李建業(yè)，魯 凱，姚壯凱，耿 強，張哲雄，孫志超

(連云港市第二人民醫(yī)院 蚌埠醫(yī)學院附屬連云港醫(yī)院普外科，江蘇 連云港 222023)

甲狀腺癌患者血清Hpa、uPA檢測及其臨床意義

李建業(yè)，魯 凱，姚壯凱，耿 強，張哲雄，孫志超

(連云港市第二人民醫(yī)院 蚌埠醫(yī)學院附屬連云港醫(yī)院普外科，江蘇 連云港 222023)

目的檢測甲狀腺癌患者血清乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)和尿激酶型纖溶酶原激活劑(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)含量，探討其在甲狀腺癌診斷中的價值。方法采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）測定38例甲狀腺癌患者，37例良性甲狀腺結節(jié)患者和30例健康人對照組的血清Hpa和uPA水平，并比較各組之間的差異。結果甲狀腺癌組Hpa、uPA濃度水平明顯高于其他兩組，其差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，而良性甲狀腺結節(jié)組與正常對照組比較則差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。血清中Hpa濃度與淋巴結轉(zhuǎn)移與否差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而淋巴結轉(zhuǎn)移組血清中的uPA濃度明顯高于無淋巴結轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Hpa/uPA的曲線下面積為0.812，聯(lián)合檢測對甲狀腺癌的診斷價值大于Hpa和uPA單獨檢測(P＜0.05)。結論血清Hpa和uPA聯(lián)合檢測在甲狀腺良惡性腫瘤的鑒別和預測是否有淋巴結轉(zhuǎn)移方面有一定的臨床價值。

甲狀腺惡性腫瘤；良性甲狀腺結節(jié)；乙酰肝素酶；尿激酶纖溶酶原激活物

研究顯示乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)、尿激酶纖溶酶原激活物(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移以及預后有密切關系[1-3]，但是探討血清中Hpa和uPA聯(lián)合檢測與甲狀腺腫瘤關系方面研究未見報道。本研究應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測甲狀腺癌患者術前血清中Hpa、uPA的表達，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2014年1月兩年間我院普外科甲狀腺結節(jié)手術患者75例，乳頭狀甲狀腺癌38例，平均年齡46.11歲，其中有淋巴結轉(zhuǎn)移者18例，無淋巴結轉(zhuǎn)移者20例。甲狀腺良性結節(jié)37例，平均年齡50.33歲，其中甲狀腺囊腺瘤17例，結節(jié)性甲狀腺腫20例。選取健康志愿者30例作為對照組，平均年齡37.01歲。

1.2 納入標準 (1)因甲狀腺結節(jié)入院行甲狀腺結節(jié)手術的患者。(2)根據(jù)血促甲狀腺激素(Thyroid stimulating hormone，TSH)、三碘甲狀腺原氨酸(Triio-dothyronine，T3)、四碘甲狀腺原氨酸(Tetraiodothyronine，T4)、甲狀腺球蛋白抗體(Thyroglobulin antibody，TGAb)甲狀腺球蛋白抗體、甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)等排除患有甲狀腺功能亢進癥、甲狀腺功能減退癥、毒性彌漫性甲狀腺腫及橋本甲狀腺炎等自身免疫性甲狀腺疾病者。(3)無肝腎疾病、心腦血管疾病、胃腸道疾病等重大疾病史，無其他系統(tǒng)惡性腫瘤。(4)術前未接受手術、放療、化療等抗腫瘤治療。(5)排除甲狀腺癌微小癌。

1.3 標本采集 血清標本均于術前收集。所有受試者空腹8 h以上，采集實驗組與對照組新鮮外周血6ml，3 000 r/min離心15min，取上清液1ml分裝后標本儲存于-80℃深低溫冰箱凍存?zhèn)溆弥翜y定。標本采集、貯存受本院科學技術委員會監(jiān)督、指導。

1.4 實驗試劑及檢測方法 人乙酰肝素酶(Hpa)ELISA試劑盒(BYS10425B)購自博研生物科技有限公司上海分公司；尿激酶型纖溶酶原激活物uPA ELISA試劑盒(EK0535)購自武漢博士德生物工程有限公司；酶標儀(AP-960)為日本協(xié)和藍怡。采用雙抗體夾心ELISA法測定Hpa及uPA表達水平，實驗步驟按照試劑盒說明操作，酶標儀測定OD值，根據(jù)標準曲線換算出血清Hpa與uPA含量。

2 結果

2.1 不同組受試者血清中Hpa、uPA水平比較 采用方差分析比較三組Hpa、uPA濃度水平，甲狀腺癌組Hpa、uPA濃度水平明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；良性甲狀腺結節(jié)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。血清中Hpa濃度與淋巴結轉(zhuǎn)移與否差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；血清中uPA濃度淋巴結轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表1和表2。

表1 不同組血清中Hpa、uPA含量比較(±s)

表1 不同組血清中Hpa、uPA含量比較(±s)

組別 例數(shù)Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)甲狀腺癌組良性甲狀腺結節(jié)組正常對照組F值P值38 37 30 89.36±7.21 41.23±4.36 40.81±5.17 2169.633 0.000 1678.63±413.27 858.13±127.39 891.59±113.21 280.421 0.000

表2 淋巴結是否轉(zhuǎn)移與血清中Hpa、uPA含量的關系(±s)

表2 淋巴結是否轉(zhuǎn)移與血清中Hpa、uPA含量的關系(±s)

組別 例數(shù)Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)淋巴結轉(zhuǎn)移組無淋巴結轉(zhuǎn)移組t值P值18 20 90.23±6.21 88.79±7.31 0.625 0.538 1978.43±313.17 1384.15±213.27 10.458 0.000

2.2 Hpa與uPA診斷甲狀腺癌效能比較 血清Hpa診斷的樣本工作特性曲線(ROC)下AUC為0.694，與uPA的ROC曲線下AUC(0.713)之間差異無統(tǒng)計學意義(Z=1.413，P＞0.05)，而血清Hpa與uPA聯(lián)合診斷的ROC曲線下AUC為0.812，明顯高于Hpa或uPA(Z值分別為2.021、2.371，P均＜0.05)。

3 討 論

目前臨床上確診甲狀腺癌的方法主要是依靠術中冰凍或術后石蠟切片。針對甲狀腺癌的診斷以及浸潤轉(zhuǎn)移方面，尋找特異性的甲狀腺癌腫瘤標記物是近年來學者們所探討的重點。研究顯示Hpa、uPA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移以及預后有密切關系。

Hpa發(fā)現(xiàn)于1999年，是一個內(nèi)源性葡萄糖醛酸酯酶，能特異性識別并剪切HS側(cè)鏈。在正常組織中，Hpa mRNA在胎盤之外的成熟非免疫組織中均不表達，但在惡性腫瘤細胞中普遍高表達。通過檢測腫瘤患者血清中乙酰肝素酶含量，探討二者關系的文獻較多，但是血清中Hpa檢測與甲狀腺癌關系的相關研究未見報道。涂祥俊[4]通過對72例非小細胞肺癌患者血清Hpa水平和MMP-9水平表達的檢測，結果顯示觀察組患者的血清Hpa和MMP-9水平均明顯高于對照組，且表達水平高低與腫瘤TNM分期呈正相關，提示Hpa和MMP-9對非小細胞肺癌的發(fā)生及發(fā)展有重要作用。Tang等[5]應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測健康婦女、良性和惡性乳腺疾病患者血清MMP-9及HPSE表達水平，結果顯示血清MMP-9及HPSE在乳腺癌患者明顯高于乳腺良性疾病和健康對照組，提示MMP-9及HPSE可能進一步評估作為預測乳腺癌的進展及預后的生物標志物。在本研究首次應用酶聯(lián)免疫吸附法對甲狀腺癌組、良性甲狀腺結節(jié)組、正常對照組血清中Hpa濃度進行檢測，結果甲狀腺癌組Hpa濃度水平明顯高于其他兩組，良性甲狀腺結節(jié)組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。提示患者血清中Hpa含量檢測對甲狀腺癌的診斷具有重要意義，為Hpa作為甲狀腺癌新的腫瘤標志物提供理論依據(jù)。本研究試圖探討血清Hpa含量與有無淋巴結轉(zhuǎn)移之間的關系。結果二者之間差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示術前血清Hpa含量尚不能用來預測甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移。

uPA屬于纖維蛋白溶解系統(tǒng)，是由腫瘤細胞分泌的一種絲氨酸蛋白酶，與腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移有關[2-3]。沈倩雯等[6]通過測定結直腸癌患者血漿中uPA以及CEA濃度，發(fā)現(xiàn)作為早期診斷，uPA好于CEA，血漿UPA、CEA聯(lián)合檢測，診斷的準確性更好。丁峰[7]采用ELISA法檢測血清中uPA含量顯示正常乳腺細胞組、良性病變細胞組和乳腺癌細胞組中uPA值逐漸增高，uPA與腫瘤的分化程度相關。組織分化越差，uPA濃度越高，這也提示uPA的濃度變化可能在乳腺癌的診斷中發(fā)生著重要作用，其對乳腺癌的早期診斷和判斷預后意義重大。在本研究顯示，甲狀腺癌組血清uPA濃度水平明顯高于其他兩組，良性甲狀腺結節(jié)組與正常對照組比較差異無明顯的統(tǒng)計學意義，提示患者血清中uPA含量檢測對甲狀腺癌的診斷具有重要意義。伴有淋巴結轉(zhuǎn)移患者血清uPA濃度高于無淋巴結轉(zhuǎn)移組，提示術前血清uPA含量可以用來預測甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移。

以上實驗結果均提示血清Hpa、uPA檢測與甲狀腺癌診斷關系密切。在診斷效能方面，本研究用ROC曲線評估了血清Hpa和uPA水平作為早期診斷甲狀腺癌的臨床可行性，結果顯示，兩者聯(lián)合檢測診斷甲狀腺癌優(yōu)于單獨檢測，且具有更高的敏感性和特異性。當然，可能由于樣本例數(shù)的關系，在血清Hpa水平與甲狀腺癌是否存在淋巴結轉(zhuǎn)移關系上存在偏差，術前血清Hpa含量能否用來預測甲狀腺癌是否發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移，還需要進一步研究。

[1]Zheng L,Jiang G,Mei H,et al.Small RNA interference-mediated gene silencing of heparanase abolishes the invasion,metastasis and angiogenesis of gastric cancer cells[J].BMC Cancer,2010,5(10): 33.

[2]李建業(yè),苗永昌,夏春咸,等.結直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者血清HGF、uPA檢測及其臨床意義[J].海南醫(yī)學,2013,24(2):218-219.

[3]Wolff C,Malinowsky K,Berg D,et al.Signalling networks associated with urokinase-type plasminogen activator(uPA)and its inhibitor PAI-1 in breast cancer tissues:new insights from protein microarray analysis[J].J Pathol,2011,223(1):54-63.

[4]涂祥俊.非小細胞肺癌患者血清Hpa和MMP-9水平檢測及臨床意義[D].瀘州:瀘州醫(yī)學院,2013.

[5]Tang D,Piao Y,Zhao S,et al.Expression and correlation of matrix metalloproteinase-9 and heparanase in patients with breast cancer [J].Med Oncol,2014,31(7):26.

[6]沈倩雯,金冶寧.UPA，PAI-1在結直腸癌血漿中的測定及其臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2010,18(5):938-941.

[7]丁 峰.血清中尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)在女性乳腺癌診斷中的應用[D].濟南:山東大學,2010.

Detection and clinical significance of serum Hpa and uPA in thyroid carcinoma.

LI Jian-ye,LU Kai,YAO Zhuang-kai,GENG Qiang,ZHANG Zhe-xiong,SUN Zhi-chao.Department of General Surgery,the Second People's Hospital of Lianyungang City,the Affiliated Lianyungang Hospital of Bengbu Medical College,Lianyungang 222023, Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo explore the clinical significance of serum Hpa and uPA detection in patients with thyroid Carcinoma.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was applied to detect the expression of Hpa and uPA in serum of 38 cases of thyroid carcinoma(thyroid carcinoma group)and 37 cases of patients with benign thyroid nodules(benign thyroid nodules group),30 normal persons(the control group).ResultsHpa and uPA levels in thyroid carcinoma group were significantly higher than those in other two groups(P＜0.01),but there was no statistically significant difference between benign thyroid nodules group and the control group(P＞0.05).The expression of Hpa showed no significant difference between the patients with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis(P＞0.05),but the expression of uPA in patients with lymph node metastasis was significantly higher than those without lymph node metastasis(P＜0.05).The area under curve(AUC)of the combination of Hpa/ uPA was 0.812,which was significantly higher than that of Hpa or uPA alone(bothP＜0.05).ConclusionThe combined detection of Hpa and uPAmay have certain application value for the early diagnosis of thyroid carcinoma.

Thyroid carcinoma;Benign thyroid nodules;Heparanase;Urokinase plasminogen activator

R736.1

A

1003—6350（2015）04—0532—03

2014-07-18)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.04.0192

連云港市“科教興衛(wèi)工程”青年科技項目（編號：Q1206）

李建業(yè)。E-mail：lijianye02101@sina.com