張文全　福建省永春縣農(nóng)業(yè)局蓬壺畜牧獸醫(yī)站　362609

馬立克氏病與禽白血病的鑒別診斷方法

張文全福建省永春縣農(nóng)業(yè)局蓬壺畜牧獸醫(yī)站362609

介紹當(dāng)前馬立克氏病與禽白血病的常用鑒別診斷方法，分析各種方法的優(yōu)勢(shì)和不足，同時(shí)提出自己的看法。

馬立克氏病禽白血病鑒別診斷方法

馬立克氏?。∕arek'd isease，MD）是由馬立克氏病毒 （Marek'disease viruse，MDV）引發(fā)的腫瘤性疾病，該病毒屬皰疹病毒科α病毒亞科成員，其3個(gè)血清型中只有血清Ⅰ型的毒株具有致瘤性，主要侵害外周神經(jīng)系統(tǒng)，以周圍神經(jīng)、性腺、虹膜、內(nèi)臟器官、肌肉和皮膚的單獨(dú)或多發(fā)的單核細(xì)胞浸潤為特征，引起雞淋巴組織增生。

禽白血病是由禽白血病病毒 （avian leucosis virus，ALV）引起的家禽多種腫瘤性疾病的總稱，主要以造血細(xì)胞惡性增生為特征，包括淋巴細(xì)胞性白血病、成紅細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞性白血病、骨髓細(xì)胞瘤病等［1］。禽白血病不感染人，我國將其列為二類動(dòng)物疫病，到目前為止，該病在全國已有報(bào)道，其范圍不斷擴(kuò)大，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了嚴(yán)重的損失。

臨床上，除了血管瘤型白血病具有較為典型的臨床癥狀外，馬立克氏病與禽白血病臨床癥狀較為相似，現(xiàn)在介紹兩種疾病的鑒別診斷常見方法。

1　組織病理學(xué)變化

通常人們通過發(fā)病日齡、法氏囊的萎縮情況以及病理組織學(xué)觀察來進(jìn)行區(qū)分內(nèi)臟型馬立克氏病與淋巴性白血?。?］。有學(xué)者認(rèn)為馬立克氏病常侵害外周神經(jīng)、皮膚和肌肉、眼的虹膜，法氏囊被侵害時(shí)常出現(xiàn)萎縮，而淋巴性白血病較少如此。另外，馬立克氏病的腫瘤組織是由小到大的淋巴細(xì)胞成淋巴細(xì)胞漿細(xì)胞等混合組成而，淋巴性白血病的腫瘤細(xì)胞常為成淋巴細(xì)胞組成，這點(diǎn)有重要的診斷意義［3］。但是這類方式受主觀和經(jīng)驗(yàn)影響判斷，并且對(duì)于臨床特征不明顯者進(jìn)行鑒別診斷較為困難。

2　血清學(xué)方法

瓊脂雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（AGIP）是抗原和抗體在凝膠內(nèi)發(fā)生結(jié)合形成沉淀線的反應(yīng)。用羽囊浸液或直接用羽囊作瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢查馬立克氏病和禽白血病是一種簡單易行的方法，在基層獸醫(yī)單位和雞場(chǎng)內(nèi)均可進(jìn)行。該方法的缺點(diǎn)是，敏感性較差，出現(xiàn)一定的假陽性。試驗(yàn)證明，用羽囊瓊擴(kuò)法不能檢出全部馬立克氏病感染的雞［4］。并且這一試驗(yàn)過程需要逐只拔羽取髓，易使雞產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，通常AGIP的反應(yīng)過程需2 d左右。耗時(shí)較長。

使用ELISA方法對(duì)禽白血病進(jìn)行檢測(cè)，目前有禽白血病A、B亞群和J亞群抗體檢測(cè)試劑盒，而對(duì)其他亞群的檢測(cè)則缺少成型試劑盒。由于在ALV感染的雞中有4種血清學(xué)類型：無病毒血癥又無抗體（V-A-）；無病毒血癥，而有抗體（V-A+）；有病毒血癥又有抗體（V+A+）；有病毒血癥而無抗體（V+A-）。因此使用ELISA檢測(cè)易出現(xiàn)假陽性。有一些ELISA方法是通過檢測(cè)p27抗原確立禽白血病的，該抗原在內(nèi)源性病毒和外源性病毒中均屬保守的一種蛋白質(zhì)，利用ELISA所檢測(cè)出的陽性結(jié)果并不能證實(shí)這種蛋白來源于外源性病毒。

3　分子生物學(xué)方法

建立特異性的PCR和RT-PCR診斷方法，可檢測(cè)病毒感染雞多種組織中的前病毒和病毒RNA。與傳統(tǒng)的診斷方法相比，PCR方法優(yōu)點(diǎn)明顯，特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以檢測(cè)出樣品中微量DNA（Ifg），而RT-PCR可以通過對(duì)病毒感染組織或細(xì)胞培養(yǎng)物等樣本進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，檢測(cè)到病毒的RNA。國外學(xué)者Fonseca K等在LTR的ALV基因組的U3和U5區(qū)分別合成內(nèi)外兩對(duì)引物，以單管巢式PCR方法檢測(cè)病料樣本，可直接檢測(cè)外源性白血病病毒；國內(nèi)金志強(qiáng)等［5］、陳乙娥［6］使用該方法對(duì)具有致病致病性的外源性ALV進(jìn)行了檢測(cè)，取得了良好的效果。Silva R F設(shè)計(jì)出用于擴(kuò)增MDV-l特異的l32 bpr序列的引物［7］，它可用于鑒別致弱株和野毒株以及腫瘤中的病毒DNA，也可用PCR來鑒別引起雞淋巴白血病病毒。汪德生等［8］用該方法對(duì)馬立克病病毒強(qiáng)毒株SB-08、馬立克氏病CVI988/Rispens致弱疫苗、雞產(chǎn)蛋下降綜合征病毒、火雞皰疹病毒，雞痘病毒、ALVJ亞群和ALV-A亞群前病毒進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果擴(kuò)增圖譜顯示MDV強(qiáng)毒株SB-08擴(kuò)增出預(yù)期314 bp條帶；而CVI988弱毒疫苗顯現(xiàn)182、314、446、578、710 bp等多個(gè)條帶；而HVT疫苗毒株、雞產(chǎn)蛋下降綜合征病毒HS-1分離毒株、雞痘疫苗毒株、禽白血病ALV-J亞群和ALV-A亞群前病毒DNA樣本均無擴(kuò)增條帶出現(xiàn)。說明利用PCR檢測(cè)方法對(duì)區(qū)分馬立克氏病和禽白血病具有敏感、快捷、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。

4　經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

隨著非典型癥狀的出現(xiàn)，通過臨床鑒別MDV 及ALV感染具有較強(qiáng)的局限性，通過病理組織學(xué)方式進(jìn)行鑒別診斷，則受限于診斷者的經(jīng)驗(yàn)和水平，往往不能做出正確的判斷。血清學(xué)診斷技術(shù)相對(duì)容易，準(zhǔn)確，可檢測(cè)樣本較大，但ELISA方法往往受限于市場(chǎng)檢測(cè)試劑盒的供應(yīng)，AGIP會(huì)出現(xiàn)假陽性情況；分子生物學(xué)方法準(zhǔn)確，但不足之處在于需要技術(shù)員掌握較高的分子生物學(xué)技術(shù)，并且要求的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件較高，不便于大量樣本的檢測(cè)［9］。因此，在實(shí)際工作中，選擇何種方式進(jìn)行兩種疾病的鑒別診斷，還需要因地制宜，并在實(shí)踐中探索出更為有效的診斷方法。

［1］辛朝安.禽病學(xué)［M］.2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：113-114.

［2］費(fèi)強(qiáng).如何防治雞馬立克氏?。跩］.家禽科學(xué)，2014（1）：37-38.

［3］屈亞錦，劉思當(dāng).禽白血病的防控［J］.北方牧業(yè)，2013（4）：15.

［4］駱春陽，林在堯，張如寬.應(yīng)用羽囊瓊脂擴(kuò)散法檢查雞馬立克氏病的試驗(yàn)報(bào)告［J］.江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1980（1）：8-13.

［5］金志強(qiáng)，羅明星，李永明，等.單管套式PCR檢測(cè)外源性禽白血病病毒［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009（11）：41-45.

［6］陳乙娥.一例血管瘤型白血病的診斷 ［J］.福建畜牧獸醫(yī)，2014，36（5）：17-18.

［7］Silva R F.Differentiation of pathogenic and non-pathogenic se-rotype 1 Marek's disease viruses（MDVs）by the polymerasechain reaction amplification of the tandem direct repeat w ith the MDV genome［J］.Avian Dis，1992，36（3）：521-528.

［8］汪德生，李永明，史開志，等.雞馬立克病病毒強(qiáng)毒與疫苗毒PCR鑒別檢測(cè)方法的建立［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（7）：26-30.

［9］奚德華，梁有志，尹麗萍，等.規(guī)?；N禽場(chǎng)禽白血病檢測(cè)方法的比較及初步應(yīng)用［J］.中國家禽，2014，36（4）：14-17.

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