竇曉壇 李 麗 謝 穎 鄒曉平

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一。近年來，雖然胃癌的發(fā)病率有所下降，但病死率仍較高［1］。目前晚期胃癌的治療以化學治療為主，用于胃癌的靶向治療藥物還較少［2］。由于胃癌是一種異質性很強的疾病，尋找與胃癌發(fā)病及預后相關的分子標志物顯得尤為重要［3］。

染色質重塑因子AT豐富結合域1 A（ARID1A）是SWI／SNF染色質復合物家族的重要成員，ARID1 A失活導致的染色質重塑可促進多種腫瘤的發(fā)生和進展，提示ARID1 A起到抑癌基因的作用［4］。目前有研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在胃癌中存在高頻突變，并與PIK3CA和TP53突變相關，提示ARID1 A在胃癌中起到重要作用［5］。

本研究旨在通過免疫組織化學檢測ARID1 A在胃癌中的表達情況，并分析其與臨床病理特征的關系，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為將其作為胃癌早期診斷、判斷預后的指標提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 資料

組織芯片購自上海卓立生物科技公司，包括2008年行手術切除的胃癌標本103例以及癌旁組織41例。其中男43例，女60例，年齡32～78歲，平均年齡58.6歲。所有患者術前均未進行任何化學治療和放射治療。根據(jù)TNM分期標準進行分期，Ⅰ～Ⅱ期59例，Ⅲ～Ⅳ期44例。有淋巴結轉移者56例，無轉移者47例。

1.2 免疫組織化學方法

標本作4μm厚度的連續(xù)切片，經脫蠟、水化處理后，檸檬酸鹽高溫高壓修復3 min，雙氧水30 min以阻斷外源性過氧化物酶，山羊血清37℃封閉20 min，兔抗人ARID1 A多克隆抗體（Abcam公司，1∶200稀釋，一抗）4℃過夜，山羊抗兔二抗（北京中杉金橋公司）37℃ 孵育40 min，DAB顯色，蘇木素復染，脫水透明封片。

1.3 結果判定

顯微鏡下計數(shù)ARID1 A陽性細胞，計算陽性表達的百分數(shù)。根據(jù)細胞染色百分率分別計分：無陽性細胞計0分，陽性細胞＜25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，＞75%計4分。根據(jù)染色強度分別計分：未染色計0分，弱染色計1分，中等染色計2分，強染色計3分。采用染色強度與細胞染色百分率評分相乘的計分方法，≤3分為陰性，＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。應用χ2檢驗分析與臨床病理特征的相關性，Kaplan－Meier單因素分析和Cox多因素分析來分析與預后的關系。

2 結果

2.1 ARID1 A在胃癌中的表達

在103例胃癌組織中，36例表達陽性，陽性率35.0%。而在41例癌旁組織中，23例表達陽性，陽性率56.1%。ARID1 A在胃癌組織中的陽性表達顯著低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1、圖2。

圖1 ARID1 A在胃癌中的表達

圖2 ARID1 A在癌旁組織中的表達

2.2 ARID1 A表達與臨床病理特征的關系

ARID1 A的表達與腫瘤大小、分化程度、淋巴結轉移和 TNM 分期呈負相關（P＜0.05），即ARID1 A在腫瘤體積大、低分化、有淋巴結轉移及Ⅲ～Ⅳ期的胃癌組織中表達較低，而其與性別、年齡、Lauren分型、腫瘤浸潤深度無關（P＞0.05）。見表1。

表1 ARID1A蛋白在胃癌中的表達與臨床病理特征的關系

2.3 ARID1A表達與預后的關系

Kaplan－Meier單因素分析顯示ARID1 A表達、腫瘤大小、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及分期與患者預后相關（P＜0.05），見圖3。Cox多因素分析結果顯示，ARID1 A表達是影響胃癌患者預后的獨立因素（P＜0.05），見表2。

3 討論

胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多種基因、多個步驟的復雜過程［6］。目前認為，腫瘤的發(fā)生不僅包括遺傳學的改變（即基因改變），如堿基插入或缺失，同時也包括表觀遺傳學改變。表觀遺傳學改變是指在基因核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達的可遺傳改變，其主要包括染色質重塑、DNA甲基化和非編碼RNA［7］。染色質重塑過程需要兩類復合物參與，一類是ATP依賴的染色質重塑復合物，另一類是蛋白質共價修飾復合物，如組蛋白乙?；?。ATP依賴的染色質重塑復合物由多種亞基組成，通過影響局部染色質結構而激活或抑制基因轉錄［8］，其中ARID1 A是重要的亞基之一。

圖3 胃癌患者預后分析

表2 胃癌患者多因素預后分析

ARID1 A屬于SWI／SNF重塑復合物成員，人ARID1 A基因定位于第1號染色體1p35.3，包含20個外顯子，編碼一個由2 285個氨基酸殘基構成，相對分子質量約240 000的蛋白質［9］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在許多腫瘤中有特異性的突變，如在卵巢透明細胞癌中有50%的突變，在33%的子宮內膜癌中也有突變［4，10］。研究表明 ARID1 A可能起到抑癌基因的作用。Katagiri等［11］運用免疫組織化學技術檢測ARID1 A在60例卵巢透明細胞癌中的表達，發(fā)現(xiàn)ARID1 A在腫瘤中出現(xiàn)表達缺失，與FIGO分期和CA125水平相關。預后分析提示ARID1 A表達是卵巢癌的獨立預后因素。

目前有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌中也存在ARID1 A的高頻突變，且這種突變在EB病毒感染和存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的胃癌亞型中頻率更高［5，12］。ARID1 A在胃癌中也起到抑癌基因的作用。Wang等［13］采用免疫組織化學和real－ti me技術檢測ARID1 A在胃癌中的表達，發(fā)現(xiàn)與非腫瘤組織相比較，ARID1 A在胃癌中的表達降低，并與T分期和分級相關，且預后分析提示ARID1 A是胃癌的獨立預后因素，Yan等［14］的研究也得出類似結論。但是 Wiegand等［15］的研究并未發(fā)現(xiàn)ARID1A是胃癌的獨立預后因素。本研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，ARID1 A在胃癌中的表達降低，且與腫瘤大小、分化程度、淋巴結轉移和TNM分期呈負相關，預后分析也發(fā)現(xiàn)ARID1 A是胃癌的獨立預后因子。以上研究提示ARID1 A可能參與胃癌的侵襲轉移。

目前對于ARID1 A對胃癌細胞生物學行為影響的機制研究還較少。Yan等［14］發(fā)現(xiàn)沉默ARID1 A后 E－鈣黏蛋白（E－cadherin）的表達也降低，熒光素酶報告基因和染色質免疫共沉淀（CHIP）顯示ARID1 A與CDH1（編碼E－cadherin）啟動子區(qū)結合，調控其轉錄。降低ARID1 A表達后，可促進胃癌細胞發(fā)生上皮間質轉化（EMT），從而促進其侵襲和轉移。ARID1 A是否對胃癌細胞的其他生物學行為有影響，如增殖、凋亡、血管形成等，尚需進一步研究。

綜上所述，ARID1A是胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要因子，與胃癌的侵襲轉移和預后密切相關，這可為研究胃癌的發(fā)生機制和尋找靶向治療靶點提供依據(jù)。

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