趙英娜 賈紅梅 楊 平

（山東濱州沃華生物工程有限公司 256606）

血凝抑制試驗(yàn)在實(shí)際應(yīng)用中若干問(wèn)題的探討

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血凝抑制試驗(yàn)作為一種簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)方法應(yīng)用廣泛，但實(shí)際操作中會(huì)受溫度、紅細(xì)胞懸液配制、結(jié)果判定等因素影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文主要對(duì)血凝抑制試驗(yàn)操作的關(guān)鍵點(diǎn)進(jìn)行闡述。

1　抗原配制

HI試驗(yàn)在實(shí)際應(yīng)用中首先應(yīng)注意4單位（HAU）抗原的配制，試驗(yàn)所用抗原在使用前需作血凝（HA）試驗(yàn)，根據(jù)該抗原的血凝價(jià)配制4HAU抗原。每次HI試驗(yàn)所用4HAU抗原均要現(xiàn)配現(xiàn)用，配好后還應(yīng)作4HAU抗原校對(duì)試驗(yàn)，以確定抗原配制是否準(zhǔn)確。配制出準(zhǔn)確的4HAU抗原是血凝抑制試驗(yàn)成功的首要條件。

2　溫度的控制

溫度對(duì)試驗(yàn)影響較大。溫度的高低決定紅細(xì)胞與病毒的凝集速度，同時(shí)也決定二者的解脫速度。常用感作溫度為37℃或25℃，溫度過(guò)低，反應(yīng)速度慢，觀察時(shí)間較長(zhǎng)；溫度過(guò)高，反應(yīng)速度快，應(yīng)及時(shí)觀察結(jié)果，防止時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致紅細(xì)胞與病毒發(fā)生解脫；

3　微量血凝板的清潔

血凝抑制試驗(yàn)中最常見(jiàn)的是跳孔現(xiàn)象（如第3孔和第5孔均出現(xiàn)血凝抑制，而第4孔卻出現(xiàn)凝集），使結(jié)果無(wú)法判定。微量血凝板的清潔度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有很大的影響。微量血凝板清潔的正確程序?yàn)槭紫扔米詠?lái)水反復(fù)沖洗，然后于1%～2%的稀鹽酸中浸泡24h以上，再用自來(lái)水反復(fù)沖洗2～3次，最后經(jīng)蒸餾水浸泡24h后37℃烘干備用。

4　紅細(xì)胞懸液的準(zhǔn)確配制和HI結(jié)果的判定

試驗(yàn)證明，不同雞的紅細(xì)胞對(duì)病毒的敏感性不同，所以試驗(yàn)時(shí)最好選用3～4只雞的混合紅細(xì)胞，一般要求用2～6月齡公雞。為了保證紅細(xì)胞的穩(wěn)定性，在紅細(xì)胞懸液的制備過(guò)程中需掌握好離心速度與時(shí)間。進(jìn)行紅細(xì)胞懸液配制吸取沉淀的紅細(xì)胞時(shí)，要在試管最底部吸取進(jìn)行稀釋配制，如隨意從沉淀的紅細(xì)胞上層吸取將會(huì)導(dǎo)致配制的紅細(xì)胞懸液濃度偏低，因?yàn)樽詈笠淮坞x心洗滌紅細(xì)胞后棄去的PBS液會(huì)有一些殘留在沉淀的紅細(xì)胞上層。配好的紅細(xì)胞懸液4℃保存?zhèn)溆?，一般能保?周，切忌使用已出現(xiàn)溶血的紅細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)要設(shè)紅細(xì)胞對(duì)照、陽(yáng)性血清對(duì)照和陰性血清對(duì)照。一般當(dāng)陽(yáng)性血清對(duì)照孔出現(xiàn)凝集抑制5min內(nèi)判定試驗(yàn)結(jié)果較好。判斷結(jié)果時(shí)，將微量血凝板傾斜45度，孔底沉淀的紅細(xì)胞流動(dòng)性好，呈淚珠樣流淌，邊緣無(wú)凝集顆粒的為凝集抑制孔，紅細(xì)胞凝集被完全抑制的血清最高稀釋度為待檢樣品的凝集抑制價(jià)。

S852.4+5

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1007-1733（2015）06-0073-02