董 宇，蔡 雨，方 丹，劉 麗，彭玉生，王東艷，李守君*

(1.佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯154007;2.佳木斯中心醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154007)

0 引 言

中藥復方祛痘軟膏劑是由黃芩、苦參和蘆薈三種藥材按比例混合提取所得浸膏，與基質配制成O/W 型膏劑.基質成分主要為有機試劑，與主藥分離非常困難，對含量測定產生干擾，因此，為了準確測得軟膏劑含量，而主藥與基質的分離技術要求高，從而增加了軟膏劑分析的難度［1～3］.非線性化學指紋圖譜技術在中藥分析領域被廣泛應用，是一種方便有效分析中藥的方法［4，5］.李守君等人采用非線性化學指紋圖譜技術優(yōu)化大黃最佳提取工藝及鑒別黃連［6，7］，張海珍等人采用非線性化學指紋圖譜技術測定蜂蜜中糖含量［8］.本文利用中藥有效活性成分參與化學振蕩反應而軟膏基質不參與反應這一特點，對中藥祛痘軟膏劑浸膏含量進行測定.該方法不需要進行主藥和基質分離的前處理［9］，具有操作簡便，結果準確等特點，為中藥軟膏劑質量評價研究開拓新思路.

1 材 料

超聲波清洗器(KQ－500DE 型，昆山市超聲儀器有限公司);超級恒溫器(SC－15 型，寧波海曙天恒儀器廠);電化學工作站(LK2005 型，天津蘭力克科技有限公司);鉑電極(213 型，上海精密科學儀器有限公司);甘汞電極(217 型，上海精密科學儀器有限公司);天平(BP211D，德國Sartorius);硫酸、硫酸錳、丙酮、溴酸鉀等試劑均為分析純，水均為二次蒸餾水;苦參、黃芩、蘆薈購于藥材市場(由黑龍江中醫(yī)藥大學佳木斯學院陳效忠鑒定).

2 實驗方法與結果

2.1 樣品的制備

2.1.1 對照樣品溶液的制備

取中藥浸膏1.0031g，用20mL 蒸餾水45℃超聲溶解15min，置于容量瓶中定容，作為原液，在原液中取1，2，3，4，5mL 分別置于25mL 容量瓶中定容，即為對照品溶液.

取空白基質5g，用10mL 蒸餾水稀釋，30℃超聲分散20min，置于容量瓶中定容，即為空白對照品溶液.

2.1.2 供試品溶液的制備

取中藥復方祛痘軟膏5g，用10mL 蒸餾水稀釋，30℃超聲分散20min，置于容量瓶中定容，即為供試品溶液.

2.2 非線性化學指紋圖譜測定方法

開啟電化學工作站，設定實驗參數(shù).當溫度達到37±0.02℃時，依次加入一定濃度的硫酸溶液、硫酸錳溶液、丙酮溶液各10mL，加入待測溶液4mL，600r/min 攪 拌20min，加 入 KBrO3溶 液10mL，計時開始.以鉑電極作指示電極，以217 型飽和甘汞電極為參比電極，記錄電勢(E)隨時間(t)的變化，獲得非線性化學指紋圖譜，以誘導時間為技術考察指標，對待測樣品進行測量.

2.3 空白對照品與供試品的非線性化學指紋圖譜比較

精密移取空白對照品溶液和供試樣品溶液，按照2.2 實驗方法檢測.由圖1 可知，在0 ～8000s 內空白基質的非線性化學指紋圖譜沒有產生振蕩波形，是一條平滑曲線，而供試樣品在5000 ～7000s產生化學振蕩圖譜，表明空白基質在軟膏劑檢測計量范圍內不產生化學振蕩，對中藥復方軟膏劑含量測定沒有影響.

圖1 空白對照品與供試品的非線性化學指紋圖譜比較

2.4 單味藥材提取物軟膏劑與供試樣品的非線性化學指紋圖譜比較

精密稱取苦參、黃芩、蘆薈提取物與空白基質，分別配制成苦參、黃芩、蘆薈提取物含量為50mg/g 的軟膏劑，按照2.1 方法制備苦參、黃芩、蘆薈軟膏供試品溶液，按照2.2 方法，分別以苦參、黃芩、蘆薈軟膏供試品溶液為耗散底物進行檢測，作非線性化學振蕩指紋圖譜，比較苦參、黃芩、蘆薈軟膏劑與供試樣品圖譜的變化.如圖2 可以看出，同一實驗條件下，苦參、黃芪、蘆薈單味藥提取物軟膏劑與供試樣品在非線性化學指紋圖譜的特征參數(shù)誘導時間、起振電壓、最大振幅和振蕩壽命有明顯的差別.因此，通過非線性化學指紋圖譜可以明顯看出本復方軟膏劑中藥是否全被加入.

圖2 單味藥提取物軟膏劑與供試品的非線性化學指紋圖譜比較

2.5 標準曲線的繪制

精密移取2.1 的5 個對照品溶液，按2.2 方法進行檢測，以誘導時間為指標，繪制誘導時間(t)與濃度(c)的曲線，獲得回歸方程:t=6898－183.6c，R=0.9972，由圖3 可知，不同含量中藥復方祛痘軟膏劑的誘導時間隨含量增大而減小，中藥浸膏濃度在6 ～34 mg·mL－1范圍內線性相關良好.

圖3 中藥復方軟膏劑標準曲線

2.6 精密度考察

精密稱取濃度為70mg/g 中藥復方祛痘軟膏劑10g，按照2.1 制備待測溶液，按照2.2 方法測量，重復5 次，隔日同法測量5 次，參照標準曲線，測得日內RSD 為1.08%，日間RSD 為1.69%.

2.7 加樣回收率考察

精密稱取浸膏及空白基質，配成含量為50mg/g，70mg/g，90mg/g 軟膏，每種軟膏精密稱取5g，按照2.1 方法配成溶液，按照2.2 方法測量，每個樣品平行測量3 次，參照標準曲線，測得回收率在99 ～102%之間，平均回收率在99 ～101%之間，RSD ＜1%.

2.8 復方中藥祛痘軟膏劑中藥浸膏含量測定

按照2.2 方法，對三批樣品進行測量，每批樣品平行測量3 次，參照《中國藥典》2010 版，軟膏劑含量限度制定為標示量的90 ～110%.由表1 可知，三批樣品含量平均值依次為:5.07%、4.93%、4.97%，三批樣品的含量檢測限度在98.6 ～101.4%，均在90 ～110%之間，符合藥典軟膏劑含量限度的規(guī)定，達到試驗設計要求.

表1 樣品測定結果(n=3)

3 討 論

3.1 攪拌速度對復方中藥軟膏劑非線性化學指紋圖譜的影響

攪拌速度主要影響體系物質混合的均勻程度.由于軟膏劑制備時原料大多為油脂類，具有粘稠性，當被加入反應溶液體系時，提高了體系溶液的黏度，增加溶液混合難度.因此采用非線性化學指紋圖譜測量軟膏劑時，攪拌速度的選擇較為重要，攪拌速度過快或過慢，導致混合不均勻現(xiàn)象，獲得的非線性化學指紋圖譜不理想.本實驗通過實驗測定，攪拌轉數(shù)為600r/min 時，獲得指紋圖譜較理想.

3.2 非線性化學指紋圖譜鑒別中藥復方軟膏劑真?zhèn)蔚奶接?/h3>

含量測定的難點在于基質的干擾，采用高效液相色譜測定時，需要選擇適當?shù)娜苊饺芙饣|或主藥［1］，應該將主藥與基質分離.非線性化學指紋圖譜技術的特點是對中藥群集信息的研究［10］，不必對樣品有效部位分離，尤其在中藥復方分析研究時，這一特點表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢.本文綜合考慮上述因素，利用非線性化學指紋圖譜技術具有解決上述問題的特點.通過對比基質、單味藥和成品指紋圖譜的比較區(qū)別，可以用來鑒別中藥復方軟膏劑是否含有處方藥材，從而，可建立一種簡單鑒別中藥復方軟膏劑真?zhèn)蔚男路椒?

4 結 論

在主藥與基質不分離的前提下，采用非線性化學指紋圖譜技術，對中藥復方軟膏劑含量進行測定，獲得重現(xiàn)性良好的中藥復方軟膏劑非線性化學指紋圖譜，此圖譜能夠很好地表征中藥復方軟膏劑的中藥有效成分.以誘導時間和中藥加樣量為指標建立標準曲線，呈現(xiàn)良好的線性關系.應用非線性化學指紋圖譜技術，以誘導時間為技術指標檢測中藥復方軟膏劑含量的方法可行，該方法科學合理、操作簡便快捷、重現(xiàn)性良好，可作為中藥復方軟膏劑含量檢測的新方法.

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