李 昕，管世鶴

(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科，安徽 合肥 230601)

丙型病毒性肝炎，是一種由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染引起的病毒性肝炎。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球HCV 的感染率約為3%，約1.8 億人感染HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5 萬例，呈現(xiàn)全球流行趨勢。其中50%～85%感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎，lO%～30%發(fā)展為肝硬化，肝硬化患者中約3%～10%可演變?yōu)楦渭毎?］。近年來HCV 感染人數(shù)持續(xù)上升，成為日趨嚴重的社會和公共衛(wèi)生問題。臨床實驗室多采用實時熒光(RT－PCR)法檢測血液中的HCVRNA 用于HCV 感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物療效監(jiān)測及血液篩查［2］。本研究對本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV－RNA、HCV－ Ab、ALT 及TP 監(jiān)測指標進行分析，對其相關(guān)性進行研究，探討其在丙型肝炎診斷和治療療效方面的臨床意義。

1 對象及方法

1.1 對象

選取本院2011～2013年度共708 例住院及門診患者HCV－Ab 陽性、伴隨典型臨床表現(xiàn)并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血樣。其中男444例、女264 例，男性年齡1～95 歲，平均年齡45.5 歲，女性年齡10～73 歲，平均年齡45.1 歲。

1.2 試劑與儀器

1)丙型肝炎病毒核酸擴增(PCR)熒光定量檢測試劑:上海科華生物工程有限公司生產(chǎn)，批號分別為20121206、20131201。儀器采用羅氏Light Cycler480熒光定量PCR 儀，Agilent Technologies 擴增儀。

2)丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒(ELISA):廣州中山生物工程有限公司生產(chǎn)，批號分別為20121205、20131203。儀器采用科華KHB ST－360酶標儀。

3)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和總蛋白(TP)試劑:SIEMENS 有限公司生產(chǎn)，批號分別為20121117、20131201。儀器采用德國SIEMENS Dimension RxL Max 全自動生化分析儀。

1.3 方法

1)HCV－ RNA 檢測。采用實時熒光RT－PCR 法，由PCR 實驗室人員嚴格按照試劑盒說明書進行熒光定量檢測，在實驗中設(shè)置陰性對照、強陽性對照、弱陽性對照以及4 個不同濃度的標準品(2 ×104～2 ×107)，HCV－RNA 值＜1.0 ×103IU/mL 為檢測下限(不同HCV－RNA 檢測方法可用IU/mL 和copy/mL 兩種單位，換算公式:IU/mL=0.854 ×copy/mL+0.538)。本實驗選用試劑盒采用定量單位為IU/mL。

2)HCV－Ab 檢測。采用ELISA 法，由實驗室人員嚴格按照試劑盒說明書進行定性檢測，實驗中設(shè)置一孔陰性對照、一孔空白對照及一孔陽性對照。酶標儀采用450nm/630nm 雙波長檢測吸光度(A)。試劑盒陰性對照A 值≤0.1，陽性對照A 值≥0.6，臨界值(Cut－ off 值)計算:Cut－ off 值=0.15 +陰性對照A 值均值。通過與陰性對照、空白對照、陽性對照的Cutoff 值比較判斷樣本A 值＜Cut－off 值為陰性，樣本A 值≥Cut－off 值為陽性。

3)ALT 檢測。采用SIEMENS Dimension RxL Max 全自動生化分析儀的酶速率法，ALT ＜40U/L為正常合格。

4)TP 檢測。采用SIEMENS Dimension RxL Max 全自動生化分析儀的雙縮脲比色法，TP ＜80g/L為正常合格。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件包分析，均值比較用t檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

1)708 例HCV－Ab 陽性患者HCV－RNA 的檢測結(jié)果:708 例HCV－ Ab 陽性患者中，HCV－RNA 值1.0 ×103者為504 例，HCV－RNA 陽性率為71.2%。HCV－ RNA 值＜1.0 ×103者為204例。504 例HCV－ RNA 值1.0 ×103者中數(shù)量級107為42 例、106為174 例、105為156 例、104為90例、103為42 例，經(jīng)統(tǒng)計計算兩種檢測方法的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=39.723，P=0.005 ＜0.05)。

2)708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA含量與ALT、TP 平均值之間的關(guān)系如表1～表2所示，在708 例HCV－Ab 陽性患者中ALT 異常人數(shù)所占百分比隨著HCV－RNA 載量的增加呈依次遞增的趨勢，與HCV－RNA 成正相關(guān)性(r=0.837，P=0.01 ＜0.05)，但HCV－RNA 載量與ALT 平均值不構(gòu)成正相關(guān)性(r= 0.112，P= 0.60 ＞0.05)。708 例HCV－Ab 陽性患者中HCV－RNA載量與TP 異常的人數(shù)所占百分比未有相關(guān)性(r=－0.233，P=1.73 ＞0.05)，且隨著HCV－RNA 載量的增加，相應(yīng)的TP 平均值呈在正常范圍值內(nèi)的負相關(guān)(r=－0.827，P=0.00)，不同HCV－RNA載量的標本的TP 平均值變化較平穩(wěn)。

表1 708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA 載量與ALT、TP 的平均值

3)708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA載量與性別、年齡之間的相關(guān)性分析如表3所示，708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA 載量與平均年齡之間并無明顯關(guān)系，且隨著HCV－RNA載量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40 歲以上患者所占比例、40 歲以下患者所占比例未呈規(guī)律性變化。但在總體HCV－Ab 陽性患者中，男性患者的比例62.7% 要大于女性患者的比例37.3%，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);40 歲以上患者的比例為69.2%高于40 歲以下患者的比例30.8%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其中40 歲以上男性患者人數(shù)為392 人，所占比例為55.37%。

表2 708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA 載量與ALT、TP 異常人數(shù)百分率

表3 236 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA 載量與性別、年齡之間的關(guān)系

3 討論

1)HCV 是丙型肝炎的病因，目前所用實驗室診斷方法主要為病原抗原檢測、病原抗體檢測和HCV－RNA 檢測。由于采用實時熒光RT－ PCR方法檢測HCV－RNA 可以縮短檢測窗口期(最少可至22 天)［3］，所以血液中HCV－RNA 的實時熒光RT－PCR 檢測，已成為HCV 感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物治療療效監(jiān)測及血液篩查的重要手段。本研究708 例HCV－Ab 陽性患者中有204 例HCV－ RNA 值為陰性，分析原因如下:①HCV－Ab 假陽性，可能與高球蛋白血癥［4］或試劑盒包被抗原不純［5］等因素導(dǎo)致;②HCV 感染后的病毒血癥分為持續(xù)、一過和間隙三種時間模式［6］。故HCV－RNA 出現(xiàn)間隙陰性，或是患者處于疾病恢復(fù)期，病毒量下降導(dǎo)致HCV－ RNA 陰性，而HCV－Ab 陽性持續(xù)存在;③因?qū)崟r熒光RT－PCR法提取HCV－ RNA 過程較復(fù)雜，易被RNA 酶降解，從而影響低載量的HCV－RNA 的檢測［7］;④因核酸的穩(wěn)定性較抗體低，故HCV－RNA 不穩(wěn)定，導(dǎo)致HCV－RNA 檢出值不穩(wěn)定［8］，影響實驗結(jié)果;⑤抗病毒治療導(dǎo)致干擾和抑制了患者體內(nèi)HCV－RNA 的復(fù)制，使得血清中HCV－RNA 的載量低于檢測下限［9］。

2)由表1、表2 看出，隨著HCV－RNA 值的升高ALT 的平均值未呈比例升高，但ALT 異常人數(shù)所占百分比升高，與HCV－RNA 值呈正相關(guān)(r=0.837，P＜0.05)，提示肝細胞發(fā)生損傷，但不能反映肝臟的損傷程度［10］。但據(jù)澳大利亞的一項實驗調(diào)查研究證明HCV－RNA 和ALT 的水平動態(tài)變化在感染的前三至五個月有相互影響作用，在感染的早期治療有重要的作用［11］。故在以后的研究中需進一步收集臨床資料驗證丙型肝炎早期感染階段的指標動態(tài)變化的影響意義。

3)急慢性肝病會造成總蛋白偏高，但在708例HCV－Ab 陽性患者中，TP 平均值變化較平穩(wěn)，且都在正常范圍內(nèi)，TP 異常較集中在HCV－RNA值為103～105范圍內(nèi)，說明TP 異常常伴隨低HCV－RNA 含量時存在，可能與丙型肝炎早期肝細胞纖維化、炎癥和代謝失常有關(guān)。

4)在本研究中，708 例HCV－Ab 陽性患者的HCV－RNA 的含量與平均年齡、性別之間有一定聯(lián)系。在總體HCV－Ab 陽性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。據(jù)國外報道稱女性獻血者的丙肝感染率遠低于男性獻血者［12］，故考慮在以后的研究中增大標本量進行統(tǒng)計研究;40 歲以上患者的比例要大于40 歲以下患者的比例，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。本研究數(shù)據(jù)表明，丙型肝炎患者以40 歲以上男性居多，可能由于年齡大機體老化導(dǎo)致機體免疫力下降或因40 歲以上男性社會壓力大及飲酒、吸煙等不良生活習(xí)慣或合并其他疾病并發(fā)癥致使機體抵抗力下降易受病毒侵害［13］。據(jù)美國全國健康和營養(yǎng)檢查調(diào)查顯示:40 歲以上成年人的丙型感染率明顯增高，且27.3%的40 歲以上丙肝患者中有過量飲酒史，酒精對于HCV 感染具有乘法效應(yīng)［14］。

綜上所述，RT－ PCR 檢測血液中的HCV－RNA 由于其窗口期短、定量監(jiān)測病毒復(fù)制量，較好地應(yīng)用于HCV 的診斷，藥物治療療效監(jiān)測，但不能確切反映病理性肝損傷。ELISA 法檢測HCV－Ab由于其操作簡單、成本經(jīng)濟、檢出率高等特點用于大規(guī)模的人群篩查指標，但其窗口期長且易出現(xiàn)假陽性。ALT 和TP 在丙肝感染的過程中一定程度上反映了肝臟的損傷情況，與丙肝的感染階段有一定關(guān)聯(lián)。因此需結(jié)合HCV－RNA、HCV－Ab、ALT和TP 對丙型肝炎患者進行病情的診斷、檢測和治療。本研究中丙型肝炎以40 歲以上男性患者多見，故應(yīng)增加臨床重視度。

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