王雙雙，張俊，杜芳芳，李曉，胡安君，趙雅，王學(xué)兵，，張紅英，?

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州450000；2.河南省動物性食品安全重點實驗室，鄭州450000；3.河南省科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司；鄭州450002；4.河南中亞神鵬醫(yī)藥科技有限公司，鄭州450061）

連花柴芩可溶性粉解熱鎮(zhèn)痛止咳祛痰作用的研究

王雙雙1，張俊1，杜芳芳2，李曉3，胡安君1，趙雅4，王學(xué)兵1，2，張紅英1，2?

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州450000；2.河南省動物性食品安全重點實驗室，鄭州450000；3.河南省科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司；鄭州450002；4.河南中亞神鵬醫(yī)藥科技有限公司，鄭州450061）

為評價連花柴芩可溶性粉的解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰作用，采用LPS致大鼠發(fā)熱法、醋酸致小鼠扭體法、小鼠氨水引咳法、小鼠氣管段酚紅排泌法，觀察連花柴芩可溶性粉的解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰作用。結(jié)果顯示，連花柴芩可溶性粉抑制大鼠發(fā)熱效果顯著（P＜0.05）；減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)（P＜0.05），鎮(zhèn)痛率分別為34.81%、32.59%和27.31%；減少小鼠咳嗽次數(shù)（P＜0.05），抑制率分別為36.82%、31.48%和20.37%；能增強小鼠對酚紅的排泌（P＜0.05）。表明連花柴芩可溶性粉具有明顯的解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰的作用。

連花柴芩可溶性粉；解熱；鎮(zhèn)痛；止咳；祛痰

連花柴芩可溶性粉是結(jié)合銀翹散辛涼透表、清熱解毒的功效［1-2］和小柴胡湯和解少陽、和胃降逆、扶正祛邪的功效［3］，合理加減、調(diào)劑組方，制備而成的粉劑，具有清熱瀉火、消腫散結(jié)、祛風(fēng)固表的功效，可用于畜禽上呼吸道感染、咽炎、肺炎等疾病的預(yù)防和治療。本試驗觀察了該藥的解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰作用，為其進一步的臨床治療及新藥的申報提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑與儀器 脂多糖（LPS，Sigma公司）；冰醋酸（開封開化有限公司試劑廠，國藥準(zhǔn)字051124304，規(guī)格：500 mL）；氯化銨（分析純，天津市凱德化學(xué)試劑有限公司）；酚紅（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 藥物 中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉（由河南科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司提供）；雙黃連口服液（河南富森藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z41022325，規(guī)格：10 mL／支）；阿司匹林腸溶片（神威藥業(yè)集團有限公司，國藥準(zhǔn)字H3023716，產(chǎn)品批號1304071，規(guī)格：25 mg／片）；醋酸地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H33020822，產(chǎn)品批號140301，規(guī)格：0.75 mg／片）；氫溴酸右美沙芬軟膠囊（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20066348，規(guī)格：15 mg／片），臨用前用蒸餾水配成所需濃度的混懸液。

1.3 動物 昆明種小鼠，雌雄各半，6～8周齡，體重18～22 g；健康SD大鼠，雌雄各半，6～8周齡，體重200～220 g。均購自鄭州大學(xué)實驗動物中心。

2 方法

2.1 解熱試驗 據(jù)參考文獻方法［4］，取200～220 g的SD大鼠，每組10只，雌雄各半。隨機分為空白對照組（灌胃生理鹽水）；模型組（灌胃生理鹽水）；阿司匹林組（0.22 g／kg）；雙黃連組（10 mL／kg）；中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組（1.2 g／kg，0.6 g／kg，0.3 g／kg），灌胃給藥0.5 mL／只，每天1次，連續(xù)5 d。除空白對照組外，各組于末次給藥1 h后，一次性腹腔注射脂多糖（100 μg／kg）0.2 mL／只，隨后0.5、1、1.5、2、3、4、5.5、7、9、12 h測量1次體溫，連續(xù)監(jiān)測12 h。

2.2 鎮(zhèn)痛試驗 據(jù)參考文獻方法［5-6］，取體重18～ 22 g的昆明小鼠，每組10只，雌雄各半，隨機分為模型組（灌胃生理鹽水）；醋酸地塞米松片組（5 mg／kg）；雙黃連組（20 mL／kg）；中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組（1.6 g／kg，0.8 g／kg，0.4 g／kg），灌胃給藥0.5 mL／只，每天1次，連續(xù)5 d。末次給藥1 h后，腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL／只，以腹部內(nèi)凹，軀干與后腿伸張，臀部高起作為產(chǎn)生扭體反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，記錄觀察5～20 min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)，并按如下公式，計算藥物對扭體反應(yīng)的鎮(zhèn)痛率：

2.3 止咳祛痰試驗 取體重18～22 g的昆明小鼠，每組10只，雌雄各半，隨機分為空白對照組（灌胃生理鹽水）；氯化銨組（0.3 g／kg）；右美沙芬組（5.85 mg／kg）；中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的高、中、低組（1.6、0.8、0.4 g／kg）；灌胃給藥0.5 mL／只，每天1次，連續(xù)7 d。

2.3.1 氨水致小鼠咳嗽法 據(jù)參考文獻方法［7］，末次給藥1 h后，吸取濃氨水（濃度為25%～28%）0.5 mL，注入盛有50 mL蒸餾水的小燒杯中，外扣3000 mL的大燒杯，飽和10 min后，將小鼠置于3000 mL的大燒杯內(nèi)并開始計時，每次1只，觀察記錄小鼠2 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)（小鼠咳嗽時表現(xiàn)以腹肌收縮、張口呼吸、發(fā)出典型咳嗽聲為指標(biāo)），按如下公式，計算咳嗽的抑制率，以此評價藥物的止咳效果：

2.3.2 小鼠氣管段酚紅法［8］用分析天平稱取酚紅25 mg置250 mL的容量瓶中，加蒸餾水溶解，分別精密吸取1、2、3、4、5、6 mL置10 mL容量瓶中，加蒸餾水定溶，再分別吸取0.5 mL置10 mL帶塞試管中，加2 mol／L NaOH 5 mL搖勻，于分光光度計546 nm處檢測OD值。以酚紅濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，根據(jù)酚紅濃度和OD值計算出回歸方程，繪制酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線。

末次給藥30 min后，腹腔注射0.5%酚紅生理鹽水溶液0.5 mL，注射后30 min，處死小鼠，剪取氣管，將各氣管段放入預(yù)先盛有4 mL 5%NaHCO3溶液試管中，靜置1 h，后于分光光度計492 nm處測OD值，置4℃存放24 h后，重測OD值，取二者平均值，根據(jù)回歸方程計算出酚紅的含量。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS10.0 for Windows統(tǒng)計分析軟件進行處理，實驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗進行兩兩比較，P＜0.05差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的解熱作用 結(jié)果見表1，注射LPS后，0.5、1 h各給藥組大鼠體溫變化不大；1 h后模型組體溫開始持續(xù)升高，12 h后溫度開始恢復(fù)正常。其中，中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的高劑量、中劑量組的體溫變化整體水平最低，且變化平穩(wěn)，與模型組比較，在不同時間點1、1.5、3、4、5.5、7、9 h差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），降溫效果與阿司匹林組相近，比雙黃連組好；低劑量組在1、4、9 h時，與模型組相比，有顯著性差異（P＜0.05），降溫效果不如阿司匹林組、雙黃連組。

表1 連花柴芩可溶性粉對LPS致大鼠發(fā)熱的影響體溫／℃（±s）

表1 連花柴芩可溶性粉對LPS致大鼠發(fā)熱的影響體溫／℃（±s）

與模型組比較，同列字母不同表示差異顯著（P＜0.05）

處理／h空白對照組模型組阿司匹林組雙黃連組高劑量組中劑量組低劑量組0.537.5±0.427a37.9±0.385ab37.8±0.185ab37.5±0.272ab37.7±0.245ab38.0±0.582b37.8±0.185ab 137.3±0.219a38.6±0.223d37.3±0.397a37.5±0.533ab37.3±0.397a37.7±0.588abc37.9±0.089bc 1.537.6±0.290a39.1±0.183d37.8±1.015ab38.2±0.366bc38.3±0.549bc38.4±0.207c39.0±0.470d 237.6±0.354a39.0±0.602c38.1±1.077ab38.1±0.385ab38.4±0.462bc38.8±0.562c38.9±0.189c 337.6±0.488a39.3±0.669c39.3±0.669c39.3±0.669c38.2±0.523ab38.3±0.417b39.0±0.286c 437.6±0.103a39.5±0.606d38.0±0.864ab38.1±0.791abc38.5±0.253bc38.7±0.432bc38.7±0.423c 5.538.2±0.232a39.4±0.393c38.5±0.767ab38.5±0.184ab38.4±0.297a38.4±0.261a39.0±0.557bc 738.7±0.240ab39.6±0.508c38.5±0.894a39.1±0.207bc38.5±0.517a38.5±0.303a39.5±0.412c 938.7±0.232ab39.4±0.390c38.5±0.513a38.9±0.232ab38.6±0.320ab38.6±0.151ab39.0±0.293b 1238.0±0.526a37.7±0.475a37.7±0.471a37.5±0.443a37.7±0.483a37.5±0.628a37.7±0.325a

3.2 中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的止痛效果 結(jié)果見表2，各給藥組都有抑制小鼠扭體反應(yīng)的作用，使小鼠的扭體次數(shù)明顯減少，與模型組相比，復(fù)方連花柴芩可溶性粉的高、中、低劑量組差異顯著（P＜0.05），其高劑量組的鎮(zhèn)痛效果最好，鎮(zhèn)痛率達34.81%，優(yōu)于地塞米松組和雙黃連組。

表2 連花柴芩可溶性粉對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s）

表2 連花柴芩可溶性粉對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（±s）

與模型組比較，同列字母不同表示差異顯著（P＜0.05）

組別鎮(zhèn)痛率／%20 min內(nèi)扭體數(shù)

3.3 中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的止咳效果 結(jié)果見表3，復(fù)方連花柴芩可溶性粉對氨水致小鼠咳嗽具有明顯的止咳作用，與空白對照組相比，復(fù)方連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、右美沙芬組都有顯著性差異（P＜0.05），能夠顯著減少咳嗽次數(shù)；高、中劑量組抑制率達36.82%和31.48%，高、中劑量組止咳效果與右美沙芬組相當(dāng)。

表3 連花柴芩可溶性粉對氨水致小鼠咳嗽的影響（±s）

表3 連花柴芩可溶性粉對氨水致小鼠咳嗽的影響（±s）

與空白對照組比較，同列字母不同表示差異顯著（P＜0.05）

組別抑制率／%2 min內(nèi)咳嗽次數(shù)空白對照組—55.67±6.89d右美沙芬組28.4539.83±6.21ab高劑量組36.8235.17±3.31a中劑量組31.4838.33±4.23a低劑量組20.3744.33±1.97bc

3.4 中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉的祛痰作用

3.4.1 根據(jù)酚紅濃度和OD值繪制的酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖1。并根據(jù)如圖所示的回歸方程計算小鼠氣管酚紅的排泌量。

圖1 酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3.4.2 結(jié)果見表4，復(fù)方連花柴芩可溶性粉能夠加速小鼠氣管段酚紅的分泌，與空白對照組相比，高、中劑量組、氯化銨組均有顯著性差異（P＜0.05），其中高劑量組效果最好。

表4 連花柴芩可溶性粉對小鼠氣管段酚紅分泌量的影響（±s）

表4 連花柴芩可溶性粉對小鼠氣管段酚紅分泌量的影響（±s）

與空白對照組比較，同列字母不同表示差異顯著（P＜0.05）

組別OD值酚紅分泌量空白對照組0.1006±0.0277a0.7095±0.2670a氯化銨組0.1499±0.0603bc1.1837±0.5808bc高劑量組0.1805±0.0560c1.4785±0.5389c中劑量組0.1569±0.0389bc1.2516±0.3746bc低劑量組0.1338±0.0446ab1.0288±0.4292ab

4 討論

連花柴芩可溶性粉根據(jù)中醫(yī)辨證論治原則，采用“疏散肺衛(wèi)風(fēng)熱、清解氣分高熱、調(diào)和營衛(wèi)”的總體治療原則，由連翹、金銀花、柴胡、黃芪和竹葉等多種中藥材配制而成。本研究根據(jù)該藥的功能進行了解熱、鎮(zhèn)痛、止咳祛痰等藥效學(xué)試驗，設(shè)置高、中、低三個劑量組，為新藥研發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

文獻報道，外源性致熱因子LPS是一種有代表性的細菌致熱原，作用機體可激活產(chǎn)生和釋放內(nèi)源性致熱源細胞，引起體溫調(diào)定點上移，產(chǎn)熱增加，散熱減少，使體溫升高［9］。LPS誘導(dǎo)的發(fā)熱模型，伴有精神萎靡，輕微腹瀉等癥狀。試驗結(jié)果顯示，與模型組比較，各給藥組均有不同程度的降低作用，其中，中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉高劑量、中劑量組的體溫變化整體水平最低，在七個時間點均低于模型組，差異顯著（P＜0.05），降溫效果與阿司匹林組相近，比雙黃連組好。說明連花柴芩可溶性粉具有對抗外源性致熱因子引起機體發(fā)熱。

鎮(zhèn)痛試驗中，腹膜有廣泛的感覺神經(jīng)分布，將醋酸注射小鼠腹腔，引起腹腔深部大面積較持久的疼痛刺激，致使小鼠產(chǎn)生“扭體反應(yīng)”，通過扭體次數(shù)和鎮(zhèn)痛率來判定藥物的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果顯示，連花柴芩可溶性粉三個劑量對醋酸致小鼠腹部疼痛具有明顯的抑制作用，與模型組相比差異顯著（P＜0.05），作用呈劑量依賴關(guān)系，高劑量組作用效果最好，優(yōu)于地塞米松組、雙黃連組。說明連花柴芩可溶性粉具有對抗化學(xué)性刺激引起機體疼痛的作用。

目前研究發(fā)現(xiàn)，有多種因素能引起咳嗽［10］。本研究止咳試驗中，采用化學(xué)物質(zhì)氨水刺激小鼠呼吸道粘膜上的感受器引起咳嗽。祛痰試驗中，用指示劑酚紅給小鼠腹腔注射后，可部分地由支氣管排泄，制成祛痰模型。試驗結(jié)果表明，連花柴芩可溶性粉高、中劑量組，與空白對照組比較，都有顯著性差異（P＜0.05），且高劑量組止咳、祛痰效果最好，優(yōu)于氯化銨組、右美沙芬組，中劑量組效果與氯化銨組、右美沙芬組相似，表明中藥復(fù)方連花柴芩可溶性粉具有止咳祛痰的作用。

連花柴芩可溶性粉以清熱解毒與和解少陽，阻斷病情發(fā)展，祛邪外出［11］。與孟慶娟［12］報道中藥復(fù)方灌注劑的鎮(zhèn)痛效果，劉濤等［13］報道消炎利膽口服液的鎮(zhèn)痛效果相似，但解熱效果不如連花柴芩可溶性粉效果明顯；與梁祝［7］報道白沙顆粒的止咳效果相似，祛痰效果不如連花柴芩可溶性粉有優(yōu)勢；與金曉玲［14］報道佛手醇提取液的祛痰作用相似，但該方是以中藥為原料制成的純中藥復(fù)方新劑型，便于生產(chǎn)和儲存，成本低，試驗表明其可以對抗不同因素引起的炎癥，且無不良反應(yīng)，作用效果明顯，值得開發(fā)與投入應(yīng)用。本研究通過解熱、鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰等指標(biāo)探討了連花柴芩可溶性粉的主要藥效作用，為其作為新藥研發(fā)及進一步的臨床試驗提供了科學(xué)依據(jù)。

［1］ 陳巧謀，黃禮杰，王煒.銀翹散的臨床應(yīng)用與藥理實驗研究［J］.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報，2003，9（9）：37-39.

［2］ 唐黎明，宋海林.銀翹散的現(xiàn)代應(yīng)用及研究進展［J］.中外醫(yī)療，2010，29（11）：133-134.

［3］ 張保國，李昌勤，劉慶芳.小柴胡湯現(xiàn)代藥效學(xué)研究［J］.中成藥，2010，32（4）：648-651.

［4］ 楊勇，容蓉，盧兗偉，等.四物湯及其各單味藥對小鼠自由基代謝及免疫功能影響的比較研究［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2002，26（4）：299-300.

［5］ 吳麗霞，吳鐵松，鄭敏.陸英煎劑對小鼠鎮(zhèn)痛作用的實驗研究［J］.今日藥學(xué)，2012，22（8）：481-483.

［6］ 周家茂，嚴奉祥，全建設(shè).活絡(luò)健骨膠囊鎮(zhèn)痛試驗的藥效學(xué)研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2006，13（4）：25-27.

［7］ 梁祝，張永萍，曹國瓊，等.白沙顆粒鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的實驗研究［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，34（3）：20-22.

［8］ 肖佳音，陳志英，馬輝.石川化痰散祛痰鎮(zhèn)咳作用的實驗研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2011，39（3）：41-42.

［9］ 蔣玉鳳，張丹卉，黃啟福，等.清開靈對內(nèi)毒素性發(fā)熱家兔解熱機制研究［J］.中醫(yī)藥實驗研究，2003，26（5）：53.

［10］Irwin R S，Madison J M.The diagnosis and treatment of cough［J］.The New England Journal of Medicine，2000，343（23）：1715-1721.

［11］鄧海英，江珍玉，康四和.柴芩雙解顆粒藥效學(xué)研究［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2009，22（1）：70-71.

［12］孟慶娟，馮士彬，李志明，等.中藥復(fù)方灌注劑治療奶牛乳房炎的藥效與應(yīng)用安全性研究［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（9）：1846-1850.

［13］劉濤，王紅麗，宋京都，等.消炎利膽口服液解熱鎮(zhèn)痛實驗研究［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2009，11（8）：1350-1351.

［14］金曉玲，徐麗珊，何新霞.佛手醇提取液的藥理作用研究［J］.中國中藥雜志，2002，27（8）：604-606.

（編輯：陳希）

Study on Antipyretic，Analgesic，Antitussive and Expectorant Effects of Lian-hua-chai-qin Soluble Powder

WANG Shuang-shuang1，ZHANG Jun1，DU Fang-fang2，LI Xiao3，HU An-jun1，ZHAO Ya4，WANG Xue-bing1，2，ZHANG Hong-ying1，2?
（1.College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450000，China；2.Key laboratory for Animal-derived Food Safety of Henan Province，Zhengzhou 450000，China；3.Henan Plant Natural-products Development Engineering Technology Company，Zhengzhou 450002，China；4.Henan Zhong-ya-shen-peng Pharmaceutical technology Company，Zhengzhou 450061，China）

To study the antipyretic，analgesic，antitussive and expectorant effects of Lian-hua-chai-qin Soluble Powder（LHCQSP）to provide reasonable experimental reference for clinical.The antipyretic activity was evidenced in fever rats induced by LPS.Analgesic activity was tested in mice induced by acetic acid.Antitussive effect was examined in mice induced by ammonia，the tracheal phenol red secretion test in mice was for expectorant activity.LHCQSP obviously depressed the temperature of fever rats（P＜0.05），decreased twist times of mice by 34.81%，32.59%and 27.31%，respectively（P＜0.05），reduced cough times of mice by 36.82%，31.48%and 20.37%，respectively（P＜0.05），increased the amount of secreting phenol red（P＜0.05）.This experiment shows that LHCQSP possess antipyretic，analgesic，antitussive and expectorant effects in model animal.

Lian-hua-chai-qin Soluble Powder；fever；ache；cough；phlegm

2015-03-08

A

1002-1280（2015）05-0027-05

S853.76

王雙雙，碩士研究生，從事中藥免疫調(diào)節(jié)作用方面研究。

張紅英。E-mail：hongyingnd＠163.com