祁廣儀， 任寶璽， 姚菊霞

（甘肅省通渭縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心，743300）

近年來(lái)，國(guó)家對(duì)動(dòng)物疫病防制工作高度重視，實(shí)施強(qiáng)制免疫各類動(dòng)物疫苗種類較多，目前正在使用的羊疫苗主要有口蹄疫等4種疫苗；每年春秋兩季按照“一畜一苗，分次注射”傳統(tǒng)免疫注射程序復(fù)雜，山區(qū)農(nóng)村動(dòng)物防疫工作量大，重復(fù)注射次數(shù)多，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，工作效率低，免疫效果差，直接影響動(dòng)物防疫水平和防疫質(zhì)量。為了探索和創(chuàng)新動(dòng)物防疫方法，改進(jìn)和提高動(dòng)物防疫水平，我們組織成立項(xiàng)目組，擬定實(shí)施“羊一畜多苗多點(diǎn)同時(shí)聯(lián)合注射試驗(yàn)”及擴(kuò)大群體試驗(yàn)，研究一畜多苗分點(diǎn)同時(shí)聯(lián)合注射效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)羊抽樣 在通渭縣轄區(qū)隨機(jī)選擇5個(gè)養(yǎng)羊100只左右的養(yǎng)羊場(chǎng)，抽取沒(méi)有注射過(guò)疫苗、沒(méi)有相關(guān)疫苗抗體、符合疫苗注射條件的2-3月齡健康綿羊300只作為試驗(yàn)羊，分別編號(hào)1-300號(hào)，每組20只，共15組，依次為第1組1-20號(hào)至第15組281-300號(hào)。

1.2 疫苗選用 口蹄疫O型亞洲I型二價(jià)滅活疫苗(OS+JS株），（中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)1412003）；羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗（山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)1407009）；小反芻獸疫活疫苗（新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)2014046-2）；山羊痘活菌苗（哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，批號(hào)2014008）。

1.3 試劑選用 口蹄疫O型抗體檢測(cè)試劑盒；（暫無(wú)羊三聯(lián)抗體檢測(cè)試劑盒）；小反芻獸疫阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒；山羊痘ELISA抗體檢測(cè)試劑盒。

1.4 注射方法 按表1的1-15組進(jìn)行單苗注射、兩兩組合、三三組合、 四苗組合注射；每種疫苗按照使用說(shuō)明注射，兩種以上疫苗分別在頸部左右或臀部左右各注射一針，注射時(shí)嚴(yán)格消毒，規(guī)范操作。

2 結(jié)果

表1 試驗(yàn)羊疫苗注射分組

表2 試驗(yàn)羊血清抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)（d、%）

2.1 臨床觀察 羊4種疫苗分組試驗(yàn)注射后，在24h內(nèi)個(gè)別羊陸續(xù)臨床表現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、慢草不食、飲水少量、跛行等副反應(yīng)現(xiàn)象；有副反應(yīng)癥狀的主要是口蹄疫疫苗注射組出現(xiàn)，有跛行癥狀的主要是羊三聯(lián)苗注射組出現(xiàn)，副反應(yīng)率最高15%，平均在10%以下；其它組沒(méi)有明顯臨床癥狀，精神采食等情況基本正常。多種疫苗注射組與單苗注射組出現(xiàn)臨床癥狀的副反應(yīng)率沒(méi)有明顯差異，副反應(yīng)率在15%以下。試驗(yàn)羊48h內(nèi)陸續(xù)全部恢復(fù)正常，沒(méi)有出現(xiàn)疫苗注射后過(guò)敏死亡現(xiàn)象。

2.2 抗體監(jiān)測(cè) 試驗(yàn)羊300只分別于免疫后15、30、45d經(jīng)前腔靜脈采血，每次采血按照試管編號(hào)登記；分離血清，用于抗體檢測(cè)。O型口蹄疫抗體檢測(cè)：采用間接血凝方法，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：羊血清抗體滴度≥1:64（1:26），則判定被檢血清O型口蹄疫抗體合格；抗體滴度<1:26，則判定被檢血清O型口蹄疫抗體不合格。羊痘抗體檢測(cè)：采用間接ELISA方法檢測(cè)，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。OD450≥0.25則判定被檢血清抗體合格；OD450<0.25則判定被檢血清抗體不合格。小反芻獸疫抗體檢測(cè)：采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：PI值≥45﹪，判定被檢血清抗體合格，PI值<45﹪，則判定被檢血清抗體不合格。表2反映試驗(yàn)羊血清抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果。

3 結(jié)論

3.1 羊的口蹄疫苗、羊三聯(lián)苗、小反芻苗、羊痘苗兩兩組合、三三組合、或4種組疫苗在不同部位同時(shí)注射，疫苗注射副反應(yīng)率在15%以下，與單苗注射組相比，臨床癥狀差異不顯著，沒(méi)有增加增強(qiáng)副反應(yīng)的情況出現(xiàn)；安全可靠，適宜推廣應(yīng)用。

3.2.4種疫苗分組試驗(yàn)注射后，分別于15d、30d、45d抽血化驗(yàn)，監(jiān)測(cè)血清抗體（羊三聯(lián)未檢測(cè)），口蹄疫抗體合格率分別達(dá)到75%以上；小反芻苗、羊痘苗合格率分別達(dá)到70%以上；一畜2苗、3苗、4苗分點(diǎn)同時(shí)注射后產(chǎn)生抗體測(cè)定效價(jià)相對(duì)較高而且穩(wěn)定，抗體產(chǎn)生過(guò)程中相互干擾、拮抗作用不明顯，反而表現(xiàn)相互促進(jìn)作用，都能達(dá)到或超過(guò)70%以上的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 通過(guò)對(duì)通渭縣轄區(qū)1萬(wàn)只羊?qū)嵤┮恍蠖嗝缍帱c(diǎn)同時(shí)聯(lián)合注射擴(kuò)群試驗(yàn)，疫苗注射副反應(yīng)率在15%以下，疫苗反應(yīng)死亡率在1/10000以下，抗體抽樣檢測(cè)合格率在70%以上，可以在實(shí)際工作中大規(guī)模推廣應(yīng)用。

3.4 不足之處在于缺少羊三聯(lián)抗體試劑，影響試驗(yàn)的完整性；由于試驗(yàn)規(guī)模較大，對(duì)抗體監(jiān)測(cè)時(shí)間安排較少，難以完成持續(xù)性監(jiān)測(cè)結(jié)果；試驗(yàn)使用口蹄疫等疫苗不同生產(chǎn)廠家、不同批次、不同生產(chǎn)日期的注射效果難以確定和比較分析；對(duì)4種以上的疫苗沒(méi)有比較試驗(yàn)。