胡海霞，李志強，李 偉，熊正文，李宏偉，黃 勇

(1.中國人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000；2.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 宣化 075100)

Oct4、Bim蛋白在胃腺癌中的表達及臨床意義

胡海霞1，李志強2，李 偉1，熊正文1，李宏偉1，黃 勇1

(1.中國人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000；2.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院，河北 宣化 075100)

目的探討八聚體結(jié)合蛋白4(Oct4)、Bim蛋白在胃腺癌及癌旁組織中的表達及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)（EnVisionTM）法分別檢測Oct4、Bim蛋白在70例胃腺癌組織及其癌旁組織中的表達情況。結(jié)果Oct4在胃腺癌組織陽性表達率為52.86%，在癌旁組織中陽性表達率為18.57%，兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.92，P＜0.01)；Bim蛋白在胃腺癌組織陽性表達率為17.15%，在癌旁組織中陽性表達率為58.57%，兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=25.54，P＜0.01)。Oct4的表達與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤位置、分化程度、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)；Bim蛋白的表達與組織學(xué)分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤位置、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)。Oct4蛋白與Bim蛋白表達呈負相關(guān)(r=-0.33，P＜0.01)。結(jié)論胃腺癌組織中Oct4和Bim蛋白的異常表達，表明癌細胞呈現(xiàn)出干細胞化及凋亡異常，有利于腫瘤的生長、浸潤。

胃腺癌；Oct4；Bim；免疫組織化學(xué)

胃組織可發(fā)生的惡性腫瘤根據(jù)其來源可分為上皮源性、間質(zhì)源性及淋巴造血系統(tǒng)，但以上皮源性胃腺癌最常見。目前，胃腺癌主要采取以手術(shù)切除為主，化療和生物治療為輔的綜合治療手段，但患者的生存預(yù)后仍不理想，特別是瘤細胞的轉(zhuǎn)移或是對化療藥物的不敏感或抵抗。因而，本研究主要探討八聚體結(jié)合蛋白4(Oct4)、Bim蛋白在胃腺癌組織中的表達及兩者與臨床病理因素之間的關(guān)系，同時探討兩種蛋白之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2006年3月至2013年8月期間病理科存檔的70例胃腺癌患者的相關(guān)資料，資料顯示，男性42例，女性28例；年齡36~68歲，中位數(shù)年齡55歲，其中≥55歲者51例、＜55歲者19例。腫瘤大小≥3 cm者39例、＜3 cm者31例；腫瘤位于賁門18例、胃體36例、幽門16例；腫瘤分化程度：高分化25例、中分化35例，低分化10例；TNM分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期22例，Ⅲ期27例、Ⅳ期9例；癌組織浸潤黏膜下層23例、深肌層34例、漿膜層13例；腸周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者42例，無轉(zhuǎn)移者28例。上述所有患者均為第一次治療，之前未接受過任何相關(guān)性治療，同時選取癌旁0.3 cm處組織70例作為對照組。

1.2 試劑和方法 Oct4鼠抗人單克隆抗體(即用型)、Bim兔抗人單克隆抗體(即用型)及Envision試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色采用EnVision兩步法，操作步驟參照試劑盒說明書進行。陽性對照由福州邁新生物技術(shù)有限公司提供，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 Oct4陽性表達為細胞核和/或細胞質(zhì)棕黃色，判斷標準[1]：隨機選擇5個高倍鏡視野(×400)，計算1 000個瘤細胞中陽性染色細胞所占的比例，無陽性細胞或陽性細胞數(shù)所占比例＜5%為陰性，5%~25%為弱陽性，26%~50%為陽性，＞50%為強陽性。細胞染色結(jié)果由本科室兩名以上病理專家進行雙盲評估，并規(guī)定陽性細胞數(shù)所占比例≤25%者記為陰性，陽性細胞數(shù)所占比例≥26%者統(tǒng)計記為(+)。Bim陽性表達為細胞質(zhì)棕黃色、黃色或淡黃色染色。采用半定量方法測定Bim的表達，隨機選取5個高倍鏡視野(200倍)觀察腫瘤細胞中Bim的著色細胞數(shù)及強度，分為以下4個等級：0級為≤5%，1級為5%~25%，2級為25%~60%，3級＞60%。陽性強度淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。兩積分相乘，0~3分為陰性，4~12分為陽性[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析處理相關(guān)數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，相關(guān)性檢驗采用Spearman法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Oct4、Bim在胃腺癌組織及癌旁組織中的表達 Oct4蛋白表達于癌細胞的細胞核，70例胃腺癌組織中陽性表達37例，陽性率為52.86%；癌旁組織中陽性表達13例，陽性率為18.57%，兩組之間表達差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.92，P＜0.01)。Bim蛋白表達于癌細胞的細胞漿，70例胃腺癌組織中陽性表達12例，陽性率為17.15%；癌旁組織中陽性表達41例，陽性率為58.57%，兩組之間表達差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=25.54，P＜0.01)，見表1和圖1~圖4。

表1 Oct4、Bim在胃腺癌組織及癌旁組織中的表達

2.2 Oct4、Bim蛋白在胃腺癌組織的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 Oct4蛋白表達與腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤位置、組織學(xué)分化、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)；Bim蛋白表達與組織學(xué)分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05)，見表2。

表2 Oct4、Bim的表達與胃腺癌臨床病理因素的關(guān)系

圖1 Oct4在胃腺癌組織中陽性表達(×100)；圖2 Oct4在癌旁組織中陰性表達(×100)；圖3 Bim在胃腺癌組織中陰性表達(×100)；圖4 Bim在癌旁組織中陽性表達(×100)

2.3 胃腺癌組織中Oct4、Bim的表達相關(guān)性 在70例胃腺癌組織中，Oct4、Bim同時陽性表達的為2例，同時陰性表達的為23例；Oct4陽性而Bim陰性的為35例，Oct4陰性而Bim陽性的為10例。經(jīng)Spearman相關(guān)性檢驗分析，結(jié)果顯示兩者之間呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.33，P=0.00＜0.01)，見表3。

表3 胃腺癌組織中Oct4、Bim表達之間的相關(guān)性

3 討論

人Oct4基因位于染色體6p21.31，含352個氨基酸，相對分子質(zhì)量為18 kD，是胚胎干細胞保持自我更新、維持未分化狀態(tài)的主要調(diào)控因子[3]，還是多能性或全能性干細胞標記物，其表達見于胚胎生殖細胞、皮膚基底細胞層的極少數(shù)細胞、胃干細胞、黑色素干細胞及乳腺干細胞等[4-6]，但在分化的組織中其表達均降低或消失[4]。近來資料顯示，Oct4在多種瘤組織中呈現(xiàn)過表達[7-10]，這說明干細胞一定程度上參與了腫瘤的形成。趙朋朋等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Oct4在正常膀胱組織中無表達，在膀胱癌組織中的表達率為76.1%，并且其表達與腫瘤病理分級、腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時研究亦顯示，Oct4陰性表達患者的3年總生存率高于陽性表達者。在膽囊癌組織中Oct4的表達明顯高于慢性膽囊炎組織中的表達，且與周圍臟器侵犯與否、癌組織分化程度及TNM分期有關(guān)[12]。本實驗結(jié)果表明，Oct4蛋白在胃腺癌組織中的表達顯著高于癌旁組織，其表達與腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這表明胃腺癌組織也存在干細胞的異常表達或是癌細胞的干細胞化，與腫瘤細胞的異常增殖及侵襲能力增強有關(guān)。

細胞增殖與凋亡是維持細胞功能正常的機制之一，無論兩者哪個發(fā)生異常，就會造成細胞功能的異常改變，進而引起腫瘤的形成。Bim是B淋巴細胞瘤-2(bcl-2)家族成員之一，具有與抗凋亡因子bcl-2相反的促凋亡作用。人Bim基因定位于2q12或2q13，其表達于造血細胞、上皮細胞、以生殖細胞及神經(jīng)細胞等多種正常組織細胞，并在維持造血細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、腫瘤的發(fā)生及防止自身免疫中有著重要的作用[13]。Bim蛋白在受到刺激后，其從與細胞胞漿的力蛋白復(fù)合體中游離出來，才具有促凋亡的功能[14]。資料顯示，Bim在大腸癌、子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺乳頭狀癌及乳腺癌組織中呈現(xiàn)低表達或無表達，明顯低于相應(yīng)的良性病變組織中的表達，且其表達水平的改變與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[15-17，13]。本實驗結(jié)果表明，Bim蛋白在胃腺癌組織中的表達遠低于在癌旁組織中的表達，其表達與組織學(xué)分化、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這表明癌細胞已喪失促凋亡調(diào)控的作用，進而引起癌細胞的無限增殖。

本研究結(jié)果提示，Oct4和Bim蛋白在胃腺癌組織中的表達呈現(xiàn)負相關(guān)，也就是說，胃腺癌組織中Oct4高表達時，Bim則表現(xiàn)為低表達或無表達。因而推測Oct4、Bim之間可能存在某種機制，通過此機制激活了Oct4的異常表達，進而抑制了Bim的表達，最終促進了腫瘤的無限制擴增。

[1]吳 俊,江普查,周 游,等.Oct4和CathepsinB在膠質(zhì)瘤中的表達及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2009,17(2)：239-242.

[2]龔傳明,屈 磊,胡海濤,等.非小細胞肺癌Bim和Caspase-3蛋白表達檢測及臨床意義[J].臨床軍醫(yī)雜志,2010,38(2)：256-258.

[3]趙光銳,朱占勝,王 鵬,等.OCT4與惡性腫瘤關(guān)系的研究進展[J].腫瘤防治研究,2010,37(10)：1210-1212.

[4]王道協(xié),文建國,索振河.Oct4在干細胞和腫瘤細胞中的表達[J].山東醫(yī)藥,2007,47(8)：75-76.

[5]Tai MH,Chang CC,Kiupel M,et al.Oct4 expression in adult human stem cells：evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis[J].Carcinogenesis,2005,26(2)：495-502.

[6]Yu H,Fang D,Kumar SM,et al.Isolation of anovel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles[J].Am J Pathol,2006,168(6)：1879-1888.

[7]黃 平,黃 慧,李 蓉,等.Oct4在宮頸癌中的表達及與人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(20)：2655-2658.

[8]孫朝陽,李 娜,丁 冬,等.Oct4在晚期漿液性卵巢癌中的表達及意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2013,13(13)：2485-2487.

[9]董翠梅,涂江江,陶利英,等.非小細胞肺癌組織中Oct4和miRNA-155的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系[J].腫瘤防治研究, 2013,40(8)：776-780.

[10]Wen J,Park JY,Park KH,et al.Oct4 and Nanog expression is associated with early stages of pancreatic carcinogenesis[J].Pancreas, 2010,39(5)：622-626.

[11]趙朋朋,劉春曉,許 凱,等.OCT4在膀胱癌中的表達及其臨床意義[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,32(5)：643-646.

[12]李新星,王 堅.ABCG2和OCT4在膽囊癌組織中的表達及臨床意義[J].外科理論與實踐,2012,17(1)：41-46.

[13]趙 艷,王 睿,宋 敏,等.Bim蛋白在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,37(2)：267-269.

[14]邊 睿,陳 佺,朱大海.Bim介導(dǎo)細胞凋亡的調(diào)控及臨床意義[J].國際遺傳學(xué)雜志,2006,29(5)：379-383.

[15]耿敬姝,王麗春,佟丹丹.大腸癌及癌旁組織中Bim、Bax、bcl-2的表達及意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志,2008,24(3)：296-300.

[16]王 玉,楊 清,張 靜.子宮內(nèi)膜癌組織中Bim蛋白表達及其臨床意義[J].中國腫瘤臨床,2005,32(2)：76-78.

[17]宋曉陽,張端蓮.促凋亡蛋白Bim基因在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及圖像分析[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志,2012,25(3)：314-315.

Expression of Oct4 and Bim protein in gastric adenocarcinoma and their clinical significance.

HU Hai-xia1,LI Zhi-qiang2,LI Wei1,XIONG Zheng-wen1,LI Hong-wei1,HUANG Yong1.1.Department of Pathology,the 251thHospital of Chinese PLA,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA;2.Department of Pathology,the Second Affiliated Hospital of Hebei North University,Xuanhua 075100,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Oct4 and Bim protein in gastric adenocarcinoma and their significance.MethodsThe expression of Oct4 and Bim was respectively detected by immunohistochemisty (EnVisionTM)in gastric adenocarcinoma tissue(70 cases)and pericarcinous tissue.ResultsThe positive expression rate of Oct4 was 52.86%%in gastric adenocarcinoma tissue and 18.57%in pericarcinous tissue,with statistically significant difference(χ2=17.92,P＜0.01).The positive expression rate of Bim was 17.15%in gastric adenocarcinoma tissue and 58.57%in pericarcinous tissue,with statistically significant difference(χ2=25.54,P＜0.01).The positive expression of Oct4 was related to tumor size,TNM staging,lymph node metastasis(P＜0.05),but not to gender,age,tumor site,histological differentiation and infiltrating depth(P＞0.05).The positive expression of Bim was related to histological differentiation,TNM staging,lymph node metastasis(P＜0.05),but not to gender,age,tumor size,tumor site and infiltrating depth(P＞0.05).The expression of Oct4 in gastric carcinoma tissue was negative correlated with the expression of Bim (r=-0.33,P＜0.01).ConclusionThe abnormal expression of Oct4 and Bim in gastric adenocarcinoma tissue indicates that cancer cell shows stem cellularization and anormal apoptosis,which is useful to tumor growth and infiltration.

Gastric adenoarcinoma;Oct4;Bim;Immunohistochemisty

R735.2

A

1003—6350（2015）09—1367—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.09.0491

2014-10-20)

李 偉。E-mail：liwei-324@163.com