楊 松,張 伶，鄒 韜,楊興明,趙冰海,陳科宇(.四川省南充市紅十字中心血站 637000；.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院/臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室/重慶市重點實驗室 40006)

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南充市Rh陰性獻(xiàn)血者血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體調(diào)查*

楊 松1,張 伶2，鄒 韜1,楊興明1,趙冰海1,陳科宇1(1.四川省南充市紅十字中心血站 637000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院/臨床檢驗診斷學(xué)教育部重點實驗室/重慶市重點實驗室 400016)

目的 調(diào)查南充市Rh陰性無償獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體情況。方法 應(yīng)用血型血清學(xué)方法對初檢Rh陰性的獻(xiàn)血者進(jìn)行Rh陰性確認(rèn)、血清學(xué)表型鑒定及不規(guī)則抗體篩選鑒定。結(jié)果 在433份送檢標(biāo)本中共確認(rèn)Rh陰性402份(92.8%)，檢出D變異體23份(5.3%)，其余8份(1.9%)為檢驗科RhD檢測錯誤；共檢出不規(guī)則抗體12份，在Rh確認(rèn)陰性獻(xiàn)血者中檢出7份抗-D(1.7%)；Rh陰性獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型分布結(jié)果主要以dccee和dCcee為主，其余為dCCee、dccEe和dCcEe。結(jié)論 通過本次調(diào)查，掌握了南充市Rh陰性無償獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體的分布情況，保障了臨床Rh陰性患者輸血安全性、有效性和及時性。

Rh陰性； D變異體； 血清學(xué)表型； 不規(guī)則抗體

Rh血型系統(tǒng)是人類最具多態(tài)性的血型系統(tǒng)，其臨床意義僅次于ABO血型系統(tǒng)，可以引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病及自身免疫性溶血性貧血等[1]。四川省南充市紅十字中心血站對Rh陰性無償獻(xiàn)血者群體進(jìn)行了重要抗原分型及不規(guī)則抗體的檢測，從而建立本地區(qū)的Rh陰性無償獻(xiàn)血者血型血清學(xué)檔案庫，有助于血站對Rh陰性無償獻(xiàn)血者群體的科學(xué)管理，為臨床輸血的安全性、有效性和及時性提供保障，避免血液浪費。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2010年4月至2014年9月南充市無償獻(xiàn)血者經(jīng)四川省南充市紅十字中心血站檢驗科初檢Rh陰性標(biāo)本共433份(重復(fù)獻(xiàn)血者只計為1份)，待確認(rèn)標(biāo)本為同源血袋導(dǎo)管內(nèi)血液，送至輸血研究室進(jìn)行確認(rèn)，全血枸櫞酸鹽抗凝。

1.2 儀器與試劑 抗-D(IgM)、抗-D(IgG)、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、多特異性抗IgG+C3d、篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品；凝聚胺介質(zhì)試劑采用珠海貝索生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；抗-D(IgM+IgG)采用英國Millipore公司產(chǎn)品；人源抗-D采用江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；血型血清學(xué)專用離心機(jī)KA-2200采用日本久保田公司產(chǎn)品；血庫標(biāo)準(zhǔn)化離心機(jī)2005-1采用珠海Baso產(chǎn)品。

1.3 Rh陰性篩選及確認(rèn)試驗 抗-D試劑(IgM)采用試管鹽水法對送檢標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核，隨后采用3種不同廠家的抗-D(IgG)試劑做抗人球蛋白試驗進(jìn)行確認(rèn)。

1.4 抗體篩選和鑒定 使用篩選細(xì)胞，采用試管鹽水法和凝聚胺法對所有送檢標(biāo)本血漿進(jìn)行不規(guī)則抗體篩選，如檢出不規(guī)則抗體的存在，再用譜細(xì)胞通過抗人球蛋白法進(jìn)行抗體鑒定。

1.5 Rh血清學(xué)表型鑒定 分別用抗-C、抗-c、抗-E、抗-e單克隆試劑，采用試管鹽水法對送檢標(biāo)本進(jìn)行Rh系統(tǒng)重要抗原分型。

2 結(jié) 果

2.1 Rh陰性確認(rèn)情況 在433份送檢標(biāo)本中共確認(rèn)Rh陰性402份(92.8%)，檢出D變異體23份(5.3%)，其余8份(1.9%)為檢驗科RhD檢測錯誤。

2.2 抗體篩選和鑒定情況 共檢出不規(guī)則抗體12份，在Rh確認(rèn)陰性獻(xiàn)血者中檢出7份抗-D(1.7%)，其余為3份抗-P1，1份抗-M，1份冷自身抗體。而在D變異體和RhD檢測錯誤標(biāo)本中均未檢出不規(guī)則抗體。

2.3 Rh陰性獻(xiàn)血者血清學(xué)表型分布結(jié)果 共檢出5種表型，其中dccee為201份(50.0%)，dCcee為150份(37.3%)，dCCee為35份(8.7%)，dccEe為11份(2.7%)，dCcEe為5份(1.3%)。

3 討 論

人類Rh血型系統(tǒng)的臨床意義僅次于ABO血型系統(tǒng)，也是最具多態(tài)性的血型系統(tǒng)。Rh血型系統(tǒng)中與臨床輸血關(guān)系密切的主要是D、C、c、E、e等5種抗原，D免疫原性最強(qiáng)，其次是E抗原。紅細(xì)胞表面上有D抗原的稱為Rh陽性，缺乏D抗原的稱為Rh陰性。但研究發(fā)現(xiàn)，D抗原存在多種變異體，包括弱D、部分D和Del型，D變異體的分子機(jī)制和臨床意義得到了輸血工作者的高度重視。近年來，相關(guān)文獻(xiàn)陸續(xù)報道，輸注D變異體紅細(xì)胞可使Rh陰性患者產(chǎn)生抗-D，甚至D抗原數(shù)量極少的Del型紅細(xì)胞也會引起免疫反應(yīng)[2-3]。

筆者從433份送檢標(biāo)本中共確認(rèn)Rh陰性402份，同時發(fā)現(xiàn)23份D變異體和8份檢測錯誤，分別占送檢標(biāo)本的5.3%和1.9%。可見，初檢為Rh陰性的標(biāo)本必須進(jìn)行Rh確認(rèn)試驗，從而排除D變異體和檢測錯誤等情況，如有必要，可進(jìn)一步通過吸收放散試驗排除Del型。中國Rh陰性人群中有較高比例的Del型，姜健等[4]在351份鹽水抗-D陰性標(biāo)本中檢出Del型32份。李宏等[5]研究發(fā)現(xiàn)，D變異體在四川地區(qū)有極其豐富的多態(tài)性，且發(fā)現(xiàn)了新的等位基因，提示作者進(jìn)一步研究方向為南充市D變異體形成的分子機(jī)制。為了提高Rh陰性血液制劑輸注的安全性，作者對Rh陰性獻(xiàn)血者群體普查不規(guī)則抗體，檢出不規(guī)則抗體12 份，7份為抗-D。經(jīng)隨訪調(diào)查這7例獻(xiàn)血者均存在免疫史，6例女性獻(xiàn)血者有妊娠史，1例男性獻(xiàn)血者有輸血史。本次調(diào)查南充市Rh陰性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢出率為2.99%，在23 份D變異體的血漿中未檢出不規(guī)則抗體；而周國平等[6]報道，上海市Rh陰性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體的檢出率為0.69%，在66份D變異體的血漿中亦未檢出不規(guī)則抗體。四川省南充市紅十字中心血站對于含有不規(guī)則抗體的Rh陰性血液，處置措施為紅細(xì)胞成分制成洗滌紅細(xì)胞供應(yīng)臨床，而血漿予以報廢或作為科研用途。Rh陰性獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型分布結(jié)果表明，主要以dccee和dCcee為主，其余為dCCee、dccEe和dCcEe，本次調(diào)查未檢出dccEE、dCcEE、dCCEe、dCCEE等表型，與重慶、成都地區(qū)分布情況相似[7]，也與東部的青島、麗水等地區(qū)分布情況相似[8-9]。

為適應(yīng)臨床輸血發(fā)展的要求，四川省南充市紅十字中心血站通過建立一支Rh陰性獻(xiàn)血者應(yīng)急隊伍，并開展Rh陰性紅細(xì)胞低溫冰凍技術(shù)，保障了臨床Rh陰性患者的用血及時性。同時，對Rh陰性獻(xiàn)血者群體進(jìn)行血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體調(diào)查，建立Rh陰性獻(xiàn)血者血型血清學(xué)檔案庫，可盡快地為患者提供配血相合的血液，提高臨床Rh陰性患者的用血有效性和安全性。通過本次調(diào)查，掌握了Rh陰性無償獻(xiàn)血者的血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體的分布情況，并為下一步研究本地區(qū)Rh陰性形成的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

[1]徐研，洪纓，鄭小芳.成都地區(qū)獻(xiàn)血人群RhD陰性個體RhD基因分子機(jī)制研究[J].中國輸血雜志，2014，27(2)：146-148.

[2]Wanger T，Kormoczi GF，Buchta C，et al．Anti-D immunization by DEL red blood cells[J]．Transfusion，2005，45(4):520-526．

[3]Yasuda H，Ohto H，Sakuma S，et al．Secondary anti-D immunization by Del red blood cells[J]．Transfusion，2005，45(10):1581-1584．

[4]姜健，夏衛(wèi)，郁心，等.無錫地區(qū)獻(xiàn)血者D變異體的檢定結(jié)果[J].中國輸血雜志，2010，23(11)：942-943.

[5]李宏，宋寧，鄧永福，等.四川地區(qū)漢族人群Rh(D)變異體分子機(jī)制研究[J].中國輸血雜志，2010，23(5)：368-372.

[6]周國平，謝云崢，向東，等.上海市Rh陰性獻(xiàn)血者D變異型與不規(guī)則抗體調(diào)查[J].臨床檢驗雜志，2009,27(3):233-234.

[7]王芳，黃霞，毛偉，等.重慶地區(qū)獻(xiàn)血者RhD陰性血型抗原分布調(diào)查[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，30(2)：199.

[8]潘海平，于琦，張霞.青島地區(qū)Rh陰性獻(xiàn)血者表現(xiàn)型分布[J].中國輸血雜志，2012，25(9)：875.

[9]莊杰，趙龍友，紀(jì)勇平，等.麗水市Rh陰性獻(xiàn)血者血清學(xué)表型和不規(guī)則抗體調(diào)查[J].中國輸血雜志，2012，25(6)：578-579.

Investigation on serological phenotype and irregular antibody of Rh negative blood donors in Nanchong*

YANGSong1,ZHANGLing2,ZOUTao1,YANGXing-ming1,ZHAOBing-hai1,CHENKe-yu1

(1.NanchongRedCrossCentralBloodStation,Nanchong,Sichuan637000,China;2.DepartmentofLaboratoryScience,ChongqingMedicalUniversity/KeyLaboratoryofLaboratoryScienceofMinisterofEducationofPeople′sRepublicofChina/KeyLaboratoryofChongqing,Chongqing400016,China)

Objective To investigate the serological phenotype and irregular antibody of Rh negative blood donors in Nanchong.Methods Blood group serology was used to reconfirm Rh negative、to screen and identify the serological phenotype and irregular antibody for Rh negative blood donors in primary detectionResults Among 433 specimens,a total of 402 cases(92.8%) were confirmed as Rh negative,23 cases were D variants(5.3%),and the rest 8 cases were check errors(1.9%);Irregular antibodies were found in 12 cases,and 7 cases of anti-D(1.7%) in reconfirmed Rh negative blood donor;The serological phenotype of Rh negative blood donor was given priority to dccee and dCcee,followed by dCCee,dccEe and dCcEe.Conclusion The serological phenotype of the Rh negative blood donors in our region Characterized by diversity ，there was irregular antibodies in Rh negative blood donors.

Rh negative; D variants; serological phenotype; irregular antibody

重慶市科委自然科學(xué)基金資助項目(csct2013jcyjA10035)。

楊松，男，主管檢驗師，碩士，主要從事血型血清學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.08.006

A

1672-9455(2015)08-1040-02

2014-11-17

2014-12-22)