李奉京 蒲志群 北京藍譜生物技術(shù)開發(fā)有限公司

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴重影響人類健康的慢性傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，目前全球有約三分之一( 20 億) 人口受感染，每年新發(fā)結(jié)核患者達900 多萬，死亡人數(shù)約 300 萬。中國是全球22 個結(jié)核病高負擔國家之一，結(jié)核患者數(shù)僅次于印度位居世界第二。為加強全球結(jié)核病防控工作，聯(lián)合國制定了千年防治目標，要求全球結(jié)核病控制至2015 年結(jié)核病的患病率和死亡率均降低50%，但結(jié)核病防治工作中肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)仍是難點和重點。目前結(jié)核病的診斷仍然依賴于臨床資料、痰涂片鏡檢和細菌培養(yǎng)。然而，涂片法靈敏度低，分離培養(yǎng)方法耗時長，隨著全球結(jié)核病防治工作的進展，現(xiàn)有的細菌學實驗方法已不能滿足臨床和防治工作要求。為提高肺結(jié)核病人的發(fā)現(xiàn)率，新的基于分子生物檢測的方法不斷的涌現(xiàn)，其中熒光定量PCR 方法，XPERT 方法需要昂貴的儀器設(shè)備，在設(shè)施簡陋技術(shù)缺乏的基層實驗室條件尚不能滿足這些方法的開展。而 LAMP 方法不需要昂貴的儀器，操作步驟相對簡單，對實驗室的條件設(shè)備要求不高，因此，該方法有望成為結(jié)核病診斷方法中新的寵兒。

全球結(jié)核病流行狀況（WHO report，2013）

LAMP 法是一種全新的DNA 擴增方法，具有簡單、快速、特異性強、靈敏度高等特點，采用2 對引物在等溫條件下即可完成DNA 的擴增，擴增結(jié)果可通過肉眼觀察熒光或濁度進行判定，同時采用封閉系統(tǒng)減少了工作區(qū)域擴增子的污染，且整個反應(yīng)過程需時較短。PURE-LAMP 檢測試劑盒就是日本榮研公司與FIND 基金合作開發(fā)出的一種基于LAMP 技術(shù)速高效檢測結(jié)核分枝桿菌的試劑盒，被WHO 推薦為最適合現(xiàn)場快速檢測結(jié)核病的重要產(chǎn)品之一。該試劑盒采用的是干粉試劑，可常溫運輸和保存，配合簡單的前處理試劑，操作簡便，無需復雜的技術(shù)要求，一臺簡單的恒溫裝置就可以在一個小時之內(nèi)完成檢測，直接通過肉眼觀察熒光進行結(jié)果判定，可以說為設(shè)備簡陋的基層實驗室提供了分子檢測平臺。

最近，中國疾病預防控制中心結(jié)核病預防控制中心的歐喜超、趙雁林等，帕斯適宜衛(wèi)生科技組織（PATH）的張治英、李俊晨等，香港中文大學的Man Kam，蓋茨基金會項目北京辦的池俊英，中國人民解放軍總醫(yī)院的張志堅等科研機構(gòu)的專家們聯(lián)合發(fā)表于國際著名期刊《PLOS ONE》上的一篇文章報道了PRUE-LAMP 檢測試劑盒在中國區(qū)縣級實驗室應(yīng)用評估結(jié)果。研究者們收集了來自中國兩個縣級結(jié)核病實驗室的1378 份肺結(jié)核疑似病例，排除不合格樣本后可供研究分析的共有1329 份。采集三個時期的痰液（時痰，晚痰和早痰）樣本用于檢測。將PURE-LAPM與標準L-J 培養(yǎng)法做對照。研究結(jié)果顯示，在供試樣本中，PURE-LAMP 法檢測結(jié)核分枝桿菌的靈敏度達到70.67%。同時，PURE-LAMP 法在基于涂片陽性培養(yǎng)呈陽性，涂片陰性培養(yǎng)呈陽性的病患中靈敏度分別為92.12%和53.81%。PURE-LAMP 法在檢測結(jié)核分枝桿菌中的特異性為98.32%。并且，與固體培養(yǎng)法相比，PURE-LAMP 能顯著降低污染率。

PURE-LAMP 法具有較高的靈敏度和特異性。其具有高效、快速和安全的優(yōu)點，適合在基層及偏遠地區(qū)廣泛推廣使用。