蘇勤勇，李曉梅，姚景春，王平平，張貴民

(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，中藥制藥共性技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東臨沂　276006)

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牛蒡子苷元對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤的作用及初步作用機(jī)制探討

蘇勤勇，李曉梅，姚景春，王平平，張貴民

(魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，中藥制藥共性技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東臨沂276006)

摘要:目的觀察牛蒡子苷元對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤的作用及作用機(jī)制的研究。同時(shí)探討牛蒡子苷元與替莫唑胺合用對(duì)腦膠質(zhì)瘤是否有協(xié)同作用。方法采用腦內(nèi)注射C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞建立大鼠C6膠質(zhì)瘤模型;牛蒡子苷元連續(xù)皮下給藥15 d，替莫唑胺從d 5開始給藥，連續(xù)灌胃給藥5 d;測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)短徑，計(jì)算腫瘤體積;采用免疫組化方法檢測(cè)腦瘤組織中GFAP、PCNA和CD40的表達(dá)。結(jié)果與模型組相比，牛蒡子苷元均能明顯降低大鼠C6膠質(zhì)瘤的腫瘤體積(P＜0.05)，給予牛蒡子苷元可使腦膠質(zhì)瘤大鼠的PCNA和CD40表達(dá)明顯降低(P＜0.05)，GFAP表達(dá)明顯升高(P＜0.05) ;牛蒡子苷元與替莫唑胺合用能明顯減少腦膠質(zhì)瘤大鼠的腫瘤體積(P＜0.01)，其腫瘤抑制率均高于單獨(dú)牛蒡子苷元和替莫唑胺;與模型組相比，聯(lián)合用藥組的PCNA和CD40表達(dá)均明顯降低(P＜0.05)，GFAP明顯升高(P＜0.05)，均好于單獨(dú)用藥。結(jié)論牛蒡子苷元能明顯抑制大鼠C6膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)，并且與替莫唑胺合用具有協(xié)同作用，作用機(jī)制與影響腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白(PCNA和GFAP)表達(dá)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫(抑制CD40表達(dá))相關(guān)，為牛蒡子苷元上報(bào)新藥提供臨床前藥理試驗(yàn)支持。

關(guān)鍵詞:腦膠質(zhì)瘤;牛蒡子苷元;替莫唑胺; PCNA; GFAP; CD40;新藥

腦膠質(zhì)瘤亦稱神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤，由神經(jīng)上皮組織衍化而來，具有發(fā)病率高、病死率高和治愈率低的特點(diǎn)，手術(shù)切除是當(dāng)前最主要的臨床治療手段。由于膠質(zhì)瘤本身固有的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的病理特點(diǎn)，手術(shù)后的復(fù)發(fā)仍不可避免，采用安全有效的方法進(jìn)行膠質(zhì)瘤的治療成為亟待解決的問題。天然藥物單體化合物可通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化或凋亡從而發(fā)揮抗腫瘤作用。牛蒡子為菊科植物牛蒡(Arctium Lappa L.)的干燥成熟果實(shí)。癌細(xì)胞體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，牛蒡子具有抗癌性［1］。米靖宇等［2］經(jīng)過歸納總結(jié)認(rèn)為，牛蒡子中具有抗腫瘤和免疫活性的有效成分主要為牛蒡子苷元(arctigenin，ARG)。牛蒡子苷元體內(nèi)外試驗(yàn)表明，其可抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，其抗腫瘤作用主要集中在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等方面［1］。檢索國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)牛蒡子苷元對(duì)腦膠質(zhì)瘤相關(guān)作用的報(bào)道。本試驗(yàn)采用大鼠腦內(nèi)注射C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞建立大鼠腦瘤模型，研究牛蒡子苷元及聯(lián)合抗腦膠質(zhì)瘤藥物替莫唑胺對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤的作用，同時(shí)觀察其對(duì)腦瘤組織中的增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、膠質(zhì)纖維蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)及CD40表達(dá)的作用。

1　材料與方法

1.1藥物和試劑牛蒡子苷元注射液(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司) ;大鼠C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株系(中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心) ;替莫唑胺原料(北京嘉瑞時(shí)代科技有限公司) ;免疫組化PCNA和CD40試劑盒(Santa Cruze) ;免疫組化GFAP試劑盒(北京中杉金橋有限公司)。

1.2儀器超凈工作臺(tái)(SW-CJ-1BU型，蘇凈集團(tuán)安泰公司制造) ;倒置熒光顯微鏡(CKX41型，日本奧林巴斯公司) ;組織包埋機(jī)(Tissue-TekTECTM5.，日本櫻花科技) ;全封閉組織脫水機(jī)(Tissue-TekVIPTM5Jr，日本櫻花科技)。

1.3動(dòng)物健康♂SD大鼠，SPF級(jí)，90只，體質(zhì)量(200±20) g。魯南制藥集團(tuán)股份有限公司試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK (魯) 2012 0002;質(zhì)量合格證號(hào):0015264。

1.4細(xì)胞培養(yǎng)及處理大鼠C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，消化，分散均勻，濃度為1×1011·L－1，C6細(xì)胞使用含有10%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液于37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用胰蛋白酶適量消化3～5 min后，棄去消化液。用PBS液吹打沖洗1～2次形成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×1010·L－1的懸液用于接種［3］。

1.5大鼠腦膠質(zhì)瘤模型的建立SD大鼠尾靜脈注射1%戊巴比妥鈉(40 mg·kg－1)后，脫去大鼠頭頂部毛發(fā)，頭頂雙側(cè)眼裂連線后大約1.5 cm處橫向切開頭皮，暴露前囪顱骨標(biāo)志，前囪中點(diǎn)前1 mm，矢狀縫旁開3 mm處用自制牙鉆鉆一骨孔，微量注射器抽取C6細(xì)胞懸液10 μL，垂直固定于試驗(yàn)臺(tái)上，經(jīng)原骨孔處進(jìn)針硬腦膜下6 mm，后退1 mm，于10 min內(nèi)將細(xì)胞懸液注完(2 μL·min－1)，注射完畢后留針5 min，緩慢退針，骨蠟封閉骨孔，1號(hào)絲線縫合頭皮切口［4－6］。

1.6動(dòng)物分組及給藥90只大鼠隨機(jī)分為6組，分別為模型組(M)、低劑量牛蒡子苷元組(ARG 0.05，0.05 mg·kg－1)、高劑量牛蒡子苷元組(ARG 0.1，0.1 mg·kg－1)、替莫唑胺組(TMZ，20 mg· kg－1)、低劑量牛蒡子苷元+替莫唑胺組(TMZ/ARG 0.05)、高劑量牛蒡子苷元+替莫唑胺組(TMZ/ARG 0.1)，每組15只。牛蒡子苷元于術(shù)后d 2開始皮下給藥［0.1 mL·(100 g)－1］，連續(xù)給藥15 d，替莫唑胺于接種后d 5開始灌胃給藥，1 mL·(100 g)－1連續(xù)給予5 d，其余各組灌胃給予相同體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的CMC-Na。

1.7結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)術(shù)后d 16以過量戊巴比妥鈉麻醉處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，斷頭取腦，全腦于3%甲醛中固定1周，沿進(jìn)針點(diǎn)作冠狀切口，測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)短徑，計(jì)算腫瘤體積V=πab2/6(b為短徑)。抑瘤率/%=(模型組的腫瘤體積－實(shí)驗(yàn)組的腫瘤體積)/模型組腫瘤的平均體積×100%，抑制率＞30%為腫瘤對(duì)藥物敏感。同時(shí)石蠟切片，行PCNA、GFAP和CD40免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)，染色操作過程按照試劑盒說明書進(jìn)行。將已染好的切片在顯微鏡下觀察并拍照，采用IPP病理圖像分析軟件計(jì)算GFAP陽性表達(dá)的光密度及CD40陽性細(xì)胞的IOD值和面密度; PCNA結(jié)果以胞核或(和)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒為陽性，光鏡高倍視野下(400倍)陽性細(xì)胞數(shù)所占總腫瘤細(xì)胞數(shù)的百分率為PCNA陽性指數(shù)。

2　結(jié)果

2.1對(duì)大鼠腫瘤體積及抑瘤率的影響由Tab 1可以看出，與模型組相比，低、高劑量牛蒡子苷元組和替莫唑胺組的腫瘤體積降低(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組的腫瘤體積明顯降低(P＜0.01)。表明牛蒡子苷元單用及聯(lián)用均對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤有抑制作用，并且牛蒡子苷元與替莫唑胺聯(lián)用具有協(xié)同作用。所有給藥組的抑瘤率均＞40.65%，顯示大鼠C6膠質(zhì)瘤對(duì)牛蒡子苷元及聯(lián)合用藥敏感。

Tab 1 Effects of arctigenin on tumor volume(±s，n=15)

Tab 1 Effects of arctigenin on tumor volume(±s，n=15)

*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs model group

Group　Tumor size/mm3Inhibitory rate/% Model　153.7±32.6 Low ARG　91.2±17.6*　40.6 High ARG　78.5±26.0*　48.9 Temozolomide　68.1±19.7*　55.7 Low ARG+Temozolomide　64.6±16.7＊＊　58.0 High ARG+Temozolomide　66.8±19.2＊＊56.5

2.2對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤PCNA表達(dá)的影響PCNA陽性細(xì)胞的胞核呈黃色或棕黃色，400倍鏡下計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)5個(gè)視野的陽性細(xì)胞。由Fig 1可以看出，模型組大鼠腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)為陽性細(xì)胞密度高，胞核呈陽性，數(shù)量多。與模型組相比，低劑量及高劑量牛蒡子苷元的PCNA陽性表達(dá)率明顯降低(P＜0.05) ;牛蒡子苷元聯(lián)合替莫唑胺組的PCNA陽性表達(dá)率也明顯降低(P＜0.01)，并且聯(lián)合用藥優(yōu)于單獨(dú)牛蒡子苷元和替莫唑胺。表明牛蒡子苷元可以明顯抑制大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖，并且與替莫唑胺聯(lián)用可以協(xié)同抑制C6膠質(zhì)瘤增殖。

2.3對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤GFAP表達(dá)的影響GFAP免疫組化陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色，400倍鏡下計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)3個(gè)視野的陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)GFAP陽性表達(dá)。低劑量牛蒡子苷元組的GFAP表達(dá)與模型組相比有升高的趨勢(shì)，但差異無顯著性。除低劑量牛蒡子苷元組外，其余給藥組GFAP陽性表達(dá)，瘤內(nèi)光密度值較模型組均明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。表明牛蒡子苷元單用及聯(lián)用均可以明顯增強(qiáng)GFAP表達(dá)，見Fig 2。

2.4對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤CD40表達(dá)的影響CD40免疫組化陽性染色定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)。由Tab 2 及Fig 3可以看出，牛蒡子苷元IOD值(P＜0.01)和面密度值(P＜0.05)均明顯低于模型組;聯(lián)合用藥組的IOD值(P＜0.01)和面密度值(P＜0.01)也明顯低于模型組，并且好于單獨(dú)牛蒡子苷元和替莫唑胺。表明牛蒡子苷元可以明顯抑制CD40表達(dá)，并且同替莫唑胺聯(lián)用具有協(xié)同作用。

3　討論

腦膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性腦腫瘤，占原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的32%。2012年，中國腫瘤登記報(bào)告指出中國腦及中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤死亡率約為3.87/10萬，位列十大高病死率腫瘤之第9位。替莫唑胺是國際上治療腦膠質(zhì)瘤的一線藥物，但是其作為化療藥物，全身毒性反應(yīng)較大，對(duì)患者的免疫力影響較大。幾十年來，天然產(chǎn)物一直是藥物和藥物先導(dǎo)化合物的重要來源。天然抗腫瘤藥物以其作用機(jī)制獨(dú)特、效果明顯、毒副作用小在臨床廣泛使用。目前臨床使用量已占到腫瘤治療藥物的74%。

腦膠質(zhì)瘤中PCNA和GFAP的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，PCNA的過度表達(dá)導(dǎo)致了細(xì)胞周期調(diào)節(jié)紊亂，影響膠質(zhì)瘤的增殖和分化，參與了膠質(zhì)瘤的惡性進(jìn)展，它的表達(dá)與膠質(zhì)瘤的惡性行為相關(guān)［7－8］。而GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞及其發(fā)生腫瘤的最佳特征性標(biāo)記物［9］。研究發(fā)現(xiàn)，GFAP強(qiáng)陽性表達(dá)往往標(biāo)志著瘤細(xì)胞趨于成熟，分化良好，預(yù)后較好［10］。觀察PCNA 與GFAP的表達(dá)是評(píng)價(jià)膠質(zhì)瘤增殖、生長(zhǎng)、分化及惡性程度的主要指標(biāo)。CD40信號(hào)的高表達(dá)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展、微血管形成等存在正相關(guān)性。CD40信號(hào)可直接刺激腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的多種細(xì)胞，產(chǎn)生IL-6、MMP、VEGF等一系列利于腫瘤生長(zhǎng)和促進(jìn)腫瘤新生血管形成的細(xì)胞因子［11－12］。

Tab 2 Effects of arctigenin on CD40 expressionin rat glioma(±s，n =15)

Tab 2 Effects of arctigenin on CD40 expressionin rat glioma(±s，n =15)

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Fig 1 Expression of PCNA on rat tumor issue(×400)

Fig 2 Expression of GFAP on rat tumor issue (×400)

Fig 3 Expression of CD40 on rat tumor issue (×400)

本實(shí)驗(yàn)表明，牛蒡子苷元能明顯減少C6膠質(zhì)瘤大鼠的腫瘤體積，并且牛蒡子苷元作為天然產(chǎn)物單體，其抗腫瘤作用并非類似于替莫唑胺單純依靠其對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性殺滅，而是同時(shí)發(fā)揮對(duì)荷瘤大鼠的全面調(diào)節(jié)作用，如改善機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境，拮抗替莫唑胺和腫瘤本身對(duì)機(jī)體功能的損害。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)還觀察了牛蒡子苷元對(duì)PCNA、GFAP和CD40表達(dá)的影響，研究結(jié)果顯示，牛蒡子苷元可以明顯降低PCNA、CD40表達(dá)，升高GFAP表達(dá)，表明牛蒡子苷元抑制膠質(zhì)瘤大鼠腫瘤的生長(zhǎng)，作用機(jī)制可能與影響相關(guān)蛋白(降低PCNA、升高GFAP)表達(dá)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫(抑制CD40表達(dá))相關(guān)。

此外，本研究還觀察了牛蒡子苷元與替莫唑胺合用對(duì)大鼠C6膠質(zhì)瘤是否具有協(xié)同作用。結(jié)果顯示，牛蒡子苷元與替莫唑胺合用可以協(xié)同抑制大鼠C6膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)，無論低劑量牛蒡子苷元，還是高劑量牛蒡子苷元聯(lián)合替莫唑胺的腫瘤抑制率均高于單獨(dú)的牛蒡子苷元和替莫唑胺，并且兩者聯(lián)用能協(xié)同抑制PCNA表達(dá)和增強(qiáng)GFAP表達(dá)，同時(shí)其CD40的IOD和面密度值均低于單獨(dú)用藥，表明牛蒡子苷元和替莫唑胺合用在影響膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白表達(dá)和免疫調(diào)節(jié)(抑制CD40表達(dá))作用機(jī)制方面也具有協(xié)同作用。

綜上所述，牛蒡子苷元能明顯抑制大鼠C6腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng);同時(shí)牛蒡子苷元(0.05和0.1 mg· kg－1)和抗膠質(zhì)瘤藥替莫唑胺(20 mg·kg－1)合用具有協(xié)同作用，作用機(jī)制可能與抑制PCNA和CD40的表達(dá)、增強(qiáng)GFAP的表達(dá)相關(guān)。腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)過程，影響因素很多，目前牛蒡子苷元抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)機(jī)制目前尚無定論，更多詳細(xì)的機(jī)制需要進(jìn)一步研究。牛蒡子苷元已經(jīng)作為中藥一類新藥上報(bào)到國家食品藥品監(jiān)督管理局，本次試驗(yàn)為牛蒡子苷元作為一類新藥上報(bào)提供臨床前藥理實(shí)驗(yàn)支持。

(本實(shí)驗(yàn)在魯南制藥集團(tuán)股份有限公司/中藥制藥共性技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝實(shí)驗(yàn)室提供的技術(shù)資金支持，感謝實(shí)驗(yàn)室同事提供的大力幫助。)

參考文獻(xiàn):

［1］鄭國燦.牛蒡子提取液的抗癌性研究［J］.東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2003，22(5) :319－22.

［1］Zheng G C.The study of antitumor to the extract of Arctium lappa L［J］.J Southeast Univ (Med Sci Edit)，2003，22(5) :319－22.

［2］米靖宇，宋純清.牛蒡子中木脂素類化合物的抗腫瘤及免疫活性［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2002，13(3) :168.

［2］Mi J Y，Song C Q.The anti-tumor and immunity activities of lig-nans compound from Arctium lappa L［J］.Lishizhen MED Mat Med Res，2002，13(3) : 168.

［3］王天路，陸利霞，孫濤，譚關(guān)子.聚乳酸——替莫唑胺微膠囊對(duì)大鼠C6腦膠質(zhì)瘤體外和體內(nèi)抑瘤試驗(yàn)［J］.江蘇醫(yī)藥，2008，34(5) :478－80.

［3］Wang T L，Lu L X，Sun T，Tan G Z.Growth inhibition of polylactic acid temozolomide microspheres on SD rat brain in vitro and in vivo ［J］.Jiangsu Med J，2008，34(5) :478－80.

［4］邱大勝，徐麗瑩，尹明媛，等.注射后留置時(shí)間對(duì)大鼠C6腦膠質(zhì)瘤模型的影響［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，33(10) : 1260 －3.

［4］Qiu D S，Xu L Y，Yin M Y，et al.The effect of detaining time after injection in rat brain C6 glioma［J］.J Chongqing Med Univ，2008，33(10) :1260－3.

［5］余永強(qiáng)，陳駿，錢銀鋒，等.立體定向建立大鼠C6膠質(zhì)瘤模型［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(2) :222－5.

［5］Yu Y Q，Chen J，Qian Y F，et al.Establishment of rat C6 glioma model by intracranial injection［J］.Chin Pharmacol Bull，2003，19(2) : 222－5.

［6］李蓉，劉國龍，牛道立，等.建立大鼠C6/SD腦膠質(zhì)瘤放射劑量效應(yīng)模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.解剖學(xué)研究，2011，33(1) :4－9.

［6］Li R，Liu G L，Niu D L，et al.Experimental study of radiation on C6 glioma rats model［J］.Anat Res，2011，33(1) :4－9.

［7］張進(jìn)華，游楓慧，楊衛(wèi)忠，等.欖香烯抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖和PCNA基因表達(dá)的研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(10) :1348－51.

［7］Zhang J H，You F H，Yang W Z，et al.Study on the inhibiti on of cell pro liferation and the expression of PCNA gene of human glioma U251 by elemene［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(10) : 1348－51.

［8］陳罡，羅殿中，侯巧燕，郭芳.PCNA和GFAP在腦星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤中表達(dá)的雙重染色研究［J］.中國臨床神經(jīng)外科雜志，2005，10(4) :252－4.

［8］Chen G，Luo D Z，Hou Q Y，Guo F.Study of PCNA and GFAP expressions in human brain astrocytomas by double immunohistochemical staining［J］.Chin J Clin Neurosurg，2005，10(4) :252－4.

［9］楊金慶，于耀宇，陶勝忠，等.GFAP，Vimentin，VEGF和p53的表達(dá)與星形細(xì)胞瘤預(yù)后的相關(guān)性研究［J］.中國臨床神經(jīng)外科雜志，2006，11(9) :535－7.

［9］Yang J Q，Yu Y Y，Tao S Z，et al.Expressions of GFAP，Vimentin，VEGF and p53，and their relationship with prognosis in astrocytoma［J］.Chin J Clin Neurosurg，2006，11(9) :535－7.

［10］張建平，付銀根，劉大全.人參皂苷Rg3對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤GFAP，Vimentin表達(dá)的影響［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30 (13) :1173－6.

［10］Zhang J P，F(xiàn)u Y G，Liu D Q.Effects of Ginsenoside Rg3 on GFAP and vimentin expression in rat glioma［J］.J Fourth Mil Med Univ，2009，30(13) :1173－6.

［11］蔡文治，王卓，謝煒，等.CD40基因特異性沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87增殖和遷移的影響［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，32(1) :36－40.

［11］Cai W Z，Wang Z，Xie W，et al.The effect of CD40 gene silencing on proliferation and migration of glioma cell line U87［J］.J Soochow Univ Med Sci Edit，2012，32(1) :36－40.

［12］Futagami S，Hiratsuka T，Shindo T，et al.COX-2 and CCR2 induced by CD40 ligand and MCP-1 are linked to VEGF production in endothelial cells［J］.Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids，2008，78(2) :137－46.

Effects and primary mechanism of arctigenin in C6 rat glioma

SU Qin-yong，LI Xiao-mei，YAO Jing-chun，WANG Ping-ping，ZHANG Gui-min
(Group Co.Ltd，State Key Laboratory，Generic Manufacture Technology of Chinese Traditional Medicine，Linyi Shandong 276006，China)

Abstract:AimTo observe the effect and primary mechanism of arctigenin (ARG) in C6 rat glioma.At the same time，to investigate the effect of ARG combined with temozolomide.MethodsC6 glioma rat model was established，and 90 rats were divided into six groups，which were subcutaneously administered with model，low and high ARG (0.05 and 0.1 mg· kg(－1)，sc)，temozolomide (20 mg·kg(－1)，p.o.)，low ARG combined with temozolomide(TMZ/ARG 0.05) and high ARG combined with temozolomide(TMZ/ARG 0.1).The tumor specimens of brain were collected after tumor graft.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA)，glial fibrillary acidic protein (GFAP) and CD40 in tumor specimens were determined by immunohistochemistry.Results①Compared with the model group，the tumor sizes of rats in the arctigenin treatment groups were decreased (P＜0.05).②ARG significantly decreased PCNA and CD40 expression (P ＜0.05) and increased GFAP expression (P＜0.05).③Compared with model group，arctigenin combined with temozolomide decreased the tumor sizes (P＜0.01)，and the tumor inhibition rate was higher than that of the arctigenin and temozolomide.At the same time，arctigenin combined with temozolomide decreased PCNA and CD40 expression (P＜0.01) and increased GFAP expression (P＜0.05)，which was better than arctigenin and temozolomide.Conclusion Arctigenin inhibits rat glioma growth，and synergizes with temozolomide，which may be associated with inhibiting PCNA and CD40 expression and strengthening GFAP expression.

Key words:brain glioma; arctigenin; temozolomide;PCNA; GFAP; CD40; new drug

作者簡(jiǎn)介:蘇勤勇(1985－)，男，碩士，工程師，研究方向:新藥藥理學(xué)，Tel:0539-5030502，E-mail: ntp_sqy@126.com;張貴民(1969－)，男，研究員，研究方向:新藥研發(fā)與管理，通訊作者，Tel: 0539-5030565，E-mail: lunanzhangguimin @126.com

基金項(xiàng)目:國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)資助項(xiàng)目(No 2012CB724001)

收稿日期:2015－01－16，修回日期:2015－03－10

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001－1978(2015) 06－0805－05中國圖書分類號(hào): R－332; R284.1; R730.264; R739.410.22; R979.1

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.06.014