徐春志，藺俐仲，方 英*，袁翠霞，白 璧，余啟茂

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒感染豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，患病動(dòng)物臨床主要表現(xiàn)為口腔黏膜、舌面、唇、鼻鏡、蹄叉、乳頭等部位發(fā)生水泡，破潰形成爛斑，嚴(yán)重者蹄殼邊緣潰裂或出現(xiàn)脫殼癥狀。該病在易感動(dòng)物中發(fā)病率可達(dá)100%，并形成大范圍流行［1］，嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，甚至還會(huì)帶來國際政治影響，素有“政治經(jīng)濟(jì)病”之稱［2］。由于FMD危害大，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織列為A類動(dòng)物傳染病之首［3］，我國也將其列為一類動(dòng)物疫病。

口蹄疫病毒共有7個(gè)血清型，不同血清型之間不能產(chǎn)生交叉免疫反應(yīng)，口蹄疫病毒的血清型與流行地域存在密切關(guān)系，我國發(fā)生的口蹄疫疫情中，已經(jīng)證實(shí)畜群主要遭受O型、亞洲Ⅰ型和A型流行毒株的侵襲［4］。為有效控制口蹄疫的發(fā)生與流行，國內(nèi)主要采取給易感動(dòng)物接種疫苗的措施，而疫苗免疫效果的好壞直接關(guān)系到口蹄疫的控制效果。為此，筆者開展了奶?？谔阋吣冈纯贵w測(cè)定及其O型、A型、亞洲Ⅰ型三價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)價(jià)，旨在探索一套合理的免疫程序，以指導(dǎo)奶?？谔阋叩姆揽毓ぷ?，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選取規(guī)?；膛?chǎng)健康新生犢牛30頭，健康成年母牛30頭。

1.2 口蹄疫疫苗和免疫方法 牛羊口蹄疫O型、A型、亞洲Ⅰ型三價(jià)滅活疫苗由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司提供，接種途徑和免疫劑量嚴(yán)格按照疫苗使用說明書操作。

1.3 檢測(cè)試劑 口蹄疫O型、A型、亞洲Ⅰ型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，檢測(cè)操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按照農(nóng)業(yè)部規(guī)定的O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫液相阻斷ELISA抗體效價(jià)≥1∶64為合格。

1.4 樣品采集及檢測(cè) 新生犢牛出生后未吃初乳前進(jìn)行第 1 次采血，以后 7、14、21、30、45、60、75、90 d及首免后每間隔1個(gè)月采血，分離血清，檢測(cè)O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫抗體效價(jià)。成年母牛于免疫前及以后每間隔1個(gè)月采血，分離血清，檢測(cè)O型、亞洲Ⅰ型和A型口蹄疫抗體效價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 犢牛母源抗體水平檢測(cè)結(jié)果 30頭犢牛經(jīng)采血檢測(cè)口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型和A型母源抗體，抗體平均效價(jià)消長規(guī)律檢測(cè)結(jié)果見表1。表1檢測(cè)結(jié)果表明，新生犢牛出生后未吃初乳前具有一定的口蹄疫抗體水平，但平均效價(jià)較低，達(dá)不到保護(hù)水平;吃初乳后抗體水平迅速上升，7 d達(dá)到高峰，隨后維持在一個(gè)較高的水平，一直持續(xù)到60 d，60 d后抗體水平迅速降低，至90 d回落近臨界值。

表1 犢牛母源抗體平均效價(jià)消長規(guī)律

2.2 犢牛首免及加強(qiáng)免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果 由于母源抗體水平過高可能會(huì)干擾疫苗免疫效果，因此，應(yīng)該在母源抗體水平不高的情況下對(duì)新生犢牛進(jìn)行首次免疫。根據(jù)上述對(duì)犢牛母源抗體水平的測(cè)定，90 d時(shí)平均抗體效價(jià)接近臨界值，選擇90 d時(shí)進(jìn)行首次免疫，120 d加強(qiáng)1次免疫。30頭犢牛首免及加強(qiáng)免疫后口蹄疫抗體平均效價(jià)消長規(guī)律檢測(cè)結(jié)果見表2。由表2檢測(cè)結(jié)果看出，犢牛90 d首免后抗體水平有所上升，但是抗體平均效價(jià)總體水平不高。120 d加強(qiáng)免疫后，抗體水平迅速上升，150 d抗體水平達(dá)到高峰，隨后緩慢下降，但一直能夠達(dá)到保護(hù)水平，直至300 d抗體水平回落近臨界值。

表2 犢牛首免及加強(qiáng)免疫后口蹄疫抗體平均效價(jià)消長規(guī)律

2.3 成年母牛免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果 30頭成年母牛經(jīng)采血檢測(cè)口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型和A型抗體，抗體平均效價(jià)消長規(guī)律檢測(cè)結(jié)果見表3。表3檢測(cè)結(jié)果顯示，免疫前的成年母?？贵w平均效價(jià)處在保護(hù)水平臨界值，免疫后30 d抗體水平達(dá)到高峰，60～120 d抗體水平仍然維持在一個(gè)較高的范圍內(nèi)，免疫后180 d抗體水平下降到接近臨界值。

表3 成年母牛免疫前后口蹄疫抗體平均效價(jià)消長規(guī)律

3 討論

3.1 通過對(duì)犢牛母源抗體、首免及加強(qiáng)免疫后抗體水平的檢測(cè)，結(jié)果表明:新生犢牛未吃初乳前具有較低的口蹄疫抗體水平，這說明在妊娠期間犢牛通過胎盤從母體獲得了部分母源抗體。吃初乳后口蹄疫抗體迅速上升，7 d達(dá)到高峰，隨后維持在一個(gè)較高的抗體水平，一直持續(xù)到60 d。60 d后口蹄疫抗體迅速降低，至90 d回落近臨界值。這說明母乳是犢牛獲得高質(zhì)量母源抗體的主要途徑，由于規(guī)?；膛?chǎng)通常在60 d停吃母乳，斷乳后母源抗體迅速下降。犢牛首免后口蹄疫抗體雖有上升，但平均效價(jià)不高，加強(qiáng)免疫后抗體迅速上升，并長時(shí)間維持在一個(gè)較高水平，這是由于首免后機(jī)體產(chǎn)生的抗體以IgM為主，能在短期內(nèi)中和大量抗原，但與抗原的結(jié)合力較弱，在體內(nèi)維持時(shí)間較短，因此，建議首免后30 d進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

3.2 通過對(duì)成年母牛免疫后口蹄疫抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明:免疫后30 d口蹄疫抗體水平達(dá)到高峰，免疫后60～120 d抗體水平仍然維持在一個(gè)較高范圍，180 d抗體水平下降到接近臨界值，說明使用三價(jià)滅活疫苗進(jìn)行口蹄疫免疫有效保護(hù)期可達(dá)6個(gè)月。

3.3 目前我國發(fā)生的口蹄疫疫情中，畜群主要遭受O型、亞洲Ⅰ型和A型流行毒株的侵襲，根據(jù)農(nóng)業(yè)部《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)定:要求對(duì)所有牛實(shí)施口蹄疫O型和亞洲Ⅰ型的強(qiáng)制免疫，另外對(duì)所有奶牛和種公牛進(jìn)行A型口蹄疫的強(qiáng)制免疫。2012年前，我國針對(duì)奶牛使用的口蹄疫疫苗主要有單價(jià)苗和二價(jià)苗，多以A型單價(jià)苗和O型-亞洲Ⅰ型二價(jià)苗為主［5］，這意味著奶牛進(jìn)行1次口蹄疫的免疫后，必須注射2次疫苗。據(jù)汪精華等［6］的研究結(jié)果，認(rèn)為單價(jià)苗和二價(jià)苗分開注射免疫效果優(yōu)于2種疫苗同時(shí)注射，這不僅增加了人力、物力和財(cái)力，而且增加了對(duì)畜群的應(yīng)激。鑒于此，國內(nèi)加大了對(duì)口蹄疫三價(jià)滅活苗的研制，并取得了成功。

3.4 現(xiàn)研究內(nèi)容大多數(shù)是針對(duì)口蹄疫二價(jià)苗和單價(jià)苗，而關(guān)于三價(jià)苗的免疫效果及免疫程序鮮有報(bào)道［7～10］。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，建議奶牛口蹄疫三價(jià)苗免疫程序如下:犢牛90 d首免口蹄疫三價(jià)滅活疫苗，首免后1個(gè)月進(jìn)行二免，以后每6個(gè)月加強(qiáng)免疫1次;成年母牛首免后每6個(gè)月加強(qiáng)免疫1次。

［1］ 李健，陳沁，熊煒，等.口蹄疫病毒RT-LAMP檢測(cè)方法的建立［J］.病毒學(xué)報(bào)，2009，25(2):137 ～142.

［2］ 白興文，李平花，劉在新，等.口蹄疫病毒反向遺傳學(xué)研究進(jìn)展［J］.微生物學(xué)通報(bào)，2009，36(1):106 ～112.

［3］ 李永亮，盧曾軍，楊蘇珍，等.口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白定量檢測(cè)ELISA方法的建立［J］.中國生物工程雜志，2009，29(11):70 ～73.

［4］ 劉耀方，何孔旺，張德坤，等.利用多重RT-PCR對(duì)口蹄疫病毒分型［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，5:136 ～139.

［5］ 霍曉娜，于瀟萌.我國奶?？谔阋咭呙缡袌?chǎng)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)［J］.中國乳業(yè)，2013，140:48 ～51.

［6］ 江精華，戴光文，韋邦偉，等.奶牛口蹄疫免疫程序試驗(yàn)［J］.中國奶牛，2014，13:61 ～62.

［7］ 韓磊，靳興軍，梁明珍，等.北京地區(qū)牛口蹄疫母源抗體水平及其疫苗免疫效果的調(diào)查研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2003，30(3):44 ～45.

［8］ 李靜，張魯安，周亞，等.口蹄疫AsiaI-O型雙價(jià)疫苗對(duì)奶牛母源抗體及免疫抗體消長情況的觀察［J］.中國獸醫(yī)雜志，2009，45(7):52 ～54.

［9］ 賈澤穎，劉鄧，郭又春，等.奶牛O型、亞洲I型、A型口蹄疫免疫抗體變化規(guī)律觀察［J］.中國奶牛，2013，4:36～38.

［10］ 劉怡雯，耿美琴，馬光焰.蘇州地區(qū)奶?？谔阋唠p價(jià)苗免疫程序的探索［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2013，2:50.