樊麗鑫 袁 慧 宋紅靜 （河南省西峽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 474500）

獸醫(yī)臨床樣品的采集與送檢規(guī)范

樊麗鑫 袁 慧 宋紅靜 （河南省西峽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 474500）

當(dāng)前畜禽養(yǎng)殖場疾病流行性情況復(fù)雜，混合感染和繼發(fā)感染相當(dāng)普遍，臨床癥狀和病理變化呈非典型化趨勢，獸醫(yī)實驗室檢測對于畜禽疫病診斷顯得極為重要。同時，獸醫(yī)人員對畜禽養(yǎng)殖場實施定期疫病和免疫水平監(jiān)測，是減少畜禽疫病發(fā)生、流行和蔓延，降低經(jīng)濟(jì)損失，確保畜牧業(yè)又好又快、持續(xù)健康發(fā)展的必要手段。

獸醫(yī)臨床樣品的采集和送檢是保證獸醫(yī)實驗室各項檢測結(jié)果可靠性和準(zhǔn)確性的前提和基礎(chǔ)，獸醫(yī)臨床樣品送檢過程中的規(guī)范性也直接關(guān)系到獸醫(yī)實驗室各項檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。下面就獸醫(yī)臨床樣品的采集，保存和送檢方法做簡要介紹：

1　樣品采集的一般原則

（1）凡發(fā)現(xiàn)患病畜禽有急性死亡時，如懷疑是炭疽，則不可隨意解剖，應(yīng)采取患病畜禽的血液，萬不得已時做脾臟觸片的顯微鏡檢查，只有在排除炭疽后方可進(jìn)行剖檢，如懷疑是口蹄疫或高致病性禽流感等一類病原感染，則應(yīng)送相關(guān)參考實驗室進(jìn)行確診。（2）用于病理學(xué)監(jiān)測的樣品，要求所取組織新鮮，并及時固定。動物最好尚未死亡或死亡不久，剖檢時要觀察有腫瘤增生的臟器（肝、脾為必取組織），在病變和正常組織交界處取材，所取組織塊不要太大，厚度不超過1cm，并立即浸入10%福爾馬林固定液中保存，固定液不宜過少，固定液與組織比例為10：1以上。（3）采集病料的種類，應(yīng)根據(jù)畜禽種類和各種傳染病的特點采集相應(yīng)的臟器、分泌物或排泄物。無法懷疑是什么傳染病時，應(yīng)全面采取。（4）血液樣品采集后，可暫時放置于40C冰箱保存，避免凍融溶血，分離出的血清可放置-200C保存。病死畜禽應(yīng)及時采集樣品，防止溫度過高引起腐敗。（5）樣品采集時，應(yīng)盡量保持采樣過程處于潔凈環(huán)境，以防止樣品在采集過程中污染其他病原，干擾樣品的診斷檢測結(jié)果。（6）畜禽養(yǎng)殖場發(fā)生疫病后，應(yīng)詳盡收集發(fā)病時間、發(fā)病動物數(shù)、同群動物數(shù)、死亡數(shù)、臨床治療情況、同群動物免疫情況等，以書面材料（填寫送檢表格）會同送檢樣品送達(dá)獸醫(yī)診斷實驗室。（7）樣品采集時應(yīng)做好個人防護(hù)，防止人畜共患病的感染。樣品采集完畢后應(yīng)及時清理現(xiàn)場，做好環(huán)境消毒和尸體的無害化處理。

2　樣品的采集步驟

（1）選擇臨床癥狀典型、能代表整個畜禽發(fā)病特點的病畜禽2～3頭（只）以上進(jìn)行解剖。（2）解剖后采取病變典型組織送檢，以淋巴結(jié)、扁桃體、肺臟、腎脾、血樣為主。（3）作細(xì)菌性疾病檢測，送檢前5～7d內(nèi)應(yīng)避免使用抗生素類藥物。（4）做免疫監(jiān)測時，應(yīng)區(qū)分畜禽的生長階段，每個階段的群體隨機抽樣采取10～30份血樣。（5）血樣采集1～5ml以上，靜置平放15～20min，充分析出血清后3～7℃冷藏保存。（6）樣品的標(biāo)記：①樣品采集后，應(yīng)在包裝袋上標(biāo)明樣品編號，避免不同樣品混淆。②送檢人應(yīng)認(rèn)真填寫“客戶送樣登記表”或“樣品送檢單”。標(biāo)明送檢單位信息，如養(yǎng)殖場名稱、送檢人姓名、動物品種、日齡及數(shù)量等，還應(yīng)填寫清楚動物臨床表現(xiàn)情況，如發(fā)病率、死亡率、臨床表現(xiàn)、病理變化、免疫程序和用藥情況等。將登記紙張與病料一同送至實驗室。填寫注意事項：聯(lián)系方式應(yīng)填寫準(zhǔn)確、詳盡，實驗室將建立客戶信息檔案，以方便客戶進(jìn)行回溯性追蹤檢測結(jié)果；表格中填寫的樣品數(shù)量與樣品編號應(yīng)與送檢的樣品數(shù)量和編號一致，且樣品盡可能使用唯一性編號，以防止樣品混淆；檢測項目一欄為送檢人根據(jù)臨床情況和剖檢情況進(jìn)行有針對性的檢測要求，獸醫(yī)實驗室也可根據(jù)臨床情況描述或剖檢情況向客戶推薦合適的檢測項目；表格填寫完整后，可隨樣品一起送至獸醫(yī)實驗室，也可通過電子郵件的方式發(fā)送至獸醫(yī)實驗室郵箱；臨床剖檢時，應(yīng)盡量拍照記錄剖檢時的組織臟器病理變化，剖檢照片可發(fā)送電子版表格至獸醫(yī)實驗室電子郵箱，以輔助診斷分析。

3　臨床樣品的采集

3.1全血樣品的采集 豬自耳靜脈或前腔靜脈，家禽自翅靜脈，其他家畜自頸靜脈采血。用注射器吸5%枸櫞酸鈉溶液0.5～1ml（0.1ml的枸櫞酸鈉溶液溶液可抗1ml血液），注入滅菌離心管中。無菌采血5～10ml加入離心管混勻，蓋緊離心管蓋，做好標(biāo)記。

3.2血清樣品的采集 豬自耳靜脈或前腔靜脈，家禽自翅靜脈，其他家畜自頸靜脈無菌采血3-5ml置無菌試管中擺成斜面，待血液充分凝固后可豎起。待血清充分析出后或離心分離血清后，用無菌注射器吸出血清注入無菌離心管中，蓋緊離心管蓋，做好標(biāo)記。

3.3乳汁的采集 取乳者手部用新潔爾滅清洗消毒，同時對被取乳動物的乳房、乳頭進(jìn)行消毒，并把乳房附近的毛刷濕。棄去最初擠出的乳汁，然后采乳10～20ml注入滅菌試管或小瓶中，做好標(biāo)記。

3.4濃汁、水瘡液、水腫液和滲出液的采集 破口的膿灶膿汁用滅菌棉拭子蘸取后，置入滅菌離心管中，剪去露出部分，蓋緊離心管蓋，做好標(biāo)記，并密封低溫保存；未破口的膿灶用滅菌注射器吸出膿液后，注入滅菌容器中，做好標(biāo)記，密封低溫保存。

3.5鼻拭子、咽拭子、肛拭子的采集 用滅菌棉拭子在患病畜禽鼻腔或咽喉部、肛處轉(zhuǎn)動至少3圈，蘸取分泌物后，立即放入加有1mlPBS或生理鹽水的滅菌離心管中，剪去露出部分，蓋緊離心管蓋，做好標(biāo)記，冷藏保存。

3.6淋巴結(jié)、肝、脾、肺、腎的采集 淋巴結(jié)可整個采取，其他器官可采取病變明顯部位。無菌剪取一塊（肝脾大至2-3cm3），分別放置滅菌容器中，另取少許病料觸片數(shù)張，并做好標(biāo)記，一并送檢。

3.7腸的采集 選取適宜腸段約2寸以上，兩端結(jié)扎，在結(jié)扎線外端剪斷后，置玻璃容器或塑料袋中。

3.8膽汁的采集 采取整個膽囊置一塑料袋中或以滅菌注射器吸取膽汁數(shù)毫升注入滅菌器內(nèi)。

3.9腦和脊髓的采集 將腦和脊髓取出，浸入保存液中或?qū)㈩^部整個割下，用浸過3%石碳酸的紗布包裹后，裝入塑料袋內(nèi)。

3.10小家畜、家禽的尸體和流產(chǎn)胎兒的采集 用消毒液浸過的紗布包裹后，裝入塑料袋中整個送檢。

4　樣品的保存和運輸

4.1樣品的保存 （1）血液樣品應(yīng)置于3～7℃低溫環(huán)境中冷藏保存，避免凍結(jié)失效。（2）活組織取出后，需置于室溫中進(jìn)行降溫，再放入冰箱或冰盒中，不要直接放入冷凍環(huán)境。

4.2樣品的運輸 （1）畜禽組織樣品取樣后，應(yīng)盡快送到獸醫(yī)實驗室進(jìn)行檢測，短時間內(nèi)不能送到實驗室的樣品，應(yīng)放置于冷凍環(huán)境后，再加足冰塊，放入保溫泡沫箱中運輸。（2）樣品運輸應(yīng)提前和動物疫病診斷室溝通，采用最快的途徑進(jìn)行運輸，防止運輸時間過長造成樣品腐敗。（3）樣品運輸方法：放入泡沫保溫箱中運輸。視氣溫情況和運輸時間長短加入足夠冰袋，最好在24h內(nèi)送至實驗室，越快越好，一般不超過48h。

S851.34

C

1007-1733（2015）06-0055-02