曾立華，李其華，劉利民，雷春華，谷雪梅

（湖南師范大學(xué)，湖南 長沙 410081）

對羥基苯甲酸酯即尼泊金酯是國際上公認(rèn)的廣譜性高效安全的食品防腐劑，廣泛用于食品、化妝品及醫(yī)藥等行業(yè)[1-3]。

最近以來，對羥基苯甲酸酯受到了科研工作者的特別關(guān)注，因為 Routledge等首次發(fā)現(xiàn)對羥基苯甲酸酯具有雌激素活性[4]，英國研究：苯甲酸酯類（parabens）可能增加致癌危險，這一發(fā)現(xiàn)以全新的方式對原有的對羥基苯甲酸酯具有低毒性的舊觀點提出了挑戰(zhàn)[5]。目前對于食品和藥品中尼泊金酯的含量測定方法介紹的文獻(xiàn)并不多[6]。本文采用高效液相色譜法來測定復(fù)方硝酸益康唑乳膏尼泊金甲酯、丙酯的含量，準(zhǔn)確性高，操作簡便，結(jié)果令人滿意。

1 實驗部分

1.1 實驗試劑與儀器

對羥基苯甲酸甲酯、丙酯對照品，色譜純甲醇、二次蒸餾水，洗發(fā)乳（廣州市迪彩化妝品有限公司）

高效液相色譜儀 大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司 LC-10UV；10μL微量進(jìn)樣器；PL303電子分析天平，瑪瑙研缽

1.2 色譜條件

色譜柱 Hypersil C18-ODS 5 um 編號：JS-0706-0094 型號：250x4.6mm 流動相：甲醇：水=70：30（體積比），流速為1 um /min，柱溫25℃，進(jìn)樣量10uL，檢測波長為254 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱量分析純的尼泊金甲酯0.0763g、尼泊金丙酯 0.0922g，配成濃度均為0.0100mol/l的混合溶液。用移液管或微量注射器從儲備液A中分別移取5mL、2ml、0.5ml、0.2ml、0.05ml至 50ml容量瓶中并用色譜純甲醇稀釋至刻度，得到尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品溶液的制備：稱取1.0080g發(fā)乳于100mL燒杯中，加50mL色譜純甲醇攪拌使之溶解，離心然后靜置半小時后，用移液管25mL上清液于50mL容量瓶中，再用色譜純甲醇稀釋至刻度。

1.4 線性關(guān)系考察

用微量進(jìn)樣器分別吸取已配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液10uL進(jìn)樣，按色譜條件進(jìn)行HPLC分析，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 重復(fù)性、分離度、線性關(guān)系

色譜適用性試驗通常包括理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等指標(biāo)。其中重復(fù)性和分離度是系統(tǒng)適用性中更具實用意義的參數(shù)。

實驗表明，尼泊金甲酯、丙酯進(jìn)樣的濃度分別為 1.0×10-3 mol/L 、4.0×10- 4 mol/、1.0×10-4 mol/L 、4.0×10-5 mol/L 、1.0×10-5 mol/L,進(jìn)樣的體積為10uL時，其峰面積（A）與質(zhì)量（m）呈線性關(guān)系，回歸方程分別為Y=3E+10x+ 230030，r=0.99997；Y=3E+10x+ 91174， r=0.9995。結(jié)果表明對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯在1.0mmol/L—1.0×10-2mmol/L濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

表1 尼泊金甲酯的測定分析數(shù)據(jù)

表2 尼泊金丙酯的測定分析數(shù)據(jù)

2.2 精密度實驗結(jié)果

同一濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10μL，RSD分別是0.71和1.14( n = 5)

2.3 加樣回收率試驗結(jié)果

在選定色譜條件下，以5份未加防腐劑的樣品為空白，分別加入一定量的尼泊金甲酯、丙酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每次進(jìn)樣10μL，測定峰面積，分別記錄保留時間與峰面積，計算平均回收率分別97.40%、102.50%。結(jié)果見表3和表4。

表3 尼泊金甲酯的加樣回收率試驗數(shù)據(jù)分析

表4 尼泊金丙酯的加樣回收率試驗數(shù)據(jù)分析

2.4 樣品測定結(jié)果

取已配制好的樣品溶液，在上述色譜條件下，待測樣品液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10μL。分別記錄保留時間與峰面積，用外標(biāo)法計算平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.25mg/g、1.74mg/g，得到RSD分別為 0.64%、0.59%。

表5 樣品溶液中尼泊金甲酯（MP）的含量測定數(shù)據(jù)

表6 樣品溶液中尼泊金丙酯(PP)的含量測定數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

由樣品的測定實驗所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以及利用回歸方程進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到洗發(fā)乳中尼泊金甲酯、丙酯的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為 0.135%（g/g）、0.087%（g/g）。本文利用高效液相色譜法來測定液體樣品中尼泊金酯含量，實驗表明：采用甲醇與水（體積比為7：3）做流動相，能更好的分離尼泊金酯，也能避免操作過程中因乙腈的毒性對實驗者造成的健康危害。該方法操作方便、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，為控制食品、藥品、化妝品等中尼泊金酯的用量提供了一種可靠的方法。

[1]Alan Talevi Carolina L.Bellera.A successful virtual screening application：prediction of anticonvulsant activity in MES test of widely used pharmaceutical and food preservatives methylparaben and propylparaben[J].Comput Aided Mol Des ,2007(21)：527–538.

[2]周建科, 宋歌, 劉瑞英, 張明翠．高效液相色譜法同時測定化妝品中尼泊金酯類防腐劑和特丁基對二苯酚[J].河北大學(xué)學(xué)報, 2010 (04)：365.

[3]曹保印．一種高效廣譜食品防腐劑-尼泊金酯[N]．科技資訊,2004(07)．

[4]葛均輝, 常兵.對羥基苯甲酸酯類物質(zhì)的雌激素活性[J].衛(wèi)生研究, 2006 ( 5)：650- 652.

[5]B.rousset.Antithyroid effect of a food or drug preservative：4-hydroxybenzoic acid methyl ester[N]experientia,2008(8).

[6]M.A.Moreno,D.Castro , R Frutos /,M.R Ballesteros,J.L.Lastres.Liquid Chromatographic Determinationof Methylparaben and Propylparaben in Nortriptyline Hydrochloride Oil-Water Microemulsions J.Chromatographia Vol.52.No.9/10, Nov,2006：589-591.

[7]國家藥典編委會.中華人民共和國藥典[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[8]邢金京, 歐陽廣娜.使用氣相色譜法和液相色譜法對六種尼泊金酯類進(jìn)行分離測定[J].現(xiàn)代測量與實驗管理, 2010(4)：3-5.