮和靜置，每一次靜置都應該將表層的液體清除，這樣就可以除去凝膠的碎屑和液體中所含的雜質(zhì)，使用這種方法進行反復的清洗，直到上層的液體呈現(xiàn)出了非常明顯的清澈狀。在實際的操作中可以先把凝膠介質(zhì)制作成懸漿，在成性之后將其倒入到玻璃管柱當中，等到所有的凝膠顆粒全部沉降之后，也就結束了整個裝柱的過程。也可以在垂直的方向上設置下口，這樣就會使得液體更加的流暢，用滴灌逐漸的從漏斗當中加入懸漿，這樣就可以使得凝膠在蒸餾水當中緩慢的沉淀，漏斗的灌注槽當中應該保持適量的懸漿，使用這種方法需要很長的時間，必要的情況下還要對柱口施加一些負壓，這樣就可以有效的提高加柱的速度，還需要注意的一點就是新的色譜柱一定要用水沖洗干凈，這樣才能更好的保證填料的均勻性。

5、凝膠柱的維護及恢復

凝膠柱的維護也是一個非常重要的內(nèi)容，在維護工作中，一定要保證柱床本身的連續(xù)性，如果發(fā)現(xiàn)了凝膠有氣泡，就應該及時的將凝膠傾倒，之后，將其重新的處置，如果只是在柱頭的位置出現(xiàn)了非常少的污染或者是破壞，可以用一些小的工具將這一部分的凝膠挖掉，之后再再其中加入適量的水，在加水的過程中，還要使用玻璃棒對其進行攪拌，然后將其靜置，知道凝膠顆粒完全沉降，之后再封住柱頭，在色譜柱中如果發(fā)生了一些異常的吸附現(xiàn)象，就很有可能色譜柱整個的運作機制，同時柱壓還會突然升高，如果是這樣的情況，就要對其進行恢復。

二、系統(tǒng)適用性實驗

系統(tǒng)適用性試驗對溶液的制備更加注重方便性和可操作性，系統(tǒng)適用性試驗用溶液的配制方法為用主成分對照品與雜質(zhì)對照品混合配制，但還是會使得有些雜質(zhì)對照品不能得到，如性質(zhì)不穩(wěn)定或分離提取技術要求太高等，但這些雜質(zhì)峰恰恰又是與主成分峰最難分離的色譜峰。系統(tǒng)適用性試驗目前包括很多內(nèi)容，主要考察對照品測定系統(tǒng)與高分子雜質(zhì)測定系統(tǒng)中藍色葡聚糖2000溶液峰的保留時間的比值，以及理論板數(shù)和拖尾因子，以此來控制對照品測定與高分子雜質(zhì)測定時儀器狀態(tài)的同一性。在以藍色葡聚糖2000的保留時間來表示高分子雜質(zhì)的保留特征時，對照品色譜峰及高分子雜質(zhì)色譜峰與藍色葡聚糖2000溶液色譜峰保留時間的比值都應控制在一定的限度內(nèi)，由此才能實現(xiàn)對色譜柱狀態(tài)的正常控制。

三、操作方法上的注意事項

1、樣品溶液及對照溶液的制備

在實際的操作過程中，一定要按照規(guī)定的標準和要求對標準的樣品溶液進行配制，由于一些高濃度的抗生素溶液不具有很強的穩(wěn)定性，所以在實踐中經(jīng)常是將樣品溶液和對照品的溶液都是邊溶邊進的，在對照液的制備方面，一定要注意對頭孢菌高分自雜質(zhì)含量的檢測，經(jīng)常使用的一種方法就是將樣品放在哦純水或者是SDS水中，之后，根據(jù)其具體的情況來確定其制備時需要的量。同時還要注意對樣品自身品質(zhì)和水的清潔程度的控制，這樣才能保證處理的質(zhì)量。

2、凝膠面的平整

手動進樣的過程中，一定要保證凝膠面具有良好的平整性，進樣之前一定要用滴灌去除凝膠上殘留的液體，這對色譜柱下方的通暢有著非常重要的意義，等到柱內(nèi)的液體完全的降到凝膠面下端的時候，就可以用定量的器具進行測量取出規(guī)定數(shù)量的樣品溶液，然后再將其加入到色譜柱凝膠的表面位置上，待樣品下降打掃凝膠面以下的時候，就可以吸收少量的流動性，將其沿著色譜柱管的內(nèi)壁緩慢的加入到其中，這樣也可以洗掉色譜柱管壁上殘留的一些溶液，然后再加入適量的流動相，將流路重新打開，對進樣的時間進行記錄。

四、結語

抗生素類藥物在身纏和貯藏的過程中很容易產(chǎn)生聚合反應，在聚合反應滯后也會產(chǎn)生非常多的大分子雜質(zhì)，在這樣的情況下，藥品的質(zhì)量和療效也會受到非常明顯的影響，為了避免這種現(xiàn)象的出現(xiàn)，一定要采取有效的措施對其進行測定和控制，提高藥品質(zhì)量。

參考文獻

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