王曉芳，楊春亮，林 玲，曾紹東

(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工質(zhì)量安全風(fēng)險評估實(shí)驗(yàn)室(湛江)，廣東湛江 524001)

啶蟲脒屬新煙堿類高效廣譜殺蟲劑，具有強(qiáng)烈的觸殺、胃毒作用，可廣泛用于防治果樹、棉花、蔬菜上各種刺吸式口器害蟲。持效期長，殘效期可達(dá)20 d之久。目前對啶蟲脒農(nóng)藥的使用也越來越廣泛和普遍，水稻上也在普遍使用該農(nóng)藥，2012年美國環(huán)保局?jǐn)M將谷物中啶蟲脒限量標(biāo)準(zhǔn)修訂為5.0 mg/kg。目前國內(nèi)有關(guān)啶蟲脒殘留量的檢測方法大都是蔬菜、水果中啶蟲脒殘留量的測定［1－3］，所采用的方法主要有液相色譜法［4－5］、氣相色譜法［6－7］、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［8－9］和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［10］。大米中啶蟲脒的殘留分析方法還未見報道。筆者通過優(yōu)化樣品的前處理過程，優(yōu)化不同流動相體系和色譜柱，利用UPLC快速高效的分離，最終通過質(zhì)譜來定性定量分析。分析步驟簡單，靈敏度高，可完全滿足歐盟、美國食品與藥品監(jiān)督管理局和日本等發(fā)達(dá)國家的限量要求。

1 材料與方法

1.1 材料 主要儀器:Waters ACQUITY UPLCTM－TQD MS/MS系統(tǒng)，美國Waters;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R205，瑞士BUCHI公司;超聲波清洗器，德國ELMA公司;渦旋混合器，德國IKA公司;Milli－Q純水系統(tǒng)，美國Millipore公司。

主要試劑:甲醇(色譜純);乙腈(分析純);丙酮(分析純);二氯甲烷(分析純);甲酸(色譜純);乙酸乙酯(分析純);水為二次蒸餾水;酸性氧化鋁固相萃取柱(1 000 mg/6 ml);啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品(95.0%)。

稱取10 mg的啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解于100 ml容量瓶中，配成100 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，使用時根據(jù)需要以流動相稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 分析步驟及方法

1.2.1 提取。稱取2 g(精確到0.01 g)試樣于50 ml具塞塑料離心管中，加2 ml水浸泡10 min，加入15 ml乙腈和1 g無水硫酸鈉，在混勻器上充分混勻2 min，5 000 r/min離心5 min，將上清液移至50 ml濃縮瓶中，殘渣加15 ml乙腈。重復(fù)上述操作，合并2次提取液，在40℃水浴減壓濃縮至凈干，用2 ml丙酮－石油醚(體積比1∶4)溶解，待凈化。

1.2.2 凈化。將弗羅里硅土柱分別用3 ml丙酮和3 ml石油醚活化，將2 ml提取液過柱，待樣液完全流出后，用2 ml丙酮－石油醚(體積比3∶7)淋洗，棄去，再用5 ml石油丙酮－石油醚(體積比3∶7)洗脫，收集洗脫液，于40℃水浴氮?dú)獯蹈?。凈化液加? ml流動相溶解，混勻，過0.2 μm濾膜，供 LC－MS/MS 測定。

1.2.3 色譜質(zhì)譜條件。色譜柱:UPLC ACQUITY BEH，50.0 mm ×2.1 mm，1.7 μm;流動相:乙腈 －10 mmol/L 乙酸銨 =35∶65(V∶V);流速:0.2 ml/min;柱溫:40 ℃;進(jìn)樣量:5 μl。離子源:ESI，正離子模式;毛細(xì)管電壓:4.0 kV;離子源溫度:105℃;脫溶劑氣溫度350℃;脫溶劑氣流量:800 L/h;錐孔反吹氣流量50 L/h;錐孔電壓:40 V;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM);離子對:239/185，239/72。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的考察 啶蟲脒易溶于甲醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮等極性溶劑，該研究在大米中添加啶蟲脒，分別采用上述溶劑進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)幾種提取溶劑的提取效率差異不顯著，但當(dāng)使用乙腈作物提取溶劑時，共提物最少，也就是說在分析時雜質(zhì)對目標(biāo)物的干擾最少，故最終確定乙腈作為提取溶劑。

2.2 液相色譜及質(zhì)譜條件的選擇 用乙腈作為有機(jī)相，在水相中分別加入了0.1%甲酸、0.1%乙酸和10 mmol/L乙酸銨，結(jié)果表明，乙腈和10 mmol/L溶液作梯度洗脫時，能夠獲得最強(qiáng)的離子豐度，所以最終確定乙腈和0.1%甲酸為流動相。試驗(yàn)中嘗試了分別采用正、負(fù)2種離子模式，發(fā)現(xiàn)正離子模式下的離子化效率明顯高于負(fù)離子模式。通過全離子掃描確定啶蟲脒的定性和定量離子，離子對:239/185，239/72。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 用流動相準(zhǔn)確配置2、10、50、100、200 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。在上述儀器測定條件下進(jìn)行分析，以被測組分峰面積(Y)對其質(zhì)量濃度 (X)作工作曲線。結(jié)果表明，在0.04～4.00 ng范圍內(nèi)，啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜峰面積與質(zhì)量濃度成良好的線性關(guān)系，其線性方程為Y=35 379 X+2 790(r=0.999 4)。該測定條件下啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時間約為1.7 min，以3倍信噪比計，最低檢出限為0.8 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)溶液離子流圖見圖1。

2.4 方法的準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn) 以不含啶蟲脒的水產(chǎn)品樣品為本底，分別添加系列濃度的待測藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液(添加水平分別為5、20和100 μg/kg)，按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，重復(fù)測定5次，添加回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。結(jié)果表明，平均添加回收率為86.3% ～92.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6% ～4.5%。

表1 大米中啶蟲脒添加回收試率和精密度(n=5)

3 結(jié)論

采用簡單的提取方法和固相萃取小柱凈化，建立了大米中啶蟲脒殘留量的LC－MS/MS分析方法。該方法具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度高，同時獲得了較好的添加回收率以及精密度，添加回收率在86.3% ～92.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在為1.6%～4.5%，均能滿足殘留分析的要求。同時，該方法的建立也可為啶蟲脒在其他復(fù)雜基質(zhì)中的殘留分析提供參考。

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