劉運平 曹妍 王慧娟 趙現(xiàn) 劉冰 闞敏辰 李軍濤

研究表明，急性期腦梗死患者產(chǎn)生腦細(xì)胞損傷甚至死亡，是由于能量代謝障礙刺激興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放，產(chǎn)生自由基反應(yīng)，導(dǎo)致鈣過量內(nèi)流等一系列損傷級聯(lián)反應(yīng)引起的［1］。丙二醛(MDA)是脂質(zhì)氧化的最終產(chǎn)物，可以影響線粒體呼吸鏈復(fù)合物及線粒體內(nèi)關(guān)鍵酶的活性［2］。超氧化物歧化酶(SOD)可以減少體內(nèi)氧化自由基對細(xì)胞組織的損傷［3］。何建明等［4］研究發(fā)現(xiàn)，急性期腦梗死患者M(jìn)DA水平逐漸升高，SOD水平明顯降低，說明二者參與了急性期腦梗死血管損傷過程。急性腦梗死患者缺血區(qū)域因ATP生成不足導(dǎo)致腦細(xì)胞功能障礙甚至死亡，同時線粒體具有調(diào)節(jié)鈣濃度和該信號、自由基產(chǎn)生和清除、細(xì)胞凋亡的作用，因此維持線粒體功能及能量代謝是減少神經(jīng)功能損傷的重要治療途徑［5］。本研究對急性期腦梗死患者應(yīng)用丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達(dá)拉奉進(jìn)行治療，采用比色法觀察患者血清中MDA水平和SOD活力，探討上述藥物對急性期腦梗死患者的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月至2015年2月在我院住院治療的72 h內(nèi)的急性期腦梗死患者160例，均符合“2010中國急性缺血性腦卒中診治指南”［6］相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，其中男104例，女56例;年齡45～76歲，平均年齡(62±13)歲;體重52～84 kg，平均體重(66±15)kg;病程1 ～74 h，平均病程(2.6 ±1.3)h;合并高血壓54例，2型糖尿病30例，高脂血癥28例;不良生活習(xí)慣:吸煙24例，飲酒16例;既往腦梗死病史22例;臨床表現(xiàn):肢體癱瘓46例，發(fā)作性頭暈32例，發(fā)作性肢體無力26例，肢體麻木24例，語言障礙20例，共濟(jì)失調(diào)12例;梗死部位:基底核40例、額葉35例、顳葉31例、枕葉28例、頂葉26例;梗死灶大小:中梗死57例，小梗死52例，腔隙性梗死51例。160例隨機分為對照組、丁苯酞組、依達(dá)拉奉組和聯(lián)合組，每組40例。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)臨床研究倫理委員會審查批準(zhǔn)。4組性別比、平均年齡、體重、病程、合并疾病、既往腦梗死病史、臨床表現(xiàn)、梗死部位和梗死灶大小比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 4組一般資料比較 n=40

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)影像學(xué)檢查確診;②患者發(fā)病72 h以內(nèi);③患者意識清楚，能夠配合檢查和(或)治療;④患者年齡＜80歲;⑤符合“2010中國急性缺血性腦卒中診治指南”相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);⑥患者和(或)家屬知情同意，簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn):①嚴(yán)重肝腎功能不全者;②有出血傾向疾病患者;③顱內(nèi)出血、感染、腫瘤患者;④昏迷患者;⑤精神疾患，如精神分裂癥、癡呆等認(rèn)知功能障礙者;⑥病竇綜合征、冠脈綜合征、嚴(yán)重心律失?；颊?⑦對治療藥物過敏者;⑧存在溝通障礙的疾病，如先天性耳聾、失明等;⑨孕產(chǎn)婦。

1.3 方法 (1)對照組:應(yīng)用阿司匹林100 mg/d，口服;胞二磷膽堿1.0 g和奧扎格雷鈉注射液80 mg，分別加入5%葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉溶液250 ml中靜脈滴注，1次/d，連續(xù)治療14 d。(2)丁苯酞組:在對照組治療的基礎(chǔ)上加用丁苯酞氯化鈉100 ml靜脈滴注，2次/d，14 d為1個療程。(3)依達(dá)拉奉組:在對照組治療的基礎(chǔ)上加用依達(dá)拉奉(南京先聲東元制藥有限公司)30 mg加入0.9%氯化鈉溶液100 ml靜脈滴注，2次/d，連用14 d。(4)聯(lián)合組:在丁苯酞組治療的基礎(chǔ)上加用依達(dá)拉奉30 mg加入0.9%氯化鈉溶液100 ml靜脈滴注，2次/d，連用14 d。4組患者均常規(guī)應(yīng)用調(diào)血脂藥及神經(jīng)營養(yǎng)藥物，根據(jù)實際病情應(yīng)用脫水劑、降壓藥。每天進(jìn)行45 min的康復(fù)訓(xùn)練，均14 d為1個療程。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察患者入院1、7、14 d時MDA水平和SOD活性。4組患者均抽取靜息狀態(tài)下，清晨空腹周靜脈血5 ml。儀器:15 ml錐形離心管，1.5 ml離心管，細(xì)胞刮脫棒，超聲儀，臺式離心機，恒溫水槽，酶標(biāo)板，酶標(biāo)儀。

1.4.1 MDA水平檢測:采用血清MDA濃度比色法定量檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)，血液室溫靜置30 min，至血液凝結(jié)，放入4℃微型臺式離心機離心5 000 r/min，15 min，取上層黃色液體至1.5 ml離心管，即刻置于冰槽備用或放于－70℃冰箱保存。取10 μl進(jìn)行蛋白定量測定，10個15 ml離心管，做好標(biāo)記，移取緩沖液，加入抗干擾液、補充液，用槍頭混勻，分別加入反應(yīng)工作液，蓋上蓋子，上下傾倒數(shù)次混勻，放入60℃恒溫水槽，孵育60 min，放入冰槽冷卻 2 min，放入 4℃微型臺式離心機離心，13 000 r/min，離心5 min，分別取 250 μl上清液至 96孔酶標(biāo)板，放入酶標(biāo)儀檢測，根據(jù)說明書計算樣品濃度。

1.4.2 SDO活力檢測:采用GENMED SOD活性檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)，通過比色測定高度可溶性四唑鹽在超氧化物陰離子還原作用下產(chǎn)生的水溶性加臜染料，定量分析黃嘌呤氧化物酶的還原效率，從而檢測SOD水平。操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗，組內(nèi)比較采用重復(fù)測量方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組血清MDA水平比較 4組患者入院1 d時MDA水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。入院7、14 d時丁苯酞組、依達(dá)拉奉組和聯(lián)合組MDA水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。聯(lián)合組入院7、14 d MDA水平明顯低于丁苯酞組和依達(dá)拉奉組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。丁苯酞組入院7、14 d時MDA水平與依達(dá)拉奉組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對照組入院14 d時MDA水平與入院1 d比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。丁苯酞組、依達(dá)拉奉組和聯(lián)合組治療7、14 d時MDA水平明顯低于入院1 d，入院14 d時明顯低于入院7 d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 4組血清MDA水平比較n=40，nmol/ml，±s

表2 4組血清MDA水平比較n=40，nmol/ml，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與丁苯酞組比較，#P ＜0.05;與依達(dá)拉奉組比較，△P ＜0.05;與入院1 d比較，☆P ＜0.05;與入院7 d比較，▲P ＜0.05

時間 對照組 丁苯酞組 依達(dá)拉奉組 聯(lián)合組入院1 d 6.4 ±0.8 6.5 ±0.7 6.4 ±1.0 6.5 ±0.9入院7 d 6.0 ±0.5 5.3 ±0.4＊☆ 5.2 ±0.5＊☆ 4.5 ±0.4*#△☆入院 14 d 5.6 ±0.6☆ 4.6 ±0.5＊☆▲ 4.5 ±0.4＊☆▲ 3.8 ±0.7*#△☆▲

2.2 4組血清SOD活性比較 4組入院1 d時SOD活性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，入院7、14 d時MOD活性丁苯酞組、依達(dá)拉奉組和聯(lián)合組明顯高于對照組(P＜0.05)，聯(lián)合組入院7、14 d時MOD活性顯著高于丁苯酞組和依達(dá)拉奉組(P＜0.05)，而丁苯酞組和依達(dá)拉奉組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對照組入院7 d時MOD水平與入院1 d時比較顯著降低(P＜0.05)，而入院14 d時恢復(fù)到入院1 d時的水平。丁苯酞組、依達(dá)拉奉組入院7 d時SOD活性與入院1 d相當(dāng)(P＞0.05)，而聯(lián)合組呈升高趨勢(P＜0.05)。入院14 d時丁苯酞組、依達(dá)拉奉組、聯(lián)合組SOD水平顯著高于入院1、7 d(P＜0.05)。見表3。

表3 4組血清MDA水平比較n=40，U/ml，±s

表3 4組血清MDA水平比較n=40，U/ml，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與丁苯酞組比較，#P ＜0.05;與依達(dá)拉奉組比較，△P ＜0.05;與入院1 d比較，☆P ＜0.05;與入院7 d比較，▲P ＜0.05

時間 對照組 丁苯酞組 依達(dá)拉奉組 聯(lián)合組入院1 d 85±1284±13 82±14 84±11入院7 d 76±10☆ 84±11* 83±12* 95±14*#△☆入院 14 d 83±11▲ 90±11＊☆▲ 91±13＊☆▲ 102±13*#△☆▲

3 討論

急性腦梗死病情與能量障礙、興奮性氨基酸毒性、梗死周圍去極化及炎癥和程序性細(xì)胞凋亡有關(guān)，上述病理機制，相互重疊，相互影響，形成惡性循環(huán)后導(dǎo)致病情進(jìn)一步惡化。因此在急性期腦梗死患者，應(yīng)盡早保護(hù)缺血區(qū)域微血管的完整性、減少缺血性再灌注損傷，促進(jìn)側(cè)支循環(huán)的建立和微血管的新生，同時進(jìn)行腦保護(hù)，應(yīng)挽救缺血半暗帶，保護(hù)神經(jīng)元，盡可能的減小梗死面積［6］。保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的完整，維持能量供應(yīng)，增強半暗帶區(qū)域細(xì)胞對缺氧條件的耐受力，可以保證腦細(xì)胞的存活。

研究表明，MDA和SOD參與了急性期腦梗死的發(fā)生發(fā)展，且二者呈負(fù)相關(guān)，同時發(fā)現(xiàn)MDA水平和SOD活性與梗死灶的面積有關(guān)［7］。急性期腦梗死患者由于缺血缺氧，導(dǎo)致線粒體損傷，ATP產(chǎn)生減少，造成細(xì)胞功能障礙(神經(jīng)信號傳導(dǎo)障礙、營養(yǎng)神經(jīng)功能障礙和修復(fù)、吞噬功能障礙)，自由基產(chǎn)生增多，細(xì)胞膜發(fā)生損傷，同時細(xì)胞色素C釋放導(dǎo)致Cospose激活，從而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡。丁苯酞為消旋-3-正丁基苯酞，結(jié)構(gòu)與天然的1-3-正丁基苯酞相同。研究表明:丁苯酞具有重構(gòu)微循環(huán)和保護(hù)線粒體的雙重作用，可以保護(hù)血管結(jié)構(gòu)完整，恢復(fù)血管管徑、增加缺血半暗帶區(qū)域血流量，促進(jìn)側(cè)支循環(huán)開放，同時還能夠提高線粒體酶的活性，維持線粒體膜的穩(wěn)定性，保護(hù)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能從而增加缺血半暗帶和梗死區(qū)域血流灌注，維持能量代謝減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡［8，9］。Li等［10］研究發(fā)現(xiàn)，丁苯酞具有減少血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體活性氧的生成、細(xì)胞損傷和減輕細(xì)胞形態(tài)改變的作用。依達(dá)拉奉在體內(nèi)以依達(dá)拉奉陰離子(多帶有1個電子的負(fù)電荷)的形態(tài)存在，與腦缺血再灌注時缺血灶內(nèi)產(chǎn)生的羥自由基等自由基發(fā)生反應(yīng)。此間，依達(dá)拉奉將帶有的1個電子提供給自由基一側(cè)而達(dá)到清除自由基并使其無害的目的［11］。鄭慧芬等［12］通過對33例急性腦梗死患者應(yīng)用依達(dá)拉奉進(jìn)行治療發(fā)現(xiàn)，其可以降低急性腦梗死患者M(jìn)DA水平，提高SOD活性，并能顯著改善患者神經(jīng)缺損功能和日常生活能力。本研究發(fā)現(xiàn)急性期腦梗死患者應(yīng)用丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達(dá)拉奉進(jìn)行治療，可以顯著提高血清SOD活性，降低MDA水平。

綜上所述，丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達(dá)拉奉治療急性腦梗死，可以顯著降低血清MDA水平，提高SOD活性，對減少腦細(xì)胞損傷，維持腦細(xì)胞活性和正常功能，清除氧化自由基和有害物質(zhì)有重要作用。

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11 曾建.依達(dá)拉奉/環(huán)湖精超分子體研究.南京師范大學(xué)，2011.

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