姜 祎 徐 虹 李穩(wěn)柱 董桂穎 魏引平 張 明 王紅云 鄧 翀

陜西中醫(yī)藥大學(xué) （咸陽712046）

馬牙七為蘭科蝦脊蘭（Calanthe fimbriata Franch.）和劍葉蝦脊蘭（Calanthe davidii Franch.）的假鱗莖和根，具有清熱解毒的作用，民間用于慢性咽炎、肝炎、胃潰瘍的治療［1］，尚未見其抑菌作用的詳細(xì)研究。本研究以馬牙七為研究對象，采用瓊脂擴(kuò)散法［2－5］測定馬牙七提取物對金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、痢疾志賀氏菌、腸炎沙門菌、肺炎克雷伯氏菌、普通變形桿菌、生孢梭菌、大腸埃希氏菌、乙型溶血性鏈球菌的抑菌作用，為其開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與儀器 馬牙七，2013年8月采自陜西省漢中市城固縣，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，楊新杰（博士）鑒定為流蘇蝦脊蘭，取地下部分用于實(shí)驗(yàn)。羅紅霉素、阿莫西林購自聯(lián)邦制藥；金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、痢疾志賀氏菌、腸炎沙門菌、肺炎克雷伯氏菌、普通變形桿菌、生孢梭菌、大腸埃希氏菌、乙型溶血性鏈球菌購自上?；墼派锟萍加邢薰尽?/p>

1.1 馬牙七提取物的制備 1.1.1 馬牙七水提液的制備：稱取一定量的馬牙七，粉碎，取粗粉20g，加蒸餾水80mL，煎煮2h，過濾，濾液濃縮至4mL，濾膜過濾除菌，得到馬牙七水提液（5g／mL），裝入無菌試管中備用。

1.1.2 馬牙七正丁醇部位的制備：稱取一定量的馬牙七，粉碎，取粗粉20g，加60%乙醇80mL，回流提取2h，過濾，濾液濃縮至無醇味，加正丁醇萃取3次，回收正丁醇干燥，加蒸餾水得馬牙七正丁醇部位（5g／mL），裝入無菌試管中備用。

1.1.3 供試菌濃度測定：供試菌種經(jīng)傳代培養(yǎng)后，接種于（MH）肉湯培養(yǎng)基中，37℃恒溫箱培養(yǎng)6h，經(jīng)比濁法判定菌量后，再用MH肉湯稀釋至含菌量為105CFU／mL的菌懸液。

1.2 方 法 1.2.1 抑菌濃度：取MH肉湯培養(yǎng)基分裝于試管中，每只9mL，常壓滅菌后加入馬牙七水提取物、正丁醇部位、阿莫西林、羅紅霉素使MH肉湯培養(yǎng)基含藥濃度分別為0.4，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01g／mL，接種痢疾志賀氏菌實(shí)驗(yàn)菌液0.05mL（105CFU／mL），接種3皿；MH肉湯培養(yǎng)基接種痢疾志賀氏菌作為空白對照，于37℃恒溫箱培養(yǎng)18h，結(jié)果見表1。

表1 不同濃度馬牙七提取物對痢疾志賀氏菌的抑菌作用

1.2.2 馬牙七提取物抑菌作用的測定：取 MH肉湯培養(yǎng)基分裝于試管中，每只9mL，常壓滅菌后加入馬牙七水提取物、正丁醇部位使MH肉湯培養(yǎng)基含藥濃度為0.2g／mL；加入阿莫西林、羅紅霉素使MH肉湯培養(yǎng)基含藥濃度分別為0.05g／mL。然后接種金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、痢疾志賀氏菌、腸炎沙門菌、肺炎克雷伯氏菌、普通變形桿菌、生孢梭菌、大腸埃希氏菌、乙型溶血性鏈球菌實(shí)驗(yàn)菌液0.05mL（105CFU／mL），接種3皿，并以空白 MH 肉湯培養(yǎng)基，接種相同菌種作為對照。于37℃恒溫箱培養(yǎng)18 h，結(jié)果見表2。

表2 馬牙七提取物對細(xì)菌的抑菌作用

2 結(jié) 果 馬牙七提取物對痢疾志賀氏菌相對生長率的影響見表1。從表1可看出，隨著提取物濃度的增加，細(xì)菌的生長受到抑制，濃度為0.2g／mL時，馬牙七水提物、正丁醇部位對痢疾志賀氏菌完全抑制，抑菌效果與0.05g／mL的阿莫西林和羅紅霉素相當(dāng)。馬牙七提取物對金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、痢疾志賀氏菌、腸炎沙門菌、肺炎克雷伯氏菌、普通變形桿菌、生孢梭菌、大腸埃希氏菌、乙型溶血性鏈球菌的抑菌作用見表2。濃度為0.2g／mL時，從表2可看出，馬牙七水提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血鏈球菌有抑菌作用，抑菌作用與0.05g／mL的阿莫西林相當(dāng)；馬牙七正丁醇提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血鏈球菌和金黃色葡萄球菌有抑菌作用，抑菌作用與0.05g／mL的阿莫西林相當(dāng)。馬牙七水提物對痢疾志賀氏菌抑制效果優(yōu)于正丁醇部位，而正丁醇部位具有明顯的抗金黃色葡萄球菌效果，其抗金黃色葡萄球菌的有效成分集中在正丁醇部位。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明馬牙七不同溶劑的提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血鏈球菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用。

3 討 論 本實(shí)驗(yàn)采用體外抗菌試驗(yàn)測定馬牙七的抗菌作用，該方法簡便經(jīng)濟(jì)，廣泛用于初步篩選。馬牙七不同溶劑的提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血鏈球菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，而鏈球菌、葡萄球菌感染是引起咽炎的主要病因之一，且多出現(xiàn)耐藥性［4］，馬牙七民間用于咽炎的治療［1］，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與民間用藥吻合。體外實(shí)驗(yàn)證明馬牙七不同溶劑的提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血鏈球菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，需動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，其抗菌有效成分不明有待進(jìn)一步研究。

［1］ 宋小妹，劉海靜.太白七藥研究與應(yīng)用［M］.人民衛(wèi)生出版社，2011：28－29.

［2］ 王藝宙，方 凱，王 慧，等.嗜酸乳桿菌和酪酸梭菌協(xié)同抑制痢疾桿菌的活性研究［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2015，46（1）：117－122.

［3］ 董開忠，傅思武，楊世英，等.鐵棒錘提取物對常見腸道致病菌體外抑制作用［J］.中成藥，2015，37（1）：213－216.

［4］ 鄭申健，左滿鳳，舒瓊璋，等.新生兒感染性肺炎痰培養(yǎng)病原菌分布及耐藥性分析［J］.兒科藥學(xué)雜志，2015，21（2）：44－48.

［5］ 黃維真，寧小清，梁 紅，等.白花九里明抗菌和抗炎作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2015，31（1）：158－161.