王莎莎

(撫順市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧 撫順 113000)

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RP-HPLC法測(cè)定咳喘寧片中苦杏仁苷含量研究

王莎莎

(撫順市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧 撫順 113000)

目的：建立RP-HPLC法測(cè)定咳喘寧片中苦杏仁苷含量。方法：選用Agilent Eelipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm，柱溫30℃。結(jié)果：苦杏仁苷在0.071～0.702μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6，苦杏仁苷平均回收率為99.16%，RSD=0.93%。結(jié)論：采用RP-HPLC法可用于測(cè)定咳喘寧片中苦杏仁苷的含量，通過方法學(xué)考察驗(yàn)證，該方法精密度高、穩(wěn)定性良好，方法操作簡(jiǎn)便、可行性高。

咳喘寧片；苦杏仁苷；RP-HPLC法；含量

咳喘寧片具有宣通肺氣、止咳平喘之功效，可用于治療支氣管哮喘、咳嗽、老年痰喘等疾病。本研究運(yùn)用反相高效液相色譜法測(cè)定苦杏仁苷的含量[1-2]，為提高完善咳喘寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器

Agilent Eelipse高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，色譜工作站( 美國(guó)Agilent Eelipse公司); Agilent Eelipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；AB-135型萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 藥材與試劑

乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；甲醇(分析純，北京化工廠)，磷酸(分析純，北京化工廠)，水為超純水(浙江杭州娃哈哈集團(tuán))，其他所用試劑均為分析純?？嘈尤受諏?duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110820-201305)；咳喘寧片 (先聲藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20043845)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)。流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)207nm；柱溫30°C；進(jìn)樣量10μL，理論塔板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于7 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取苦杏仁苷對(duì)照品適量，加入甲醇溶液溶解，制成濃度為35μg /mL的苦杏仁苷溶液，備用[3]。

2.3 樣品溶液的制備

取咳喘寧片樣品適量，研細(xì)，精密稱取粉末1.021g，精密量取50mL甲醇溶液，加入錐形瓶中，稱重，超聲處理30min后取出，放涼后再次稱定樣品溶液和錐形瓶的總重量，計(jì)算缺失重量，并加甲醇補(bǔ)足，混勻，過濾，取濾液10mL移入50mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻，經(jīng)0.45μm的濾膜過濾，備用[4]。測(cè)定結(jié)果圖1、圖2。

圖1 對(duì)照品高效液相色譜

圖2 供試品高效液相色譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取苦杏仁苷對(duì)照品溶液0.071、0.175、0.351、0.527、0.702μg注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：Y=403 986X+305.71，R2=0.999 6。結(jié)果表明：在0.071～0.702μg線性范圍內(nèi)，樣品濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

圖3 苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度試驗(yàn)

吸取10μL精密量取“2.2”項(xiàng)配制的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄對(duì)照品苦杏仁苷峰面積積分值，并計(jì)算考察精密度，RSD值為0.27%。結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液5份，分別放置0、6、9、12、18、24h后，依

次進(jìn)樣10μL，測(cè)定苦杏仁苷峰面積值(n=6)，計(jì)算苦杏仁苷的含量。結(jié)果顯示：在24h內(nèi)RSD值為1.12%，表明該制劑在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)針，進(jìn)樣量為10μL，精密稱取“2.3”項(xiàng)咳喘寧片樣品溶液6份，分別測(cè)定峰面積值。結(jié)果顯示：苦杏仁苷含量RSD值為1.06%，表明該方法有較好重復(fù)性。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取同一批次咳喘寧片粉末共6份，精密加入對(duì)照品(濃度為35μg/mL)，依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率、RSD值。結(jié)果表明：樣品的平均回收率為99.16%，RSD值為0.93%，該法準(zhǔn)確性較好，方法可行。見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.9 含量測(cè)定結(jié)果

取3批咳喘寧片制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定含量，根據(jù)對(duì)照品與樣品的峰面積計(jì)算苦杏仁苷含量。結(jié)果表明：本品苦杏仁苷含量應(yīng)不低于0.244mg/g。結(jié)果見表2。

表2 樣品中苦杏仁苷含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

咳喘寧片由麻黃、苦杏仁、石膏、百部、桔梗等多味中藥組成，方中苦杏仁具有降氣、止咳、平喘等功效，臨床常用于治療咳嗽氣喘、胸滿痰多、腸燥便秘等疾病[5]。本研究建立RP-HPLC法測(cè)定咳喘寧片中苦杏仁苷含量，依據(jù)《中國(guó)藥典》(2010版)苦杏仁項(xiàng)的要求，并通過查閱大量參考文獻(xiàn)，采用TU-1810紫外-可見分光光度計(jì)在200～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定，對(duì)苦杏仁苷的70%乙醇溶液進(jìn)行紫外波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明苦杏仁苷在207nm處有最大吸收峰，與其他組分可較好分離，故其檢測(cè)波長(zhǎng)選擇為207nm?？嘈尤受諟y(cè)定流動(dòng)相選擇乙腈-0.1%磷酸水溶液(8∶92)、乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)兩種，其中以乙腈-0.05%磷酸水溶液(23∶77)作為流動(dòng)相，供試品色譜中苦杏仁苷峰型對(duì)稱，組分分離度較好，且苦杏仁苷峰與雜質(zhì)峰分離效果良好。

[1] 婁朝暄. 咳喘寧片中鹽酸麻黃堿含量的HPLC法測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2015,44(8):804-806.

[2] KOOJY，HWANG E Y，CHO S,et al.Quantitative determ ination of am ygdalin epimers from arm eniacae sem en by liquid chromatography[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2005, 814 (1):69-73.

[3] 吳向陽(yáng)，仰玲玲，仰榴青.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定野葛的根、莖和葉中苦杏仁苷、大豆苷和大豆苷元的含量[J].食品科學(xué),2009，30(14)：248-252.

[4] 寇凱,許寧俠,申燁華. 反相高效液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)柄扁桃仁產(chǎn)品中苦杏仁苷含量[J]. 分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29(3)：367-370.

[5] 劉睿,王寧,劉志輝. RP-HPLC同時(shí)測(cè)定宣肺止咳口服液中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿及苦杏仁苷含量[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(16)：91-93.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-06-26

王莎莎(1983—)，女，碩士，遼寧省撫順市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>

R286.0；R284.2

A

1673-2197(2015)22-0034-02

10.11954/ytctyy.201522014