王繼磊，陳云飛

(蒙城縣中醫(yī)院，安徽 蒙城 233500)

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HPLC法測定柴黃利膽和胃糖漿中黃芩苷含量

王繼磊，陳云飛*

(蒙城縣中醫(yī)院，安徽 蒙城 233500)

目的：建立柴黃利膽和胃糖漿中黃芩苷的含量測定方法。方法：采用HPLC法，色譜柱為依利特Hypersil ODS2柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為甲醇-水-磷酸(49∶51∶0.2)，檢測波長為276nm，柱溫為30℃，流速為1.0mL/min。結(jié)果：黃芩苷在0.302～2.42μg范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為97.48%，RSD=1.55%(n=6)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，可用于柴黃利膽和胃糖漿中黃芩苷的含量測定。

柴黃利膽和胃糖漿；黃芩苷；HPLC

柴黃利膽和胃糖漿是蒙城縣中醫(yī)院傳統(tǒng)制劑，由柴胡、法半夏、麩炒枳殼、陳皮、茯苓等十六味中藥組成，具有利膽和胃的功效，主要用于膽胃不和引起的口苦咽干、噯氣納呆、胃肋脹痛、頭暈等疾病的治療。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，選擇處方中君藥黃芩的有效成分黃芩苷作為檢測指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定其含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀(島津SPD-10A紫外檢測器、島津LC-10A泵)；JK-2200DB型數(shù)控超聲波清洗儀；黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院)；樣品自制(批號20140301，20140320，20140408)；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成15.1μg/mL的黃芩苷溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 精密量取供試品溶液10mL，置于100mL圓底燒瓶中，加入70%乙醇50mL，加熱回流3h，放冷，濾過，濾液置于蒸發(fā)皿中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾入同一蒸發(fā)皿中，蒸干。殘?jiān)?0%甲醇溶解，置于50mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 陰性對照溶液制備 取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備的不含黃芩原藥材的柴黃利膽和胃糖漿，按照供試品溶液制備方法同法操作即得。

2.2 色譜條件

色譜柱：依利特Hypersil ODS2柱(4.6mm×250mm,5μm)，流動相為甲醇-水-磷酸(49∶51∶0.2)，檢測波長為276nm，柱溫為30℃ ，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0mL/min。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

在“2.2”項(xiàng)下色譜條件下，分別精密量取黃芩苷對照品溶液、樣品溶液以及陰性樣品溶液各20μL進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上未出現(xiàn)色譜峰，陰性樣品溶液無干擾。見圖1。

圖1 柴黃利膽和胃糖漿HPLC色譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取黃芩苷對照品7.55mg，置于50mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密吸取黃芩苷對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以黃芩苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=0.970 3x+11.183，r=0.999 4。結(jié)果表明，黃芩苷在0.302～2.42μg范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取黃芩苷對照品溶液適量，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，連續(xù)測定6次，記錄峰面積積分值，RSD=1.43%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一樣品溶液，分別于放置0、2、4、6、8、10、12h進(jìn)樣測定，記錄峰面積積分值，結(jié)果表明被測樣品峰面積積分值RSD=0.85%，樣品溶液在12h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，按照“2.1.2“項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，求得峰面積積分值 RSD=0.86%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知黃芩苷含量(0.165mg/mL)的樣品6份，精密量取5mL，每份精密加入黃芩苷對照品溶液(濃度185μg/mL)5mL，按照“2.1.2“項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明平均回收率為97.48%，RSD=1.55%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定

取3批樣品，按照“2.1.2“項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，代入線性方程計(jì)算黃芩苷含量。結(jié)果表明，3批樣品黃芩苷含量分別為0.161mg/mL(批號20140301)、0.159mg/mL(批號20140320)、0.165mg/mL(批號20140408)。

3 討論

中華人民共和國藥典[1]規(guī)定，酒黃芩藥材中黃芩苷含量不得少于8.0%，制成制劑后每毫升黃芩苷含量不得少于0.2mg，考慮到藥材來源及工業(yè)化大生產(chǎn)的特點(diǎn)，柴黃利膽和胃糖漿中黃芩苷含量不得少于0.12mg/mL。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)考察的所有醫(yī)院制劑均符合要求。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:283.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Content Determination of Baicalin in Chaihuanglidanhewei Syrup by HPLC

Wang Jilei,Chen Yunfei*

(TCM Hospital of Mengcheng,Mengcheng 233500,China)

Objective:To establish the method for determination of Baicalin in chaihuanglidanhewei syrup.Methods:The HPLC method was used with Hypersil ODS2 column(4.6mm×250mm,5μm), The mixture of methanol water phosphoric(49∶51∶0.2) was the mobile phase, the flow rate was 1.0ml/min and the detection wavelength was at 276nm ,The column temperature was at 30℃.Results:The linear range of Baicalin was 0.302～2.42μg and the average recovery was 97.48% with RSD of 1.55%(n=6).Conclusion:Conclusion:This method is simple,accurate and can be used to determine the contents of Baicalin in chaihuanglidanhewei syrup.

Chaihuanglidanhewei syrup;Baicalin;HPLC

2015-06-16

王繼磊(1976-)，男，安徽省蒙城縣中醫(yī)院主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

陳云飛(1984-)，男，安徽省蒙城縣中醫(yī)院初級中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

R284.2

A

1673-2197(2015)22-0028-02

10.11954/ytctyy.201522011