李 斌

（廣州市從化區(qū)無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)管理中心，廣東廣州 510920）

關(guān)于動物疫病檢測的探討和分析

李 斌

（廣州市從化區(qū)無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)管理中心，廣東廣州 510920）

對于動物養(yǎng)殖而言，疾病是無法避免的，如何有效做好動物常見疫病的診斷與治療是擺在我們面前的首要難題。隨著技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，關(guān)于動物常見疫病的檢測更是備受大家的關(guān)注。為此，文章以“動物疫病監(jiān)測”為主要研究對象，展開探討和分析，希望能為進(jìn)一步做好動物常見疫病的檢測工作提供一定的依據(jù)和參考。

動物疫病；檢測；探討；分析

1 前言

要想做好動物疫病的治療，首要的是要準(zhǔn)確識別疫病，進(jìn)而采取準(zhǔn)確、合理的治療措施。為此，文章就豬瘟、藍(lán)耳、Elisa檢測以及布魯氏菌虎紅平板檢測等展開探討。

2 關(guān)于幾種動物常見疫病檢測的探討和分析

2.1 豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測方法

2.1.1 目的

這種方法的主要原理就是通過待檢測抗體與單克隆抗體和豬瘟病毒抗原的競爭結(jié)合，根據(jù)最終的顯色程度來進(jìn)行判別。本方法是用于檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的一種阻斷ELISA方法，通過待測抗體和單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的競爭結(jié)合，采用辣根過氧化物酶與底物的顯色程度來進(jìn)行判定。

2.1.2 步驟

首先要保證實驗所需要的試劑盒組必須恢復(fù)到室溫18～25℃，至少要在使用1h之前將其置于室溫條件下。

具體操作時，分別于檢測孔和對照孔中各加入50μl的樣品稀溶液；緊接著在相應(yīng)的對照孔中分別加入陽性對照液和陰性對照液體，劑量為50μl，但是需要注意的是，及時更換洗頭，以防造成污染，并最終影響到實驗的結(jié)果；最后，于剩下的檢測孔中加入50μl的被檢測樣品。待輕輕彈動微量反應(yīng)板，直至反應(yīng)板中的溶液搖晃均勻后，封條封閉，放置于溫度大約在25℃左右的濕箱中，孵育2h之后，將反應(yīng)孔中的液體吸出后，洗滌三次。

之后，于反應(yīng)孔中加入抗CSFV酶標(biāo)二抗100μl，再次封條封閉反應(yīng)板，置于室溫條件下孵育30min。洗板后，于反應(yīng)空中加入底物溶液100μl，放置于避光的室溫條件下10min，需要注意的是，在第一反應(yīng)孔加滿之后，計時開始。

10min后將終止液100μl按照加酶標(biāo)二抗的順序分別加入每一個反應(yīng)孔中，在450nm處測定樣本以及對照的吸光值，也可用450nm和620nm的雙波長測定樣本以及對照的吸光度值，空氣調(diào)零。

待上述步驟完成后，按公式計算出樣本和對照的平均吸光度值，如果被檢樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本被判定為陽性（有CSFV抗體存在）。如果被檢樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本被判定為陰性，即沒有抗體的存在。

2.2 布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗

2.2.1 目的

虎紅平板凝集實驗的主要目的就是為了檢測布魯氏菌病。

2.2.2 步驟

該實驗需要抗原、標(biāo)準(zhǔn)的陽性血清和陰性血清。另外，為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，還需要準(zhǔn)備干凈的玻璃板，保證被檢測的血液務(wù)必要新鮮，沒有明顯的蛋白凝塊，更沒有溶血現(xiàn)象，沒有腐敗的氣味。

在實驗開始前，要在干凈的玻璃板上畫上方格，準(zhǔn)備好吸管或者分裝器以及牙簽、火柴桿等。

該實驗的具體操作方法是對待檢測的血清進(jìn)行編號后，加入0.03ml的相應(yīng)血清，然后再滴加0.03ml的抗原于待檢測血清旁，之后用牙簽或者火柴桿慢慢攪動血清，使其與抗原結(jié)合，然后采用陰性、陽性對照的方法進(jìn)行試驗。

關(guān)于實驗結(jié)果的判定，如果4min內(nèi)被檢測的血清肉眼可見凝集現(xiàn)象，則呈陽性，如果未見凝集，而是均勻粉紅色，則為陰性。

2.3 家禽的禽流感HA、HI凝集試驗

2.3.1 目的

HA-HI凝集試驗主要是為了檢測流感。

2.3.2 步驟

首先要配置濃度為1%的紅細(xì)胞懸液，紅細(xì)胞必須是SPF公雞或無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞。應(yīng)特別關(guān)注所測病原的抗體是否存在于雞體內(nèi)。雞血液的采集應(yīng)規(guī)范，保證無菌操作，避免雜菌污染，因為污染所造成的非流感起源的凝集素也可與所有抗原血清發(fā)生非特異性反應(yīng)，同時采血時應(yīng)避免溶血和凝血現(xiàn)象發(fā)生。建議使用與血清來源相同的禽種紅細(xì)胞。

另外，血細(xì)胞應(yīng)根據(jù)所需確定所取，血細(xì)胞的洗滌應(yīng)保證上清液為透明狀為準(zhǔn)，洗滌過程中注意輕柔吹打和混勻，同時應(yīng)注意每次洗滌時更換吸管，尤其在吸取血細(xì)胞時。

1%紅細(xì)胞懸液制備中最后一次洗滌為3 000 r/min或2 000 g離心10 min進(jìn)行紅細(xì)胞壓積。

洗滌后的血細(xì)胞加入PBS配制成的1%紅細(xì)胞懸液應(yīng)放置 4℃環(huán)境中 60 min 左右進(jìn)行觀察，無溶血等異常后再置室溫中進(jìn)行試驗。

事實上，除雞外有些禽的血清可能對雞紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝集。當(dāng)確認(rèn)這種特性時，用雞紅細(xì)胞對試驗血清進(jìn)行吸附，可以去除非特異凝集素、非特異性凝集抑制素，或者選用在調(diào)查研究中的禽種紅細(xì)胞。吸附方法是在每0.5 ml的抗血清中加入0.025 ml的雞紅細(xì)胞，輕搖后靜置至少30 min；800 g 離心 2～5 min，收集上清，即為處理后的血清。亦可用被檢禽種的紅細(xì)胞。

建議使用 90 度 V 型一次性優(yōu)質(zhì)塑料反應(yīng)板進(jìn)行HA-HI試驗。反應(yīng)試劑應(yīng)按規(guī)定保存和使用。凍干的試劑應(yīng)按照說明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。為避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染，建議以無菌操作將試劑分裝成小包裝，因為反復(fù)凍融比4 ℃放置更易降低反應(yīng)試劑的效價。

HA試驗時，最好同時進(jìn)行2排病毒抗原的測定，判定結(jié)果時取平均值作為血凝終點(diǎn)滴度。

3 結(jié)語

從上文的論述中，我們不難看出一些先進(jìn)的技術(shù)方法在疫病的檢測方面的確有著諸多無法比擬的優(yōu)勢，但每一種檢測方法往往都存在一定的局限性與缺陷，在實際應(yīng)用的過程中一定要尤為注意，否則勢必會在某種程度上影響到實驗的效果。為此，在實際應(yīng)用的過程中，一定要了解并掌握相關(guān)的注意事項，保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，從而為進(jìn)一步做好常見疫病的檢測提供有力的依據(jù)和參考。

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