張小紅，肖 雪，梁 潔，史慶龍(.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 5066；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 50006；.中山大學(xué)南沙研究院，廣東 廣州 5458)

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HPLC法測定林芝地區(qū)丹參中丹參酚酸B含量

張小紅1，肖 雪2,3，梁 潔2*，史慶龍3
(1.廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校，廣東 廣州 510663；2.廣東藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；3.中山大學(xué)南沙研究院，廣東 廣州 511458)

目的：采用高效液相色譜(HPLC)法測定林芝地區(qū)產(chǎn)丹參不同部位中丹參酚酸B的含量。方法：采用HPLC法，色譜柱為Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相為甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶59∶30∶10)，等度洗脫；流速為1mL/min；檢測波長為286nm；柱溫為25℃。結(jié)果：丹參酚酸B含量測定的線性范圍為0.039 6～0.792mg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 0，平均加樣回收率為99.40%。結(jié)論：丹參莖、葉中均含有丹參酚酸B，可以進行相應(yīng)資源的開發(fā)。

丹參；丹參酚酸B；含量測定；HPLC

丹參為唇形科植物SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩、涼血消癰等功效[1]，經(jīng)組方配伍后廣泛用于治療心腦血管疾病[2-4]。丹參目前多以丹參酚酸類成分為主要研究對象[5-7]。本文主要研究多個產(chǎn)區(qū)丹參中的主要指標(biāo)成分丹參酚酸B的含量。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260 series LC液相色譜系統(tǒng)(包括：二元梯度泵、二極管陣列檢測器、柱溫箱、Chemstation化學(xué)工作站等)(美國安捷倫科技有限公司)，MJ-33快速水分測定儀(梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司)，XS205型電子天平(d=0.01mg，梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司)，SL300N型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，XJD250B型微型高速粉碎機(姜堰市銀河儀器廠)，Milli-Q超純水儀(默克密理博公司)。

1.2 材料

丹參酚酸B(批號111562-201313)對照品(購于中國食品藥品檢定研究院)；甲醇、乙腈(色譜純，德國默克集團)，其他試劑為分析純(北京現(xiàn)代東方精細(xì)化工有限公司)。

丹參全草于2014年9月底采自西藏自治區(qū)林芝地區(qū)，經(jīng)鑒定為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)。按照炮制方法，分別得到含水量≤13%的丹參藥材(根莖)、丹參莖、丹參葉，其中莖、葉為丹參根莖剩余部分的混合樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱為Phenomenex C18柱(4.60mm×250mm，5μm)；流動相為甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶59∶30∶10)，等度洗脫；洗脫時間：15min；流速為1mL/min；檢測波長為286 nm；柱溫為25℃；進樣量：5μL。

2.2 丹參酚酸B對照品溶液制備

精密稱取丹參酚酸B對照品7.92mg，置于10mL容量瓶中，用75%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品母液。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液各取適量置于10mL容量瓶中，加入75%甲醇溶液至刻度，搖勻配制成一系列不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取丹參粉末(過3號篩)約0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用75%甲醇補足缺失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 空白干擾試驗

取供試品溶液、丹參酚酸B對照品溶液和缺丹參的空白液，各進樣5μL，結(jié)果表明丹參酚酸B對照品溶液和供試品溶液均呈現(xiàn)吸收峰，而缺丹參空白液在與對照品相應(yīng)的位置上沒有色譜峰出現(xiàn)(見圖1)，表明本測定無干擾。

圖1 丹參色譜

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取丹參酚酸B對照品溶液，分別進樣5μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。以丹參酚酸B對照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=4 994.9x-10.765，R2=0.999 0，丹參酚酸B在0.039 6～0.792mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

取同一對照品連續(xù)進樣6次，結(jié)果丹酚酸B含量的RSD為0.8%，說明本方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取丹參藥材(根)按照供試品制備方法平行制備供試品6份，結(jié)果丹參酚酸B含量的RSD為3.0%，說明本方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、24h進樣，結(jié)果丹參酚酸B含量的RSD為1.1%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同一組丹參藥材，加入各成分對照品適量，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進行分析。結(jié)果顯示，丹參酚酸B的平均加樣回收率分別為99.40%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果 (%)

2.10 樣品測定

按照供試品溶液的制備方法制備丹參根、莖葉樣品，按照上述色譜條件測定，計算含量，結(jié)果見表2，其中干品是扣除了水分之后的含量。

表2 丹參不同部位丹參酚酸B含量 (%)

3 討論

本試驗按照藥典方法提取丹參藥材、丹參莖、丹參葉中的丹參酚酸B，按照藥典方法對丹參酚酸B進行了色譜分析，所選方法經(jīng)典。丹參藥材中水分的測定采用了梅特勒-托利多MJ-33快速水分測定儀。

由表2可知，同處于林芝地區(qū)，所采集的丹參藥材(丹參根)和干品中所含丹參酚酸B的含量差別較小，其RSD分別為13.4%和13.6%，提示該地區(qū)丹參質(zhì)量穩(wěn)定性較好，丹參中所含水分均≤10.0%，滿足藥典要求。9月份采集的丹參莖和丹參葉中也含有相當(dāng)濃度的丹參酚酸B，表明丹參莖、葉存在一定的開發(fā)價值，也擴大了丹參酚酸類成分的來源。

本試驗檢測了林芝地區(qū)多個產(chǎn)地丹參中丹參酚酸B的含量，為后期丹參的深度研究，如不同生長期丹參不同部位(花、葉、莖、根、種子)中丹參酚酸B的含量測定提供了研究基礎(chǔ)，也為丹參植物資源的綜合開發(fā)提供了有效的數(shù)據(jù)支持。

[1] 國家藥典委員會.中國人民共和國藥典[M].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：71-72.

[2] 范雪梅.中藥復(fù)方雙龍方作用機理的系統(tǒng)生物學(xué)研究[D].上海：華東理工大學(xué)，2010.

[3] 李翔，吳磊宏，范驍輝，等.復(fù)方丹參方主要活性成分網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[J].中國中藥雜志，2011，36(21)：2911-2915.

[4] 馬丙祥，董寵凱. 丹參的藥理作用研究新進展[J].中國藥房，2014，25(7)：663-665.

[5] 薛靜，葉正良，李德坤，等. HPLC同時測定丹參多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(3)：70-73.

[6] 盧君蓉，傅超美，劉芳，等. 星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)選丹參中丹參總酚酸的提取工藝[J].中成藥，2012，34(7)：1373-1376.

[7] 林徐劍，沈瑩，施曉萍.丹參原藥材和飲片與不同溫度的水接觸后丹酚酸B的含量變化[J].中國藥學(xué)雜志，2014，49(17)：1506-1507.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of Salvianolic Acid B ofSalviamiltiorrhizaBge. Collected from Nyingchi Prefecture by HPLC

Zhang Xiaohong1, Xiao Xue2,3,Liang Jie2*,Shi Qinglong3
(1.Guangdong Food and Drug Vocational-Technical School, Guangzhou 510663，China;2.Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006，China;3.Nansha Research Institute, Sun Yat-sen University，Guangzhou 511458，China)

Objective:To establish a method for Salvianolic acid B forSalviamiltiorrhizaBge. Methods:The Phenomenex C18analytical column (4.60 mm×250 mm, 5μm) was used. The mobile phases comsisted of Formic acid, H2O, Methanol and Aacetonitrile (1∶59∶30∶10) with isocratic elution. The flow rate was 1 mL/min, the detection wavelength was at 286 nm and the column temperature was at 25℃.Results:The method had good linear relationship within the range 0.0396～0.792 mg/mL of Salvianolic acid B, with the correlation coefficent higher as 0.999 0. The average recovery was 99.40% of Salvianolic acid B.Conclusion:There were certain concentrations of Salvianolic acid B in stem and leaves ofSalviamiltiorrhizaBge.

SalviamiltiorrhizaBge.；Salvianolic acid B；Determination;HPLC

2015-01-07

張小紅(1979-)，女，廣東省食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)校講師，研究方向為中藥質(zhì)量控制。

梁潔(1969-)，女，廣東藥學(xué)院副教授，研究方向為中藥質(zhì)量控制與安全評價。E-mail：liangjie69@126.com

R284.2

A

1673-2197(2015)11-0045-02

10.11954/ytctyy.201511018