平佳宜,劉豐林 ,肖文靜,張娜娜

(開(kāi)封市中醫(yī)院中醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 開(kāi)封 475000)

·藥學(xué)研究·

降糖通便丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

平佳宜,劉豐林 ,肖文靜,張娜娜

(開(kāi)封市中醫(yī)院中醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 開(kāi)封 475000)

目的：建立降糖通便丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：用TLC法對(duì)方中當(dāng)歸、大黃、甘草進(jìn)行鑒別；用HPLC法測(cè)定白芍中芍藥苷的含量。結(jié)果：TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好。芍藥苷在0.16～4.008mg/L(r=0.999 9)范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；回收率的平均值為96.74%，RSD為2.49%(n=9)。 結(jié)論：該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于降糖通便丸的質(zhì)量控制。

降糖通便丸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜；芍藥苷

降糖通便丸由當(dāng)歸、大黃、白芍、枳實(shí)、川芎、甘草、牽牛子、桃仁組成，具有潤(rùn)腸通便、逐瘀降濁的作用，用于治療糖尿病合并便秘，療效顯著。為了有效控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，筆者對(duì)制劑中當(dāng)歸、大黃、甘草進(jìn)行了TLC鑒別，并采用HPLC法對(duì)白芍中芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 藥品、試劑與儀器

降糖通便丸由開(kāi)封市中醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)130215，130219，130225。大黃素對(duì)照品(批號(hào)110756-200110)、唐古特大黃對(duì)照藥材(批號(hào)120902-201010)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)110736-201136)、當(dāng)歸對(duì)照藥材(批號(hào)120927-201014)及甘草對(duì)照藥材(批號(hào)120904-201117)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物檢定所。LC-10A高效液相色譜儀，日本島津公司產(chǎn)品；ESJ182-4電子天平及JM5002電子天平，均為沈陽(yáng)龍騰電子有限公司產(chǎn)品。

2 定性鑒別

2.1 當(dāng)歸的TLC鑒別[1]

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

稱取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加乙醇10mL，超聲提取20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備

取本品3g，粉碎成細(xì)粉，加乙醇15mL，超聲15min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照品溶液的制備

取缺當(dāng)歸的處方藥材，按照擬定的工藝制成片劑，同法制備缺當(dāng)歸陰性對(duì)照品溶液。

2.1.4 薄層色譜鑒別

按照2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅥB項(xiàng)下薄層色譜法。吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷—乙酸乙酯(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺當(dāng)歸陰性對(duì)照品溶液在相對(duì)應(yīng)的位置無(wú)相應(yīng)的熒光斑點(diǎn)檢出。見(jiàn)圖1。

1.當(dāng)歸對(duì)照藥材；2，3，4.供試品；5.陰性對(duì)照品圖1 當(dāng)歸的TLC

2.2 大黃的TLC鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備

取本品10g，粉碎成細(xì)粉；加甲醇25mL，振搖30min，濾過(guò)；取濾液6mL，蒸干；殘?jiān)铀?0mL溶解，再加鹽酸1mL，加熱回流30min；冷卻后用乙醚振搖提取2次，每次20mL；合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使溶解，即得。

2.2.2 對(duì)照溶液的制備

精密稱大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1.1mg的對(duì)照品溶液。另取大黃對(duì)照藥材0.3g，照供試品溶液的制備方法制得大黃對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備

取缺大黃的處方藥材，按照擬定工藝制成片劑，同法制備缺大黃陰性對(duì)照品溶液。

2.2.4 薄層色譜鑒別

按照2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅥB項(xiàng)下薄層色譜法。吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位上，分別顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏蒸后，在日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色;缺大黃陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

1.大黃素對(duì)照品；2.大黃對(duì)照藥材；3，4，5.供試品；6.陰性對(duì)照品圖2 降糖通便丸的TLC

2.3 甘草的TLC鑒別

2.3.1 對(duì)照藥材溶液的制備

取甘草對(duì)照藥材0.5g，加甲醇超聲20min，取上清液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備

取本品8g，粉碎成細(xì)粉，加水飽和的正丁醇25mL，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，即得。

2.3.3 陰性對(duì)照品溶液的制備

取缺甘草的處方藥材，按照擬定工藝制成片劑，同法制備缺甘草陰性對(duì)照品溶液。

2.3.4 薄層色譜鑒別

按照2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅥB項(xiàng)下薄層色譜法。吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)—乙酸乙酯—甲酸(20∶8∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，缺甘草陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

1.甘草對(duì)照藥材；2，3，4.供試品；5.陰性對(duì)照品圖3 甘草的TLC

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件

KromasilC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流動(dòng)相為乙腈-1g/L磷酸溶液(13∶87)，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，流速1mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10μL。

3.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精取芍藥苷對(duì)照品5.01mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為40.08mg/L的芍藥苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)；取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中；精密加入甲醇50.0mL，密塞；稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min；取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻；精密吸取續(xù)濾液2mL置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 陰性對(duì)照品溶液的制備

取缺白芍的處方藥材，按照擬定工藝制成片劑，同法制得缺白芍陰性對(duì)照品溶液。

3.5 專屬性試驗(yàn)

精密吸取上述3種溶液，按3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：在降糖通便丸供試品色譜中，在與芍藥苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處有相對(duì)應(yīng)的色譜峰，而缺白芍陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖4。

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照品圖4 高效液相色譜圖

3.6 線性關(guān)系的考察

精密吸取芍藥苷含量為40.08mg/L的對(duì)照品貯備液1.0，5.0，10.0，15.0，25.0mL，分別置250mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。分別精密吸取10μL注入高效液相色譜儀中，按3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(mg/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到芍藥苷的回歸方程為：Y=2 408 171.25X+5 921.7(r=0.999 9)。結(jié)果表明：芍藥苷在0.16～4.008mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

3.7 精密度試驗(yàn)

分別吸同一芍藥苷對(duì)照品溶液10μL，按3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果：峰面積的RSD值為1.08%。結(jié)果表明：精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密取同一供試品溶液10μL，在室溫下放置0，1，2，4，6，8，12，16，20，24h，按3.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果：芍藥苷峰面積的RSD值為1.01%。結(jié)果表明：供試品溶液在24h內(nèi)較為穩(wěn)定。

3.9 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取同一批號(hào)樣品6份各0.2g，精密稱定，按3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：芍藥苷含量的RSD值為1.97%。結(jié)果表明：該方法重現(xiàn)性良好。

3.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的降糖通便丸(批號(hào)130215)0.03g，置具塞錐形瓶中，平行9份，精密加入3.2項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適當(dāng)體積，再加入甲醇定容至50mL，每個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)平行3份，按3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成加樣回收供試品溶液。分別精密吸取加樣回收供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀中，按上述3.1項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.11 樣品含量測(cè)定

取3批樣品(批號(hào)分別為130215,130219,130225)，按上述方法測(cè)定降糖通便丸中芍藥苷的含量，每個(gè)批次平行測(cè)定3次。結(jié)果：3批樣品中芍藥苷的平均含量分別為0.8715,0.8706,50.8718mg/g。

4 討 論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)降糖通便丸中主要藥物當(dāng)歸、大黃和甘草進(jìn)行了薄層鑒別，結(jié)果顯示各薄層斑點(diǎn)顯色清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾，提示所建立的方法專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單易行，可作為本品中上述藥材成分的定性鑒別。在芍藥苷的含量測(cè)定中，試比較了甲醇-水-冰醋酸(49∶50∶1)、乙腈- 1g/L磷酸溶液(15∶85)和乙腈-水(13∶87)3種流動(dòng)相[2-4]，結(jié)果以乙腈-1g/L磷酸溶液(15∶85)分離效果最好，故選其作為流動(dòng)相。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:124.

[2]吳艷麗，孫海濤，史學(xué).HPLC測(cè)定蕩滌靈顆粒中芍藥苷的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8(10)：16.

[3]丁廣軍.HPLC法測(cè)定補(bǔ)腎生精丸中芍藥苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9(13):144.

[4]賈傳弟.高效液相色譜法測(cè)定敗醬草片中芍藥苷的含量測(cè)定[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2010，9(13) :144

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)02-0067-03

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.31

開(kāi)封市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(130368)

2014-06-26；

2014-11-21