程彬　戴華　白麗麗

摘要[目的]建立海南糞箕篤總生物堿含量測(cè)定的方法。[方法]以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，溴甲酚綠為酸性染料，在緩沖溶液pH=5.4條件下，于421 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。[結(jié)果]糞箕篤在0～15.75 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 5），平均回收率為103.21%，RSD=0.30%。[結(jié)論]該法簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于糞箕篤總生物堿的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞糞箕篤；生物堿含量；分光光度法；根莖

中圖分類號(hào)S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2015）16-067-02

Determination of Total Alkaloids in Rhizome of Stephania longa L. from Hainan Province

CHENG Bin1， DAI Hua2， BAI Lili1*

（1. School of Pharmaceutical Sciences， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199； 2. School of Public Health， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199）

Abstract[Objective] To establish a method for the determination of total alkaloids in Stephania longa L.from Hainan Province. [Method] With berberine hydrochloride as the control， bromocresol green as acid dye colorimetry， the content of total alkaloids in Stephania longa L. was determined by spectrophotometry at 421 nm and sodium citrate buffer solution at pH=5.4. [Result] The linear ranges of the total alkaloids were 0-15.75 μg/ml （r=0.999 5）. The average recovery was 103.21% （RSD=0.30%）. [Conclusion] The method is simple， accurate and reproducible， which can be used for content determination of total alkaloids in S. longa.

Key words Stephania longa L.； Alkaloids content； Spectrophotometry； Rhizome

糞箕篤（Stephania longa L.）為防己科千金藤屬植物，多年生草質(zhì)藤本，廣泛分布于廣東、福建、臺(tái)灣、海南等我國(guó)南部地區(qū)[1]。在海南全省各地可見，生于村邊或曠野灌木叢中，是天然的南藥資源。全株可入藥，味辛、性平，具有清熱解毒、利濕消腫、袪風(fēng)活絡(luò)、抑菌、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效[2-3]。該屬植物富含生物堿，近年來(lái)對(duì)該屬植物的化學(xué)成分及藥理進(jìn)行研究[4-8]，但有關(guān)糞箕篤總生物堿含量的測(cè)定鮮有報(bào)道。筆者主要采用分光光度法，以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，對(duì)海南糞箕篤根莖中的總生物堿進(jìn)行含量測(cè)定，為糞箕篤及其千金藤屬其他植物的藥用開發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1儀器

UV1600型紫外可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器有限公司）；PHS-3C型酸度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；B210S分析天平（北京賽多利斯有限公司）。

1.2試藥

鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713-201212，純度86.7%）；糞箕篤藥材（采自海南

文昌），經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院曾念開副教授鑒定為糞箕篤Stephania longa L.根莖，晾干粉碎后備用。所用試劑均為分析純，水為

蒸餾水。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1試液配制。

1.3.1.1對(duì)照品溶液的制備。精密稱取在110 ℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品10.1 mg置于50 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，按86.7%計(jì)算，即得175 μg/ml。

1.3.1.2供試品溶液的制備。糞箕篤粉末約2.0 g精密稱量6份，置于圓底燒瓶中，用85%乙醇回流2 h，濃縮后經(jīng)氯仿提取，于100 ml容量瓶中定容至刻度，低溫冷藏、備用。

1.3.1.3顯色液和緩沖液的配制。按藥典方法配制溴甲酚綠酸性染料溶液，以及pH=5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液[9]。

1.3.2吸收波長(zhǎng)的選擇。精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.5 ml，置分液漏斗中，加檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0 ml，溴甲酚綠溶液2.0 ml，搖勻，加入氯仿10.0 ml，充分振搖，靜置1 h，分出氯仿層，于200～600 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，同時(shí)以氯仿作為空白參比液。

1.3.3方法學(xué)考察。

1.3.3.1線性關(guān)系考察。精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，加水0.9、0.8、0.7、0.5、0.3、0.1 ml，按“1.3.2”項(xiàng)操作，充分振搖后，靜置1 h，分出氯仿層。室溫放置40 min后，在421 nm下測(cè)定吸光度值，同時(shí)以氯仿為空白對(duì)照。

1.3.3.2穩(wěn)定性考察。取供試品溶液，在室溫和室內(nèi)光照條件下密閉放置，分別在0、5、10、30、60、120 min時(shí)測(cè)定吸光度值。

1.3.3.3精密度試驗(yàn)。精密量取對(duì)照品溶液0.5 ml，余下操作同“1.3.2”項(xiàng)，依次測(cè)得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.4重復(fù)性試驗(yàn)。取供試品溶液6份，操作同“1.3.2”項(xiàng)，依次測(cè)得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.5加標(biāo)回收試驗(yàn)。取6份供試品溶液，分別加入175 μg/ml鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液0.23 ml，依照“1.3.2”項(xiàng)操作，在421 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。

1.3.4總生物堿含量的測(cè)定。取供試品溶液6份，每份0.5 ml，用氯仿定容至10.0 ml，按“1.3.2”項(xiàng)操作，分別測(cè)得吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行含量計(jì)算。

2結(jié)果與分析

2.1波長(zhǎng)的選擇

取供試品與對(duì)照品在200～600 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示（圖1），鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液和供試品溶液均在421 nm處有吸收峰，而空白參比液在421 nm處沒(méi)有吸收，故該試驗(yàn)選擇421 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖1對(duì)照品溶液（a）和空白參比液（b）全波長(zhǎng)掃描圖

2.2方法學(xué)考察

2.2.1線性關(guān)系的考察。精確量取對(duì)照品溶液，在421 nm處測(cè)其吸光度。以吸光度值為縱坐標(biāo)、濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），得出線性回歸方程為A=0.074 0C+0.014 5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，在濃度0～15.75 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2.2穩(wěn)定性試驗(yàn)。平行測(cè)定6次，得其RSD=0.20%（n=6），表明供試品溶液在0～120 min內(nèi)基本穩(wěn)定，滿足試驗(yàn)要求。

2.2.3精密度試驗(yàn)。平行測(cè)定6次，得其RSD=0.16%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)。平行測(cè)定6次，得其RSD=2.20%（n=6），表明重現(xiàn)性較好，符合試驗(yàn)要求。

2.2.5加標(biāo)回收試驗(yàn)。由表1可知，該法回收率為102.75%～103.57%，平均回收率為103.21%，RSD=0.30%（n=6），表明回收率較好，符合試驗(yàn)要求。

表1加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)量次數(shù)樣品含量μg加標(biāo)量μg吸光度回收率%平均回收率∥%RSD%

134.0540.250.630 9103.46103.210.30

234.0740.250.628 1102.96

334.0040.250.629 2103.23

434.0540.250.626 6102.75

534.0940.250.631 9103.57

634.0346.460.629 8103.31

2.3總生物堿含量的測(cè)定平行測(cè)定6份試液，由表2可知，糞箕篤根莖中總生物堿含量為0.38%～0.40%，平均含量為0.39%，RSD=2.20%（n=6）。

表2糞箕篤根莖中總生物堿含量測(cè)定結(jié)果

序號(hào)吸光度含量∥%

10.313 30.40

20.297 30.38

30.297 00.38

40.308 00.40

50.305 70.39

60.310 30.40

平均值0.305 30.39

3結(jié)論與討論

采用分光光度法測(cè)定糞箕篤根莖中總生物堿含量平均為0.39%，操作簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。溴甲酚綠顯色法測(cè)定總生物堿含量時(shí)，選擇合適的pH很重要，其他條件對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小[10]，故該試驗(yàn)參考文獻(xiàn)[9]選定pH=5.4。該方法與液相色譜法比較，具有所用儀器簡(jiǎn)單、操作方便、耗時(shí)少的優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編寫委員會(huì).中國(guó)植物志，第三十卷[M].北京：科學(xué)出版社，1996：41.

[2] 代正福，彭明，戴好富.海南中藥資源圖集 第1集[C].昆明：云南科技出版社，2010.

[3] 馬養(yǎng)民.千金藤屬植物化學(xué)成分的研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，19（3）：125-130.

[4] 林啟云，謝金鮮.糞箕篤利尿、鎮(zhèn)靜及鎮(zhèn)痛作用研究[J].廣西中醫(yī)藥，2001，24（3）：43-45.

[5] 寧蕾，鄧業(yè)成，駱海玉.糞箕篤提取液抑菌活性初步研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（1）：166-168.

[6] 利奕成，楊珂，黃立，等.千金藤屬植物地不容和云南地不容中多糖和葡聚糖的含量測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（12）：2921-2922.

[7] 黃建明，郭濟(jì)賢，段更利.RP-HPLC法測(cè)定千金藤屬植物中7種生物活性生物堿[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1998，33（7）：528-533.

[8] 唐麗佳，張?jiān)?，郝小燕，?桐葉千金藤中蓮花烷類生物堿的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（15）：1973-1977.

[9] 劉秀萍，黃祥衛(wèi)，劉煒.小葉地不容中總生物堿含量的測(cè)定[J].海南師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，24（2）：174-175.

[10] 孟祥松，時(shí)軍.溴甲酚綠比色法測(cè)定苦參總堿含量的研究[J].安徽醫(yī)藥，2007，11（1）：41-42.