張 美，胡昌江*，崔園園，熊 瑞，陳志敏，李文兵

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,四川 成都 611137; 2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司,四川 成都 611930)

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經(jīng)方配方顆粒平胃散中揮發(fā)油提取及包合工藝研究

張 美1，胡昌江1*，崔園園1，熊 瑞1，陳志敏1，李文兵2

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,四川 成都 611137; 2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司,四川 成都 611930)

目的：優(yōu)選經(jīng)方配方顆粒平胃散揮發(fā)油的提取與包合工藝并考察包合物的穩(wěn)定性。方法：采用L9(34)正交試驗法，以加水量、蒸餾時間、浸泡時間為考察因素，以揮發(fā)油提取量為評價指標(biāo)，優(yōu)選揮發(fā)油最佳提取工藝；以揮發(fā)油與β-環(huán)糊精(β-CD)的比例、包合時間、包合溫度為考察因素，以揮發(fā)油利用率、包合率為綜合評分指標(biāo)，優(yōu)選最佳包合工藝；用薄層色譜法(TLC)檢測包合質(zhì)量，對包合物進行光、熱、濕穩(wěn)定性考察。結(jié)果：最終確立揮發(fā)油的提取工藝為：10 倍量水浸泡0.5h，水蒸氣蒸餾6h；揮發(fā)油包合工藝為：揮發(fā)油與β-CD的比例為1∶8(V∶m)，30 ℃下攪拌包合90min。結(jié)論：優(yōu)選出的經(jīng)方配方顆粒平胃散揮發(fā)油提取工藝與包合工藝穩(wěn)定、合理、可行。

平胃散；揮發(fā)油；β-CD；提取工藝；包合工藝

平胃散始載于宋代《太平惠民和劑局方》，由蒼術(shù)、厚樸、陳皮、甘草組成，具有燥濕運脾、行氣和胃的功效，是治療脾胃濕滯的基礎(chǔ)方?，F(xiàn)代常用于治療慢性胃炎、消化道功能紊亂、胃及十二指腸潰瘍等[1]。傳統(tǒng)湯劑費工費時，自行煎熬質(zhì)量不穩(wěn)定，攜帶服用不方便，制備成配方顆?？朔艘陨喜蛔?。據(jù)報道平胃散中揮發(fā)油是促進胃排空的有效成分[2]，但不穩(wěn)定，因此，本文通過正交試驗優(yōu)化平胃散中揮發(fā)油的提取及包合工藝，以保證配方顆粒的藥效。

1 材料

1.1 儀器

ZDHW 型控溫電熱套(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；KQ-300E 型超聲波清洗儀(昆山市儀器有限公司)；DZF-6051 型真空干燥箱(上海將任實驗設(shè)備有限公司)；YP30002 型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；78-1 磁力恒溫攪拌器(金壇市醫(yī)療儀器廠)。

1.2 藥材

麩炒蒼術(shù)、姜炙厚樸、陳皮、甘草均由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.) DC.的干燥根莖，厚樸為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.的干燥干皮，陳皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco的干燥成熟果皮，甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根。

1.3 試劑

β-環(huán)糊精(β-CD，成都市科龍化工試劑廠，批號：20131025)；水為純凈水；石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取工藝研究

2.1.1 正交試驗設(shè)計 根據(jù)預(yù)試驗，影響揮發(fā)油提取的因素主要有加水量、浸泡時間、蒸餾時間。因此以加水量(A)、浸泡時間(B)和蒸餾時間(C)為考察因素，每因素設(shè)三個水平，以揮發(fā)油提取量為評價指標(biāo)，進行L9(34)正交試驗。因素水平見表1。

表1 因素水平

2.1.2 揮發(fā)油提取方法 照《太平惠民和劑局方》中平胃散原方比例，稱取麩炒蒼術(shù)120g、姜炙厚樸90g、陳皮60g、甘草30g，參照2010年版《中華人民共和國藥典》(簡稱《藥典》)[3](一部)附錄ⅩD 揮發(fā)油測定法項下甲法提取揮發(fā)油。提取至規(guī)定時間，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉脫水，得干燥黃色揮發(fā)油，稱定質(zhì)量，計算所得揮發(fā)油的體積(相對密度為0.95g·mL-1)。將其避光、低溫貯藏，備用。

2.1.3 正交試驗結(jié)果 采用SPSS 19.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析[4]，結(jié)果蒸餾時間為顯著性因素，且C>A>B，最佳提取工藝為A3B1C3，即加10倍量水，浸泡0.5h后，提取時間6h。正交試驗結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

2.1.4 驗證試驗 稱取蒼術(shù)120g、厚樸90g、陳皮60g、甘草30g(n=3)，置于圓底燒瓶中，加10倍量水，浸泡0.5h，水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油6h。結(jié)果揮發(fā)油提取量分別為1.04、1.05、1.04mL。結(jié)果表明，驗證試驗結(jié)果與正交試驗結(jié)果一致，表明優(yōu)選的平胃散揮發(fā)油提取工藝穩(wěn)定可行。

表2 正交試驗結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

2.2 揮發(fā)油包合工藝研究

2.2.1 正交實驗設(shè)計 以包合溫度(A)、揮發(fā)油與β-CD 的比例(B)、包合時間(C)為考察因素，每個因素設(shè)三個水平，進行L9(34)正交試驗，以揮發(fā)油利用率和包合率為綜合指標(biāo)，優(yōu)選揮發(fā)油的包合工藝。因素水平見表4。

表4 因素水平

2.2.2 包合物制備 精密量取揮發(fā)油1mL，加95%乙醇制成揮發(fā)油的乙醇溶液。另精密稱取規(guī)定量的β-CD，置于具塞三角燒瓶中，加入適量水，制成規(guī)定溫度下的飽和水溶液，在一定轉(zhuǎn)速下緩慢加入揮發(fā)油的乙醇溶液，磁力攪拌(經(jīng)過預(yù)試驗得出常用的包合方法攪拌法和超聲法所得的包合物的利用率和包合率無明顯區(qū)別,故選擇更為方便的攪拌法)至規(guī)定時間，冷藏放置24h(5℃)，抽濾，再加適量石油醚、水分別洗滌至無揮發(fā)油味[5]，抽濾，真空干燥(40℃)，恒重后即得包合物。

2.2.3 揮發(fā)油空白回收試驗 取揮發(fā)油的95%乙醇溶液(油∶醇=1∶1，V/V)4 mL，置于250mL圓底燒瓶中，加蒸餾水150mL，加熱提取至揮發(fā)油體積不再增加為止。測得提取的平均揮發(fā)油量為1.97mL(n=3)，揮發(fā)油的空白回收率為98.5%。

2.2.4 揮發(fā)油利用率與包合率測定 取“2.2.2”項下?lián)]發(fā)油包合物，精密稱定質(zhì)量，置于500mL 圓底燒瓶中，加入蒸餾水300mL，參照《藥典》(一部)附錄揮發(fā)油測定法項下甲法提取揮發(fā)油的實際含量，分別以下式計算揮發(fā)油利用率和包合率。揮發(fā)油利用率=包合物中實際揮發(fā)油的量/(投油量×空白回收率)×100%；包合率=包合物實際重量/(β-CD 投入量+投油量)×100%。將上述兩個指標(biāo)進行綜合評分[6]。

2.2.5 正交試驗結(jié)果 采用SPSS 19.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析[4]，油與β-CD 的比例和包合溫度為顯著性因素，且B>A>C，最佳包合工藝為A1B3C3，即揮發(fā)油與β-CD的比例為1∶8(V∶m)，30 ℃下控溫攪拌90min。正交試驗結(jié)果見表5，方差分析結(jié)果見表6。

表5 正交試驗結(jié)果

表6 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00。

2.2.5 驗證試驗 根據(jù)正交試驗優(yōu)選工藝，對揮發(fā)油進行包合工藝的驗證試驗(n=3)。結(jié)果，揮發(fā)油利用率分別為71.31%，71.05%，70.93%，包合率分別為92.50%，92.55%，92.48%，與正交試驗的最高值相當(dāng)，說明優(yōu)選的包合工藝合理、穩(wěn)定、可行。

3 質(zhì)量評價

3.1 揮發(fā)油包合物薄層色譜檢測

根據(jù)預(yù)實驗，展開劑：石油醚∶氯仿∶乙酸乙酯=20∶1∶1；顯色劑：5%香草醛；硅膠板：G板。樣品：1、2為揮發(fā)油石油醚溶液；3、4為揮發(fā)油-β-CD包合物乙醇溶液；5、6為揮發(fā)油-β-CD包合物石油醚溶液。結(jié)果：1、2 和3、4 色譜圖的斑點數(shù)、Rf值完全一致，而5、6 則無斑點(見圖1)，表明揮發(fā)油-β-CD包合物石油醚溶液中不含游離揮發(fā)油成分，揮發(fā)油與β-CD發(fā)生包合作用效果好。

圖1 平胃散揮發(fā)油薄層色譜

3.2 揮發(fā)油包合物熱穩(wěn)定性考察

分別精密稱取“2.2.2”項下?lián)]發(fā)油包合物12份(每份

相當(dāng)于投入相應(yīng)揮發(fā)油0.5mL)，分別置于25℃、40℃、60℃、80℃恒溫干燥箱內(nèi)[7]，于第0、1、3、5、10天取樣，測定取出樣品的揮發(fā)油含量，計算包合物中揮發(fā)油的損失率。結(jié)果，同一溫度下，隨著放置天數(shù)的增加，揮發(fā)油包合物中揮發(fā)油損失率逐漸增加，80℃下?lián)]發(fā)油損失率最明顯，從最初的22.63%增加至56.38%；相同天數(shù)內(nèi)，揮發(fā)油包合物中揮發(fā)油損失率隨溫度的升高而增加；儲存10天，當(dāng)溫度從25℃升高到80℃時，揮發(fā)油損失率從26.55%增加至56.38%。

3.3 揮發(fā)油包合物光穩(wěn)定性考察

分別精密稱取“2.2.2”項下?lián)]發(fā)油包合物3份(每份相當(dāng)于投入0.5 mL 的揮發(fā)油)。每份均照射10天，分別于第0、1、3、5、10天時取樣，計算包合物中的揮發(fā)油損失率。結(jié)果，揮發(fā)油包合物中揮發(fā)油損失率隨光照時間天數(shù)增加而逐漸增加，第10 天損失率達64.8%。

3.4 揮發(fā)油包合物濕穩(wěn)定性考察

分別精密稱取“2.2.2”項下?lián)]發(fā)油包合物6份(每份相當(dāng)于投入0.5mL揮發(fā)油)。取上述兩類物質(zhì)各3份置于裝有飽和NaCl 溶液(濕度75%)的密閉器皿中，再將該密閉容器置于40℃恒溫箱中，放置10天，分別于第0、1、3、5、10天取樣；相同條件下進行濕度95%的考察。計算包合物中揮發(fā)油的損失率。結(jié)果，揮發(fā)油包合物中揮發(fā)油的損失率在75%的濕度條件下比在95%濕度下低，其損失率最高為32.25%。3天以后揮發(fā)油損失率增長較大。

4 討論

本試驗根據(jù)平胃散所含揮發(fā)油是胃排空的有效成分，以水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，并進行包合，以提高配方顆粒的質(zhì)量和穩(wěn)定性，根據(jù)正交試驗，優(yōu)選出的經(jīng)方配方顆粒平胃散揮發(fā)油提取工藝為：10倍量水浸泡0.5h，水蒸氣蒸餾6h；其包合工藝為：揮發(fā)油與β-CD的比例為1∶8(V∶m)，30℃下攪拌包合90min。優(yōu)選出的揮發(fā)油提取工藝與包合工藝穩(wěn)定、合理、可行，為經(jīng)方配方顆粒的研究提供了思路。

[1] 李飛.方劑學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1564.

[2] 惠娜,魏玉輝,陳明,等.平胃散及其組方藥材揮發(fā)油的化學(xué)組成與大鼠胃排空促進作用[J].中成藥,2011,33(9):1592.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:235.

[4] 胡志潔.IBM SPSS Statistics 19.0 在揮發(fā)油提取工藝優(yōu)化中的應(yīng)用[J].計算機與應(yīng)用化學(xué),2013,30(4):418.

[5] 岳曉華,段秀俊,史利霞,等.風(fēng)濕寧膠囊中揮發(fā)油的提取及包合工藝優(yōu)選[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2013,19(5):22.

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

Research on Optimum Preparation Technology for Extraction Process and Inclusion Process of Volatile Oil from PingWeiSan by Orthogonal Design

Zhang Mei1，Hu Changjiang1*，Cui Yuanyuan1，Xiong Rui1，Cheng Zhiming1，Li Wenbing2

(1.College of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China; 2.Neo-green Pharmaceutical Co.LTD,Chengdu 611930,China)

Objective:To optimize the preparating technology for extraction process and inclusion process of volatile oil from PingWeiSan and investigate the stability of the inclusion compound.Methods:The study was carried out with L9(34) orthogonal design，using three indexes as the investigation factors,namely the added water,the distillation time and soaking time,volatile oil extraction amount as evaluation indicators to choose the best extraction process; using three indexes namely the proportion of volatile oil to β-cyclodextrin(β-CD)，stirring time and inclusion temperature as the investigation factors，to evaluate the volatile oil utilization efficiency，inclusion yield and inclusion oil content comprehensively，in order to select the best inclusion process.Thin layer chromatography (TLC) is used to inspect quality of inclusion in order to carry out light,heat,wet clathrate stability test.Results:Eventually the extraction process of volatile oil is:ten times the amount of water immersion 0.5 h,water vapor distillation 6 h; The volatile oil inclusion process:the volatile oil and β-CD ratio of 1∶8 (V∶m),and 30 ℃ under stirring package 90 min.Conclusion:The optimizated extraction and inclusion process of volatile oil is reasonable,feasible and available.

PingWeiSan； Volatile oil；β-CD；Extraction Process；Inclusion Process

2014-12-15

國家“十一五”科技支撐計劃“道地藥材大黃、厚樸、川貝母產(chǎn)品開發(fā)研究與示范”(2009BAI84B04)

張美(1989-)，女，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向為中藥炮制學(xué)。

胡昌江(1952-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，研究方向為中藥炮制原理與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:hhccjj@hotmail.com

R284.2

A

1673-2197(2015)09-0024-03

10.11954/ytctyy.201509010