李旭艷

人乳頭瘤病毒是一種球形DNA病毒，作為乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，可引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，隨著病情進(jìn)展可誘發(fā)生殖道病變，甚至宮頸癌變的發(fā)生[1]。目前，流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究已證實(shí)HPV感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的主要病因，且已證實(shí)高危型HPV感染是宮頸癌的必要病因[2]。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)顯示，通過(guò)已掌握的大量區(qū)域性流行病學(xué)本地資料以及研究婦女HPV感染及其與宮頸病變關(guān)系，得出HPV感染存在較大的地區(qū)差異[3]。近年來(lái)，惠州地區(qū)每年到本院門診和體檢患者要求檢查HPV-DNA的人數(shù)逐年增多，且結(jié)果顯示女性感染HPV人群有逐年增加的趨勢(shì)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。對(duì)此，本院通過(guò)檢測(cè)和分析門診和體檢的婦女HPV感染情況及其與年齡的關(guān)系，為HPV疫苗研究以及HPV感染早期預(yù)防和治療提供理論依據(jù)和指導(dǎo)價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2576例2013年1月-2014年12月本院門診和體檢的婦女宮頸分泌物中的脫落細(xì)胞，年齡20~78歲，平均年齡（47.21±7.49）歲，且均有性生活史，但無(wú)宮頸手術(shù)史、無(wú)子宮切除手術(shù)史、無(wú)細(xì)胞學(xué)檢查異常史等治療史，其中依據(jù)年齡分為低齡組（20~29歲）679例、中低齡組（30~39歲）1056例、中齡組（40~49歲）496例、高齡組（>49歲）345例，所有受試者均無(wú)心、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重性疾病，且簽署知情同意書，并經(jīng)本院醫(yī)藥倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有婦女在門診和體檢時(shí)，通過(guò)專用刷子置于宮頸口，逆時(shí)針?lè)较蜣D(zhuǎn)3圈，停留10 s后，將采樣刷置于專用標(biāo)本儲(chǔ)存瓶并折斷采樣刷多余部分，將采樣刷留于標(biāo)本儲(chǔ)存瓶并送往檢驗(yàn)科進(jìn)行HPV檢測(cè)。

1.2.2 HPV檢測(cè) 所有標(biāo)本均通過(guò)全自動(dòng)離心分離機(jī)進(jìn)行上清液分離和提取，通過(guò)由，美國(guó)ABI 公司生產(chǎn)的ABI2720擴(kuò)增儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，完成后采用核酸分子導(dǎo)流雜交系統(tǒng)（凱普）對(duì)21種常見(jiàn)的HPV基因型進(jìn)行分型檢測(cè)，即先預(yù)雜交：將固定有探針的尼龍膜浸于2×SSC/0.1% SDS液內(nèi)，溫度為45 ℃，持續(xù)15 min，然后把Biotinylated PCR產(chǎn)物置入95 ℃的2×SSC/0.1% SDS中進(jìn)行變性，持續(xù)5 min；再進(jìn)行雜交，其中雜交液為2×SSC/0.1% SDS，溫度為51 ℃，持續(xù)1 h，完畢后將尼龍膜置于2×SSC/0.1% SDS中并進(jìn)行51 ℃洗膜，持續(xù)10 min，最后加入sodium citrate和TMB避光反應(yīng)5 min后棄反應(yīng)液，洗膜3次后加顯色劑進(jìn)行顯色和結(jié)果判定，其中HPV檢測(cè)試劑盒由香港凱普生物科技有限公司提供：DNA提取試劑盒，批號(hào)為20091101，PCR擴(kuò)增試劑盒，批號(hào)為20091202，雜交試劑盒，批號(hào)為20091202；所有操作均在無(wú)菌條件下依據(jù)說(shuō)明書和相關(guān)規(guī)定進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果參照說(shuō)明書評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 觀察指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn) 統(tǒng)計(jì)分析所有受試者HPV的亞型分布特點(diǎn)及其與年齡的關(guān)系，HPV檢測(cè)判定標(biāo)準(zhǔn)：雜交膜共設(shè)24個(gè)點(diǎn)，Biotin和IC設(shè)為對(duì)照點(diǎn)，當(dāng)兩點(diǎn)均為陽(yáng)性則提示檢測(cè)結(jié)果可靠[4]。HPV分型標(biāo)準(zhǔn)：HPV亞型分為高危型和低危型，16種高危型HPV分別為16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、53、66、cp8304 型，其中53、66、cp8304型為中國(guó)人群常見(jiàn)亞型，5種低危型HPV 分別為 6、11、42、43、44 型[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料比較采用 字2檢驗(yàn)，多組資料之間比較采用F檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 惠州地區(qū)HPV感染亞型分布情況 惠州地區(qū)2576例標(biāo)本經(jīng)HPV基因檢查和分型診斷篩查出412例HPV感染陽(yáng)性，感染總陽(yáng)性率為15.99%，診斷試劑包含的16種HPV高危亞型及5種HPV低危亞型且均有檢出，其中感染單重亞型共349例，包括感染單重高危亞型317例和感染單重低危亞型的32例，多重感染共63例，包括感染2種亞型的51例，感染2種亞型以上的12例，而在HPV亞型分布方面，主要以HPV亞型52、58、16為主，HPV亞型52感染率最高（2.45%），HPV亞型2感染率最低（0.08%），前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=7.72，P<0.01）；高危型HPV感染361例，感染率為14.01%，低危型HPV感染51例，感染率為1.98%，前者明顯高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=7.13，P<0.01），見(jiàn)表 1。

表1 惠州地區(qū)HPV感染亞型分布情況

2.2 惠州地區(qū)不同年齡段HPV感染分布和所占百分比情況 惠州地區(qū)診斷篩查出412例HPV感染標(biāo)本中，低齡組HPV感染121例，所占百分比為29.38%，中低齡組238例，HPV感染所占百分比為57.77%，中齡組HPV感染39例，所占百分比為9.45%，高齡組HPV感染14例，所占百分比為3.40%，中低齡組>低齡組>中齡組>高齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 惠州地區(qū)不同年齡段HPV感染分布 例（%）

3 討論

HPV是一種雙鏈?zhǔn)壬掀ば訢NA病毒，屬乳多空病毒科，主要侵犯人體生殖道，可誘發(fā)如宮頸炎、生殖器疣等生殖道病變，其中高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌變的必要病因之一[6-7]。近年來(lái)，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的生活、思考方式發(fā)生了明顯的改變，HPV感染率呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量[8-9]。HPV感染已成為最常見(jiàn)的性傳播疾病，具有明顯的異質(zhì)性，其分布也存在種族和地域差異性[10-11]。因此，對(duì)其進(jìn)行大樣本分子流行病學(xué)研究以及建立地區(qū)性HPV感染流行度及優(yōu)勢(shì)型別基因庫(kù)具有重要的臨床意義[12]。

有研究結(jié)果顯示，通過(guò)HPV導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)可一次性檢測(cè)21種常見(jiàn)HPV基因型，且檢測(cè)通量大、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為HPV基因分型和調(diào)查其分子流行病學(xué)特征的理想方法[13]。陳紅舟等[14]研究結(jié)果表明，浙江省舟山地區(qū)的感染率為22.10%，常見(jiàn)HPV亞型由高至低依次為HPV52、16、58、18、33、81。而順德地區(qū)的研究顯示，該地區(qū)感染率為16.86%，常見(jiàn)HPV亞型由高至低依次為HPV16、52、58[15]。由此可見(jiàn)不同地區(qū)流行的HPV亞型分布存在明顯的差異。本研究通過(guò)檢測(cè)和分析惠州地區(qū)門診和體檢的婦女HPV感染情況及其與年齡的關(guān)系，結(jié)果顯示2576例標(biāo)本經(jīng)HPV基因檢查和分型診斷篩查出412例HPV感染陽(yáng)性，感染總陽(yáng)性率為15.99%，在HPV亞型分布方面，由高至低依次為52、58、16，其中HPV亞型52感染率最高（2.45%），HPV亞型2感染率最低，此結(jié)果提示惠州地區(qū)或人群具有自身的HPV感染特點(diǎn)；而高危型HPV感染率明顯高于低危型HPV，提升患者感染高危型HPV機(jī)會(huì)更高，在研究HPV疫苗時(shí)，應(yīng)著重針對(duì)高危型HPV；此外，在HPV感染所占百分比方面，中低齡患者最高，低齡患者第二，中齡患者第三，高齡患者最低，表明本地區(qū)HPV感染率以30~39歲的人群最高，其次為20~29歲人群，且39歲以后隨年齡增長(zhǎng)，HPV感染率呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)。研究發(fā)現(xiàn)，HPV導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)是一項(xiàng)根據(jù)中心法則和堿基互補(bǔ)配對(duì)原則建立的且可對(duì)病原體核酸進(jìn)行高通量快速檢測(cè)的技術(shù)，可快速、有效、準(zhǔn)確區(qū)分HPV亞型。通過(guò)該技術(shù)加強(qiáng)對(duì)HPV易感人群監(jiān)測(cè)、隨訪和定期復(fù)查，有利于降低宮頸癌發(fā)病率；同時(shí)掌握HPV各型別在各年齡段的感染特點(diǎn)，有助于在研發(fā)和應(yīng)用預(yù)防性疫苗時(shí)，有效地選擇目標(biāo)人群，有利于提高HPV 感染早期預(yù)防和治療的效果，進(jìn)而改善婦女的生活質(zhì)量。

綜上所述，惠州地區(qū)HPV感染幾率具有顯著的亞型和年齡分布異質(zhì)性，對(duì)指導(dǎo)HPV疫苗研究以及HPV感染早期預(yù)防和治療具有重要的臨床價(jià)值。

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