董永軍，曹永孝

(1.慶陽市婦幼保健院， 甘肅 慶陽745000； 2.西安交通大學醫(yī)學院藥理學系，陜西 西安 710061)

·實驗研究·

消石膠囊對泌尿系結石干預機制的實驗研究*

董永軍1，曹永孝2

(1.慶陽市婦幼保健院， 甘肅 慶陽745000； 2.西安交通大學醫(yī)學院藥理學系，陜西 西安 710061)

目的：觀察消石膠囊對泌尿系結石干預的機制。方法：用乙二醇法復制大鼠腎結石模型，研究消石膠囊對腎結石形成的抑制作用；用代謝籠集尿法研究其利尿作用；用扭體法研究其鎮(zhèn)痛作用；用伊文斯藍法研究其對腹腔毛細血管通透性的作用。結果：消石膠囊大、中、小劑量均有抑制結石形成作用； 此外，消石膠囊大劑量有利尿作用，大、中劑量有鎮(zhèn)痛作用。結論：消石膠囊對泌尿系結石干預可能是通過抑制結石形成及利尿作用來實現(xiàn)的。

消石膠囊/藥效學；泌尿系結石/藥物作用；動物模型；大鼠；小鼠

消石膠囊是甘肅省慶陽市婦幼保健院董永軍主任醫(yī)師等研制的中藥復方制劑，主要由廣金錢草、石韋、威靈仙等組成，有清熱利濕、活血止痛、補腎化氣、溶石排石的功能，主治腎、輸尿管、膀胱等泌尿系結石。為進一步探討其作用機制，本課題組設立實驗對大鼠泌尿系結石的干預機制進行了研究。

1 材 料

1.1 動 物

SD雄性大鼠，體質量(180±20)g，合格證號為陜動證字08-004號；ICR小鼠，體質量(20±2)g，雌雄兼用，合格證號為陜動證字08-003號。

1.2 藥品、試劑與儀器

消石膠囊由甘肅省慶陽市中醫(yī)醫(yī)院提供，批號050410；玉林消石片，廣西玉林制藥有限責任公司產品，批號 438029；氫氯噻嗪，山西臨汾云鵬藥業(yè)有限公司產品，批號20050401。HH-S112型電熱恒溫水浴鍋，江蘇醫(yī)療器械廠產品；721-分光光度計，上海第三分析儀器廠產品；AnalyTech-738半自動生化分析儀，上海安泰分析儀器公司產品；80-2B型離心機，無錫瑞江分析儀器公司產品；BS1103型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司產品；BF202型生物顯微鏡，重慶麥克光電儀器有限公司產品。

2 方法與結果

2.1 模型的建立

將78只大鼠禁食、給水1d，隨機分成正常對照組、模型對照組、玉林消石片組和消石膠囊大、中、小劑量組。大鼠自由飲用含1.4mL/L乙二醇和0.7g/L氯化銨的水溶液[1-2]，連續(xù)30d；用10mL/L的乙二醇和10g/L的氯化銨繼續(xù)喂養(yǎng)10d[3]，同時各組每天以相應藥物灌胃給藥。40d后處死動物, 縱向剖開腎臟, 在解剖顯微鏡下觀察結晶沉淀物及游離結石或鈣化斑，作為判斷結石的標準。見表1。

表1 結石形成及對腎臟損傷程度的檢測標準

2.2 統(tǒng)計學方法

2.3 對大鼠腎臟結石形成的抑制作用

腎臟常規(guī)石臘包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察病理變化。正常對照組：大鼠腎臟皮質、髓質分界清楚，皮質內腎小球分布、結構如常，腎皮質、髓質及腎乳頭均無可見的結石和結晶沉淀物, 腎外形無異常，腎小囊內未見滲出、增生，腎小管上皮未見變性、壞死及脫落，腎小管管腔內未見管型(見圖1)。模型對照組：大鼠腎小管內可見大量結晶，有游離結石形成(見圖2)。玉林消石片組：大鼠腎髓質的腎小管內可見少量的結晶沉淀物(見圖3)。消石膠囊大劑量組：大鼠腎小管內僅見少量的結晶沉淀物(見圖4)。消石膠囊中劑量組：腎皮質的腎小管內可見結晶沉淀物或有小的游離結晶，以遠曲小管更為多見，但明顯少于模型對照組(見圖5)。消石膠囊小劑量組：腎皮質深部腎小管內可見結晶沉淀物或有小的游離結晶，但仍少于模型對照組(見圖6)。

圖1 正常對照組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖2 模型對照組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖3 玉林消石片組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖4 消石膠囊大劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖5 消石膠囊中劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖6 消石膠囊小劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

消石膠囊大劑量組和中劑量組腎臟的結石形成率明顯低于模型對照組，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。模型對照組大鼠腎臟有明顯的結石形成并對腎臟造成損傷，消石膠囊3個劑量組大鼠腎臟結石形成及對腎臟損傷程度均明顯較模型對照組輕，且有統(tǒng)計學意義。見表2。

表2 各組大鼠腎臟損傷對比 n=13

注：與模型對照組對比，* P<0.05，** P<0.01。

2.4 對大鼠尿量的干預

取大鼠50只，輕壓下腹部使膀胱排空后灌胃生理鹽水20μL/g，將大鼠置于代謝籠中，1只鼠放1個代謝籠，測24h尿量。隨機將大鼠分為正常對照組、氫氯噻嗪組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組10只。各組均灌胃給相應藥物(正常對照組給以生理鹽水)，容積20μL/g，1d1次，連續(xù)4d。末次給藥后，再測大鼠24h尿量[4]。結果：消石膠囊大劑量組較正常對照組尿量增加，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

表3 各組大鼠尿量和尿量增加值對比

注：與正常對照組對比，** P<0.01。

2.5 對小鼠痛覺的干預

取雄性小鼠100只，體質量(20±2)g，隨機分為模型對照組、阿司匹林組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組20只。各組均灌胃相應藥物(模型對照組給以生理鹽水)20μL/g,1d1次，連續(xù)4d。于末次給藥后40min，腹腔注射 6g/L醋酸溶液，記錄各組小鼠15min內的扭體次數(shù)。結果：阿司匹林組和消石膠囊大、中劑量組小鼠扭體次數(shù)減少，與模型對照組對比，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表4。

表4 各組小鼠扭體數(shù)對比

注：與模型對照組對比，* P<0.05，** P<0.01。

2.6 對小鼠腹腔毛細血管通透性的干預

取雄性小鼠50只隨機分為模型對照組、阿斯匹林組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組10只。各組均灌胃相應藥物(模型對照組給以生理鹽水)20μL/g,1d1次，連續(xù)4d。末次給藥后1h，腹腔注射質量分數(shù)6g/L醋酸0.3mL；30min后，尾靜脈注射6g/L的 伊文斯藍生理鹽水溶液10μL/g；20min后，脫頸椎處死小鼠；切開腹腔，用6mL生理鹽水洗滌腹腔,吸管吸出洗滌液4mL，加生理鹽水稀釋至10mL;3 000r/min離心15min;取上清液于578nm比色測定，讀取吸光度值。結果：消石膠囊大、中、小劑量組吸光度值與模型對照組對比，差別無統(tǒng)計學意義。見表5。

表5 各組小鼠腹腔毛細血管通透性對比

注：與模型對照組對比，** P<0.01。

3 討 論

消石膠囊由廣金錢草、石韋、威靈仙、懷牛膝、延胡索等藥物經有效成分提取而制成[5]。方中廣金錢草、海金砂味甘，性寒，入膀胱經，具有清熱、利尿、通淋之功。金錢草兼咸味，可軟堅、清熱、排石，是排石專藥?，F(xiàn)代藥理學研究證實，金錢草可引起輸尿管上段腔內壓力增高，輸尿管蠕動增強，尿量增加，促使結石排出；此外，口服金錢草可使尿液變?yōu)樗嵝裕艽偈乖趬A性環(huán)境中才能存在的結石溶解[6]。海金砂利尿通淋，善于治療上尿道疼痛，亦是治諸淋澀痛的要藥；其煎劑對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、福氏桿菌均有抑制作用。石韋長于清熱利濕通淋，還能抑制草酸鹽結晶沉淀，具有防治結石形成的作用。威靈仙其性猛急，善走而不守，可宣通十二經脈，具有緩解平滑肌痙攣的作用，故有溶石和促進排石之功效；配合延胡索，既可行血中之氣滯，又可散氣中之血瘀，為治療結石誘發(fā)腎絞痛之要藥。懷牛膝味酸苦，性平，歸肝腎二經，其性滑利，善下行，能活血祛瘀、補肝腎、強筋骨、利尿通淋。配肉桂，溫腎助陽化氣，為標本兼顧之法?？v觀全方，主次分明，標本兼顧，相輔相成，共奏清熱利濕、補腎化氣、排石溶石之功效。

本研究結果顯示：①消石膠囊各劑量均對大鼠腎臟結石形成有抑制作用；②消石膠囊大劑量明顯增加大鼠日尿量；③消石膠囊大、中劑量有鎮(zhèn)痛作用。由此可推斷：消石膠囊對大鼠泌尿系結石的干預機制可能是通過其對結石形成過程的抑制及利尿作用來完成的。

[1]曹正國，劉繼紅，段永芳，等. 幾種實驗性大鼠腎草酸鈣結石模型的比較研究[J].華中科技大學學報，2002, 31(5): 93-96.

[2]陳奇. 中藥藥理研究方法學[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：389-391.

[3]鐘玲，熊愛華，楊延秀，等. 乙二醇法復制腎結石模型給藥途徑和方法的比較[J]. 中國病理生理雜志，2000，16(4):381-382.

[4]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]. 2版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1994：1052.

[5]董永軍，景秀珍，楊楠，等.消石膠囊治療泌尿系結石的臨床觀察[J]. 世界中西醫(yī)結合雜志，2008：350-352.

[6]田代華.實用中藥詞典[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2002：1178.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)02-0064-04

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.30

甘肅省慶陽市科技攻關項目(GDK022-1-17)

2014-09-22；

2014-11-13