鄭海群

(柳江縣中醫(yī)醫(yī)院 藥劑科，廣西 柳州 545100)

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雷公藤不同部位雷公藤甲素含量的測定

鄭海群

(柳江縣中醫(yī)醫(yī)院 藥劑科，廣西 柳州 545100)

目的：測定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量。方法：采用Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；檢測波長：218nm;流速：1.0mL/s；柱溫：25℃。結(jié)果：雷公藤甲素在2～80μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=27.295C-16.241(r=0.999 2)，加樣回收率為100.57%，RSD為0.50%；根部位含量為9.02μg/g，莖部位含量為10.90μg/g，葉部位幾乎沒有檢測到。結(jié)論：該方法可行、簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于測定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量。

雷公藤；雷公藤甲素；含量測定

雷公藤為衛(wèi)矛科植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook f.)的根，又叫斷腸草、紅藥、菜蟲藥、黃藤木等[1-2]，其性溫、味苦、有毒，主產(chǎn)地為福建、浙江、安徽等地。雷公藤具有抗炎、抗菌等多種生理活性[3-4]，臨床上主要用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、皮膚病、腎病等疾病。雷公藤甲素是雷公藤主要有效成分之一，也是雷公藤中的毒性成分。本研究旨在測定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量，為臨床合理用藥提供依據(jù)，具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

雷公藤藥材采于2014年7月廣西玉林藥材市場，經(jīng)我院藥劑科鑒定為雷公藤，雷公藤甲素標(biāo)準(zhǔn)品(購自中國食品藥品檢定研究院，純度≥98%)，乙腈、甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，氯仿為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

采用日本島津液相色譜儀(LC-20AT高壓輸液泵、紫外檢測器:SPD-20A、色譜工作站:N2010)；十萬分之一電子天平(CP225D，德國賽多利斯)；超聲清洗儀(AS3120，天津奧特賽恩斯)；恒溫水浴鍋(HH-S2系列，江蘇壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠)；真空干燥箱(DZF-6050型，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.3 方法

1.3.1 液相色譜條件 采用Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；檢測波長：218nm；流速：1.0mL/s；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：20μL。在該條件下，樣品中其他成分對雷公藤甲素的測定無干擾，見圖1。

1.3.2 樣品處理 將采到的雷公藤藥材按根、莖、葉分類，除去上面的塵土，用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，過80目篩子，備用。

1.3.3 供試品溶液的制備 分別取雷公藤藥材的根、莖、葉各8g，精密稱定，置于250mL的圓底燒瓶中，加入90mL的氯仿回流提取1.5h，冷卻，過濾，濃縮，水浴鍋上蒸干，得殘?jiān)Ｈ∵m量甲醇溶解殘?jiān)?，并定容?0mL容量瓶中，搖勻，用一次性針管吸取適量，并用0.45μm的微孔濾膜過濾至EP管中備用，該續(xù)濾液即為供試品溶液。

1.3.4 對照品溶液的制備 精密稱取雷公藤甲素對照品2mg，置于25mL容量瓶中，用適量甲醇溶解并定容，制成濃度為80μg/mL的溶液，備用。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密量取對照品儲備液0.125、0.5、2.0、4.0、5.0mL于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度并搖勻。經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，每個(gè)濃度平行進(jìn)針3次，每次進(jìn)樣量為20μL，以3次峰面積平均值作為縱坐標(biāo)，對照品濃度C為橫坐標(biāo)，得回歸方程為： A=27.295C-16.241(r=0.999 2)。結(jié)果表明：雷公藤甲素在2～80μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液 20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積并計(jì)算得RSD =1.50%( n=6)。表明該儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液20μL，分別于放置 0、4、8、12、16、20h后，注入液相色譜儀，記錄峰面積并計(jì)算得RSD=1.75%(n=6)。結(jié)果表明：供試品溶液在20h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取雷公藤藥材的根，按“1.3.3”項(xiàng)方法制備6份供試品溶液分別測定峰面積，并計(jì)算得RSD=1.75%(n=6)。結(jié)果表明：該方法重復(fù)性良好。

2.5 加樣回收率

精密稱取雷公藤藥材的莖6份，按“1.3.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，精密加入不同量的雷公藤甲素對照品制備不同質(zhì)量濃度溶液，進(jìn)樣20μL，并測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果顯示：平均回收率為100.57%，RSD為0.50 %(n=6)。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2.6 含量測定

按 “1.3.3”項(xiàng)方法分別制得雷公藤根部位供試品溶液、雷公藤莖部位供試品溶液、雷公藤葉部位供試品溶液，按“1.3.1”項(xiàng)色譜條件平行進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣 20μL，計(jì)算每個(gè)部位雷公藤甲素的含量。結(jié)果見表2。

表2 雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量

3 討論

在預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中，本研究采用不同的提取方法(超聲法、回流法[5]、煎煮法、浸漬法)進(jìn)行提取，結(jié)果顯示回流提取方法效果較好；在溶劑選擇方面，預(yù)實(shí)驗(yàn)選用氯仿和甲醇，結(jié)果顯示氯仿效果較好，故本研究以回流提取為提取方法、氯仿為溶劑。本研究結(jié)果顯示：該方法可行、簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于測定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量；莖部位幾乎沒有檢測到雷公藤甲素，在根部位和葉部位檢測到雷公藤甲素，且葉部位含量高于根，與孔乙銘[6]的研究結(jié)果基本一致。

因此，可有效利用雷公藤的根及葉部位提取雷公藤甲素，為臨床用藥提供來源基礎(chǔ)。雷公藤不同部位其他有效成分含量的高低有待進(jìn)一步研究，為今后合理利用藥材提供理論依據(jù)。

[1] 陳在敏,黃有霖,陳星.HPLC測定不同產(chǎn)地雷公藤中雷公藤甲素含量[J].海峽藥學(xué),2013,25(8):67-69.

[2] 劉玉鳳, 潘麗, 南麗紅,等.雷公藤藥理作用研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2014, 10(9): 37-40.

[3] CHEN XY,CHEN WL,MA M,et al.The potential of follicle-stimulating hormone peptide-modified triptolide-loaded nanoparticles to induce a mouse model of premature ovarian insufficiency.[J].Int J Nanomedicine,2015(10):2765-74.

[4] SANGWAN V,BANERJEE S,JENSEN KM,et al.Primary and Liver Metastasis-Derived Cell Lines From KrasG12D; Trp53R172H; Pdx-1 Cre Animals Undergo Apoptosis in Response to Triptolide[J].Pancreas,2015 ,44(4):583-9.

[5] 王艷芝.HPLC法測定雷公藤片中雷公藤甲素的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2010, 7(4):44-45.

[6] 孔乙銘,徐建中,王志安,等.HPLC 測定不同采收年限雷公藤根及不同部位雷公藤甲素含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2009,26(11):904-906.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Content Determination of Triptolide of Different Parts of Tripterygium

Zheng Haiquan

(TCM hospital of liujiang,liujiang 545100,China)

Objective:To determine the content of triptolide of different parts of Tripterygium.Methods:The Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm) column was used.The mobile phases consisted of Acetonitrile and water(30∶70), the detection wavelength was 218nm.and the flow rate was 1.0mL/min.The column temperature was25℃.Results:The linear concentration range of Diphen-hydramine Hydrochloride was at 5.82～58.20μg·mL-1((r=0.999 6).The average recovery was 100.57%, and RSD was 0.50%.The root site content was 9.02μg/g, the stems site content was 10.90μg/g and the leaves almost no parts detected.Conclusion:This method is feasible, simple, accurate and reproducible, which can be used to determination of triptolide of different parts of Tripterygium.

Tripterygium;Triptolide;Contentdetermination

2015-06-26

鄭海群(1974-)，女，廣西柳江縣中醫(yī)醫(yī)院主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幏治觥?/p>

R284

A

1673-2197(2015)22-0008-03

10.11954/ytctyy.201522004