馬秀清，陳良安

解放軍總醫(yī)院 呼吸科，北京 100853

細(xì)菌耐藥性檢測方法的研究進(jìn)展

馬秀清，陳良安

解放軍總醫(yī)院 呼吸科，北京 100853

明確致病菌的耐藥特性是指導(dǎo)各種細(xì)菌感染性疾病治療的關(guān)鍵。常規(guī)藥敏試驗需要從標(biāo)本中分離出菌株，操作煩瑣、費時。近年來，一些分子生物學(xué)技術(shù)在細(xì)菌耐藥性檢測領(lǐng)域取得了很大進(jìn)步，但臨床應(yīng)用方面還有待改善。本文重點介紹幾種技術(shù)在細(xì)菌耐藥性檢測中的新進(jìn)展，為臨床實現(xiàn)細(xì)菌耐藥性的快速準(zhǔn)確檢測提供參考。

細(xì)菌；抗藥性；藥敏試驗

隨著抗生素的使用，耐藥菌不斷出現(xiàn)，特別是“超級耐藥菌”的報道引起了全世界對細(xì)菌耐藥性問題的關(guān)注。因此，謹(jǐn)慎合理地使用抗生素顯得尤為重要?？焖贉?zhǔn)確的檢測致病菌耐藥性是指導(dǎo)合理使用抗生素的關(guān)鍵。常規(guī)的藥敏試驗需要從臨床標(biāo)本中分離出菌株，耗費時間長，且許多生長慢或不容易培養(yǎng)的細(xì)菌不能通過藥敏試驗進(jìn)行耐藥性檢測。近年來，聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)、基因芯片、飛行時間質(zhì)譜、微流體芯片、全基因組測序等技術(shù)在快速檢測細(xì)菌耐藥性方面迅速發(fā)展。本文就幾種技術(shù)在快速檢測細(xì)菌耐藥性方面的新進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 藥敏試驗

藥敏試驗是目前各實驗室檢測細(xì)菌耐藥性的常規(guī)方法[1]，主要包括肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法、K-B紙片法、E-test實驗及各種自動化藥敏分析系統(tǒng)，如Vitek系統(tǒng)、MicroScan WalkAway系統(tǒng)、Phoenix Automated Microbiology系統(tǒng)等。魏丹丹等[2]采用Vitek 2 Compact和MicroScan Walk Away 40 SI全自動微生物鑒定儀檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA)的靈敏度為95.45%和93.18%，特異度為94.12%和92.68%，符合率為94.87%和92.94%，提示兩種系統(tǒng)均可用于MRSA的檢測，但前提是需要分離臨床菌株。藥敏試驗的優(yōu)點：有國際化的標(biāo)準(zhǔn)操作流程[3]，敏感性高，肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法和E-test試驗?zāi)軌驒z測藥物的最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)，指導(dǎo)用藥劑量，每種方法均有相應(yīng)的試劑盒減輕了操作者的負(fù)擔(dān)。缺點：不能直接檢測臨床標(biāo)本，需要培養(yǎng)才能鑒定出耐藥菌株，培養(yǎng)受限的菌株無法進(jìn)行藥敏試驗?？梢姡幟粼囼灢荒芡耆珴M足臨床的需求。

2 PCR技術(shù)

以PCR為基礎(chǔ)的技術(shù)包括普通PCR和實時熒光定量PCR(Real-time PCR)，其原理都是基于目的基因特異片段的擴(kuò)增。由于每種細(xì)菌均有自己的特異基因或片段，所以最初PCR用于菌種的鑒定和定量分析。隨著細(xì)菌耐藥機(jī)制研究的進(jìn)展，PCR也應(yīng)用于細(xì)菌耐藥基因的檢測中。首先，最具影響力的是采用PCR方法檢測金黃色葡萄球菌中mecA基因的表達(dá)，從而篩選出MRSA。目前，利用普通PCR或Real-time PCR檢測mecA基因及其相關(guān)片段的商業(yè)化檢測系統(tǒng)已經(jīng)產(chǎn)生，如BD公司的GeneOhm系統(tǒng)[4]和Cepheid公司的GeneXpert系統(tǒng)[5]，均能在數(shù)小時內(nèi)完成對標(biāo)本的檢測。Dalpke等[6]共收集734例鼻拭子、30例肛周拭子和26例外科感染傷口拭子，采用BD Max MRSA全自動檢測儀，從標(biāo)本處理到出結(jié)果，共耗時約150 min，靈敏度和特異度分別為93.9%和99.2%。在PCR方法與傳統(tǒng)藥敏方法比較的研究中顯示[7]，PCR使患者得到最佳抗生素治療的時間縮短了25.4 h。一個多中心報道也提示，GeneXpert系統(tǒng)的靈敏度超過了93%，適合臨床應(yīng)用[4]。PCR技術(shù)在耐萬古霉素腸球菌的耐藥基因vanA和vanB的檢測中也有應(yīng)用，但vanB的假陽性比較高，特異性差[8]。PCR技術(shù)檢測革蘭陰性菌中耐藥基因的報道也很多，例如多重real time PCR法檢測碳青霉烯類的耐藥基因KPC、NDM、VIM、IMP、OXA-48[9]，多重TaqMan PCR法檢測質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC類β-內(nèi)酰胺酶基因[10]等。

另外，利用Real-time PCR能夠定量檢測目的基因拷貝數(shù)的優(yōu)勢，檢測細(xì)菌在抗生素環(huán)境中的生長情況，可縮短培養(yǎng)時間，這是PCR技術(shù)在耐藥基因檢測中應(yīng)用的一個新思路。ompA基因在鮑曼不動桿菌中呈恒定表達(dá)，能反應(yīng)鮑曼不動桿菌的生長情況。有報道[11]通過Real-time PCR分別監(jiān)測多黏菌素、環(huán)丙沙星和亞胺培南環(huán)境中，兩株鮑曼不動桿菌ompA基因的拷貝數(shù)，成功地鑒別出了敏感株和耐藥株。該方法雖然也進(jìn)行了培養(yǎng)，但實時熒光定量PCR檢測所需樣品量少，較傳統(tǒng)藥敏試驗時間短。因此，PCR技術(shù)在細(xì)菌耐藥基因檢測的應(yīng)用中具有快速、靈敏度高的優(yōu)勢，但1次PCR檢測的耐藥基因數(shù)目非常有限。

3 基因芯片技術(shù)

基因芯片技術(shù)是一種高通量自動化檢測技術(shù)，其基本原理是將一組已知序列的核酸探針固定在基片上，與未知序列進(jìn)行雜交，從而達(dá)到檢測目的，可檢測到10 ～ 100個DNA的拷貝數(shù)?；蛐酒诓≡⑸锓肿釉\斷方面可用于病原體菌種鑒定、分型、診斷、耐藥基因檢測等多個領(lǐng)域，一直是研究的熱點。在具體操作中，有的將標(biāo)本全基因組DNA進(jìn)行隨機(jī)引物擴(kuò)增，標(biāo)記上Cy3熒光染料，與芯片雜交，然后用儀器進(jìn)行分析，但熒光染料和儀器價格昂貴，分析復(fù)雜[12]；有的將PCR和芯片技術(shù)相結(jié)合，先利用標(biāo)記的引物擴(kuò)增出標(biāo)本DNA特異的目的片段，再與芯片反應(yīng)，分析結(jié)果，適合耐藥基因的檢測[13]。

近年來，基因芯片技術(shù)在細(xì)菌耐藥基因檢測的應(yīng)用中，也有新的改進(jìn)，尤其在芯片的試驗步驟、信號采集和分析方法等環(huán)節(jié)進(jìn)行了各種改進(jìn)，簡化了操作，降低了成本。Naas等[14]利用多重結(jié)扎介導(dǎo)PCR技術(shù)(multiplex ligation detection reaction，LDR)，一對引物便可擴(kuò)增出所有的特異片段，然后標(biāo)記上生物素，與芯片雜交，結(jié)果的判讀也很方便。該團(tuán)隊對研制的芯片進(jìn)行不斷升級[15-16]，在最新的升級版芯片中可一次性檢測超廣譜β內(nèi)酰胺類耐藥基因TEM、SHV、CTX-M，質(zhì)粒介導(dǎo)的頭孢菌素類耐藥基因CMY-2-like、DHA、FOX、ACC-1、ACT/MIR、CMY-1-like/MOX，碳青霉烯類耐藥基因KPC、OXA-48、VIM、IMP、NDM，經(jīng)臨床菌株驗證顯示，敏感性和特異性均為100%，但還沒有直接應(yīng)用于臨床標(biāo)本。在耐藥基因檢測方面也有相關(guān)的試劑盒通過了FDA批準(zhǔn)，如Curetis公司的UnyveroTMP50試劑盒[17]，敏感性為55% ～ 100%，特異性為72.3% ～ 100%。該試劑盒采用了多重PCR擴(kuò)增標(biāo)本中目的片段，4 h出結(jié)果，能檢測22種耐藥基因，包括β內(nèi)酰胺類、氟奎諾酮類和1類整合子耐藥基因。

在我國，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院研發(fā)了一種利用新型納米金標(biāo)底物信號放大技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的熒光標(biāo)記技術(shù)[13]。其原理是將下游引物標(biāo)記生物素，經(jīng)多重PCR與芯片雜交后，洗去未結(jié)合的帶生物素標(biāo)記的引物片段，再與連有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)的親和素分子結(jié)合，HRP可催化酪胺分子大量沉積在其表面，起到級聯(lián)放大的作用，將靈敏度提高10 ～ 100倍，結(jié)果肉眼可見，形成可視化基因芯片，無需信號采集和分析儀器，很大程度上降低了成本，非常適合臨床體外診斷。對于難培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌，我國國家食品藥品監(jiān)督管理局(CFDA)批準(zhǔn)了北京博奧生物有限公司生產(chǎn)的結(jié)核分枝桿菌耐多藥基因芯片檢測試劑盒，其原理基于katG、inhA和rpoB基因突變導(dǎo)致對利福平和異煙肼多藥耐藥的機(jī)制，分離株或痰標(biāo)本均可檢測，6 h內(nèi)出結(jié)果[18]，而傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法需要4 ～ 6周，該試劑盒極大縮短了檢測時間，有利于指導(dǎo)臨床用藥。

4 飛行時間質(zhì)譜

基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)是一種新型的軟電離生物質(zhì)譜。其原理是先將生物分子電離，離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時間不同形成蛋白質(zhì)指紋譜，然后經(jīng)軟件與數(shù)據(jù)庫中標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對比，即可確定所檢微生物的類型，具有靈敏度高、準(zhǔn)確、快速的優(yōu)勢。

MALDI-TOF MS技術(shù)主要應(yīng)用于菌種的鑒定，而在致病菌耐藥性方面的檢測還有爭議。Edwards-Jones等[19]曾利用MALDI-TOF MS技術(shù)成功分辨出甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌和甲氧西林敏感的金黃色葡萄球菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus，MSSA)。但2013年證實該技術(shù)能夠區(qū)分MRSA和MSSA，不是因為敏感和耐藥的區(qū)別，而是由于金葡菌克隆譜系的不同[20]。因此該技術(shù)不能直接用來鑒定MRSA和MSSA。如何將MALDI-TOF MS技術(shù)成功應(yīng)用于致病菌的耐藥性檢測呢？Hrabak等[21]利用耐藥菌株水解抗生素產(chǎn)生的產(chǎn)物來反映菌株的耐藥性，在124株腸桿菌和銅綠假單胞菌中，利用MALDI-TOF MS技術(shù)檢測美羅培南的水解產(chǎn)物，準(zhǔn)確地反應(yīng)了碳青霉烯酶的活性，敏感性和特異性分別為96.67%和97.87%。Hrabak等[22]也利用該方法通過抗生素水解產(chǎn)物指紋譜峰值的不同，成功地檢測到了腸桿菌中VIM-1、KPC、OXA-48和OXA-162耐藥基因和鮑曼不動桿菌中NDM1耐藥基因。雖然MALDITOF MS技術(shù)在致病菌耐藥性方面的研究取得了一定的進(jìn)展，但該技術(shù)影響因素很多，需要制定標(biāo)準(zhǔn)的操作流程，此外標(biāo)準(zhǔn)指紋譜庫還有待完善。

5 微流體芯片

微流體芯片是隨著微電子、微機(jī)械、生物工程和納米技術(shù)的發(fā)展而產(chǎn)生的，可以在幾平方厘米的芯片上完成分子生物所涉及的樣品處理、反應(yīng)、檢測等復(fù)雜的操作，實現(xiàn)常規(guī)實驗室的各種功能，所以又稱為芯片實驗室。Choi等[23]在含有瓊脂糖的微流體裝置中，顯微鏡追蹤觀察單個細(xì)胞在抗生素下的生長情況，比傳統(tǒng)的藥敏試驗時間短，3 ～4 h就可以提供MIC值。該方法還在不斷地改進(jìn)中，如通過抗生素下細(xì)菌代謝產(chǎn)物pH值的變化來檢測細(xì)菌的生長[24]，通過熒光染色觀察抗生素下細(xì)菌的生長情況[25]。目前有報道微流體芯片可直接檢測患者尿液標(biāo)本，3.5 h內(nèi)出結(jié)果，與傳統(tǒng)藥敏試驗相比，有94%的符合率[26]。但還沒有直接檢測臨床其他類型標(biāo)本的研究。微流體芯片由于體積微小，所以具有快速、高通量、低消耗的優(yōu)點，但也是由于體積微小很容易受一些因素干擾，如靜電、pH值、溫度等。另外微流體芯片需要輔助操作設(shè)施，價格昂貴，需要經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員操作。該技術(shù)還處于早期實驗室研發(fā)階段。

6 全基因組測序

隨著人類基因組計劃的完成，全基因組測序也滲透到各個研究領(lǐng)域，包括細(xì)菌耐藥方面的研究。全基因組測序能夠提供檢測樣品的完整序列，通過數(shù)據(jù)庫分析可發(fā)現(xiàn)大量的信息，但價格貴，分析時間長，一直用于某些特殊菌株的測序。Zankari等[27]提出將全基因組測序應(yīng)用于臨床常規(guī)檢測的觀點，并收集了200株菌，包含傷寒沙門桿菌、大腸埃希菌、糞腸球菌、屎腸球菌4個菌種，將所有菌株全基因組測序結(jié)果和藥敏試驗比較，符合率為99.74%，可見全基因組測序基本能正確反應(yīng)細(xì)菌的耐藥性。在我國，朱健銘等[28]利用高通量測序技術(shù)對泛耐藥肺炎克雷伯菌JM 45株做了全基因組測序，得到該菌株1條完整的基因組序列及2條質(zhì)粒序列，其中基因組序列中攜帶了耐藥基因gyrA和parC，與肺炎克雷伯菌喹諾酮類藥物敏感株比較，gyrA基因第83位密碼子TCC→ATC突變，parC基因第80位密碼子AGC→ATC突變，為該菌株耐藥機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。另外，全基因組測序在多藥耐藥菌株暴發(fā)流行時起到了重要的作用，如MRSA在美國多家醫(yī)院的暴發(fā)流行時，通過全基因組測序，比較金黃色葡萄球菌敏感株和耐藥株序列的差異，對耐藥株的耐藥機(jī)制進(jìn)行了充分研究[29]；大腸埃希菌(E. coli O104：H4)在德國的暴發(fā)流行時，同樣是全基因組測序使人們更充分的認(rèn)識到了E. coli O104：H4的耐藥機(jī)制[30]。因此在耐藥菌暴發(fā)初期，積極地進(jìn)行耐藥菌全基因組測序是十分必要的。

7 結(jié)語

細(xì)菌耐藥性檢測主要包括藥敏試驗和耐藥基因檢測。由于藥敏試驗需要2 ～ 3 d出結(jié)果，這期間臨床醫(yī)生只能依靠經(jīng)驗性治療。而以上幾種耐藥基因檢測方法以其較高的敏感性和特異性，可以在藥敏試驗結(jié)果出來前為臨床提供參考，減少經(jīng)驗性治療，提高療效。但基因檢測方法也存在不足：1)PCR、基因芯片、飛行時間質(zhì)譜和微流體芯片技術(shù)不能檢測到新的耐藥機(jī)制，可導(dǎo)致治療不足；2)PCR、基因芯片、飛行時間質(zhì)譜和全基因組測定技術(shù)不能確定含有耐藥基因的菌株是否處于耐藥狀態(tài)，容易產(chǎn)生過度治療；3)PCR、基因芯片、飛行時間質(zhì)譜和全基因組測定技術(shù)不能提供MIC值，無法指導(dǎo)臨床用藥劑量。目前我國雖然有很多細(xì)菌耐藥性檢測的基礎(chǔ)研究，也有些試劑盒經(jīng)過了CFDA的批準(zhǔn)，但檢測的范圍還十分局限，臨床應(yīng)用仍然受限。因此，還需不斷努力探索更實用、更快速、更準(zhǔn)確的細(xì)菌耐藥性檢測方法。

1 郝秀紅，趙強(qiáng)元，李艷君，等.2012年臨床常見細(xì)菌分離及耐藥性監(jiān)測［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，34（10）：1029-1032.

2 魏丹丹，劉洋，萬臘根. Vitek 2 Compact 和 MicroScan WalkAway 40 SI 檢測MRSA的性能評價［J］. 實驗與檢驗醫(yī)學(xué)， 2014， 32（5）： 505-507.

3 Bobenchik AM， Hindler JA， Giltner CL， et al. Performance of vitek 2 for antimicrobial susceptibility testing of staphylococcus spp. and enterococcus spp［J］. J Clin Microbiol， 2014， 52（2）： 392-397.

4 Wang XP， Ginocchio CC. Automation of the BD GeneOhm methicillin-resistant Staphylococcus aureus assay for high-throughput screening of nasal swab specimens［J］. J Clin Microbiol， 2009， 47（5）：1546-1548.

5 Wolk DM， Picton E， Johnson D， et al. Multicenter evaluation of the cepheid xpert Methicillin-Resistant staphylococcus aureus （MRSA）test as a rapid screening method for detection of MRSA in nares［J］. J Clin Microbiol， 2009， 47（3）： 758-764.

6 Dalpke AH， Hofko M， Zimmermann S. Comparison of the BD max Methicillin-Resistant staphylococcus aureus （MRSA） assay and the BD GeneOhm MRSA achromopeptidase assay with direct- and Enriched-Culture techniques using clinical specimens for detection of MRSA［J］. J Clin Microbiol， 2012， 50（10）： 3365-3367.

7 Carver PL， Lin SW， DePestel DD， et al. Impact of mecA gene testing and intervention by infectious disease clinical pharmacists on time to optimal antimicrobial therapy for Staphylococcus aureus bacteremia at a University Hospital［J］. J Clin Microbiol， 2008， 46（7）：2381-2383.

8 Gazin M， Lammens C， Goossens H， et al. Evaluation of GeneOhm VanR and xpert vanA/vanB molecular assays for the rapid detection of vancomycin-resistant enterococci［J］. Eur J Clin Microbiol Infect Dis， 2012， 31（3）： 273-276.

9 Van Der Zee A， Roorda L， Bosman G， et al. Multi-centre evaluation of real-time multiplex PCR for detection of carbapenemase genes OXA-48， VIM， IMP， NDM and KPC［J］. BMC Infect Dis， 2014，14： 14-27.

10 Geyer CN， Reisbig MD， Hanson ND. Development of a TaqMan multiplex PCR assay for detection of plasmid-mediated ampC β-lactamase genes［J］. J Clin Microbiol， 2012， 50（11）：3722-3725.

11 Martin-Pena R， Dominguez-Herrera J， Pachon JA. Rapid detection of antibiotic resistance in Acinetobacter baumannii using quantitative real-time PCR［J］. J Antimicrob Chemother， 2013， 68（7）：1572-1575.

12 Fu YL， Pan Y， Pan MJ， et al. Development of a high-throughput DNA microarray for drug-resistant gene detection and its preliminary application［J］. J Microbiol Methods， 2012， 89（2）： 110-118.

13 劉琪琦，王升啟.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物芯片研究進(jìn)展［J］.中國科學(xué)：生命科學(xué)，2011，41（10）：790-795.

14 Naas T， Cuzon G， Truong H， et al. Evaluation of a DNA microarray，the Check-Points ESBL/KPC array， for rapid detection of TEM，SHV， and CTX-M Extended-Spectrum beta-Lactamases and KPC carbapenemases［J］. Antimicrob Agents Chemother， 2010， 54（8）：3086-3092.

15 Naas T， Cuzon G， Bogaerts P， et al. Evaluation of a DNA microarray（Check-MDR CT102） for rapid detection of TEM， SHV， and CTX-M Extended-Spectrum beta-Lactamases and of KPC， OXA-48， VIM，IMP， and NDM-1 carbapenemases［J］. J Clin Microbiol， 2011， 49（4）： 1608-1613.

16 Cuzon G， Naas T， Bogaerts P， et al. Evaluation of a DNA microarray for the rapid detection of extended-spectrum -lactamases （TEM，SHV and CTX-M）， plasmid-mediated cephalosporinases （CMY-2-like， DHA， Fox， ACC-1， ACT/MIR and CMY-1-like/MOX） and carbapenemases （KPC， OXA-48， VIM， IMP and NDM）［J］. J Antimicrob Chemother， 2012， 67（8）： 1865-1869.

17 Jamal W， Al Roomi E， Abdulaziz LR， et al. Evaluation of curetis unyvero， a multiplex PCR-Based testing system， for rapid detection of bacteria and antibiotic resistance and impact of the assay on management of severe nosocomial pneumonia［J］. J Clin Microbiol，2014， 52（7）： 2487-2492.

18 趙冰，時金艷，逄宇，等.基因芯片結(jié)核分枝桿菌耐多藥檢測在地市級實驗室的應(yīng)用性評估［J］.中國防癆雜志，2013，35（9）：718-722.

19 Edwards-Jones V， Claydon MA， Evason DJ， et al. Rapid discrimination between methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus by intact cell mass spectrometry［J］. J Med Microbiol， 2000， 49（3）：295-300.

20 Josten M， Reif M， Szekat C， et al. Analysis of the Matrix-Assisted laser desorption Ionization-Time of flight mass spectrum of staphylococcus aureus identifies mutations that allow differentiation of the main clonal lineages［J］. J Clin Microbiol， 2013， 51（6）：1809-1817.

21 Hrabak J， Walkova R， Studentova VA， et al. Carbapenemase activity detection by Matrix-Assisted laser desorption Ionization-Time of flight mass spectrometry［J］. J Clin Microbiol， 2011， 49（9）：3222-3227.

22 Hrabak J， Studentova V， Walkova RA， et al. Detection of NDM-1，VIM-1， KPC， OXA-48， and OXA-162 carbapenemases by Matrix-Assisted laser desorption Ionization-Time of flight mass spectrometry［J］. J Clin Microbiol， 2012， 50（7）： 2441-2443.

23 Choi J， Jung YG， Kim J， et al. Rapid antibiotic susceptibility testing by tracking single cell growth in a microfluidic agarose Channel system［J］. Lab Chip， 2013， 13（2）： 280-287.

24 Tang YY， Zhen L， Liu JQ， et al. Rapid antibiotic susceptibility testing in a microfluidic pH sensor［J］. Anal Chem， 2013， 85（5）：2787-2794.

25 Mohan R， Mukherjee A， Sevgen SE， et al. A multiplexed microfluidic platform for rapid antibiotic susceptibility testing［J］. Biosens Bioelectron， 2013， 49： 118-125.

26 Mach KE， Mohan R， Baron EJ， et al. A biosensor platform for rapid antimicrobial susceptibility testing directly from clinical samples［J］. J Urol， 2011， 185（1）： 148-153.

27 Zankari E， Hasman H， Kaas RS， et al. Genotyping using wholegenome sequencing is a realistic alternative to surveillance based on phenotypic antimicrobial susceptibility testing［J］. J Antimicrob Chemother， 2013， 68（4）： 771-777.

28 朱健銘，姜如金，吳康樂，等.全基因測序法分析肺炎克雷伯菌JM45株對喹諾酮類藥物耐藥基因［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（10）：2341-2344.

29 K?ser CU， Holden MT， Ellington MJ， et al. Rapid whole-genome sequencing for investigation of a neonatal MRSA outbreak［J］. N Engl J Med， 2012， 366（24）：2267-2275.

30 Mellmann A， Harmsen D， Cummings CA， et al. Prospective genomic characterization of the German enterohemorrhagic escherichia coli O104：H4 outbreak by rapid next Generation sequencing technology［J］. PLoS One， 2011， 6（7）： e22751.

Advances in detection of bacterial drug resistance

MA Xiuqing, CHEN Liang'an

Department of Respiratory Diseases, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

CHEN Liang'an. Email: chenliangan301@163.com

The detection of bacterial drug resistance is essential for guiding the treatment of many types of bacterial infections. The most commonly employed method is antimicrobial susceptibility testing. This method requires that the pathogens are isolated from the clinical samples before testing, and it is complicated and also takes time. In recent years, some molecular biology techniques have made great progress in the detection of bacterial drug resistance, but still need to be improved in clinical practice. This paper aims to highlight several techniques and provide references for rapid pathogen resistance detecting in clinical practice.

bacteria; drug resistance; drug sensitivity test

R 446.5

A

2095-5227(2015)04-0404-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2015.04.027

時間：2014-12-12 10:53

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20141212.1053.003.html

2014-09-16

北京市科技專項(Z121107002812029)

Supported by the Beijing Science and Technology Program(Z1211070028 12029)

馬秀清，女，碩士，主管技師。研究方向：肺炎致病菌的耐藥機(jī)制。

Email: mxq820812@163.com

陳良安，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師。Email: chenliangan301 @163.com