宋曉明?。ㄉ綎|省乳山市午極鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站　264503）孫海芳?。ㄉ綎|省獸醫(yī)診斷試劑工程技術(shù)研究中心　山東 青島）孫旭東?。ㄉ綎|省威海市環(huán)翠區(qū)溫泉畜牧獸醫(yī)中心站）　南慧靜?。ㄉ綎|省高唐縣畜牧水產(chǎn)局）

文獻(xiàn)綜述

蜂膠作為動物疫苗佐劑的研究及應(yīng)用

宋曉明（山東省乳山市午極鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站264503）
孫海芳（山東省獸醫(yī)診斷試劑工程技術(shù)研究中心山東 青島）
孫旭東（山東省威海市環(huán)翠區(qū)溫泉畜牧獸醫(yī)中心站）南慧靜（山東省高唐縣畜牧水產(chǎn)局）

蜂膠（Propolis）是一種具有芳香氣味的膠狀固體物，由蜜蜂從樹干或植物芽孢上采集樹脂（樹膠）后，與其上腭腺、蠟腺自身分泌的的分泌物混合加工而成。其內(nèi)含有豐富的生物活性物質(zhì)，具有多種生物學(xué)特性，兼具廣譜抗病毒、抗細(xì)菌、抗霉菌、消炎、止癢、增強免疫、抗氧化、降血糖、降血脂等多種功能，廣泛應(yīng)用于人類的醫(yī)療、保健行業(yè)，作為新興的保健品也倍受推崇，現(xiàn)已成為各國科學(xué)研究的熱點［1］。蜂膠用作疫苗佐劑優(yōu)勢明顯，獲得了良好效果，迅速成為了當(dāng)前佐劑開發(fā)熱潮中的佼佼者，被廣泛應(yīng)用于動物疫苗領(lǐng)域，并顯示出巨大的市場潛力和誘人的開發(fā)前景［2］。本文概述了蜂膠佐劑的免疫機制，以及在動物疫苗開發(fā)中的研究與應(yīng)用。

1　蜂膠疫苗的免疫機制研究

（1）蜂膠用作疫苗佐劑可兼具抗原“倉庫”和免疫刺激復(fù)合物作用，這是因為蜂膠顆粒與病原粒子之間相互交聯(lián)，形成類免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）結(jié)構(gòu)。既可有效保護(hù)蜂膠顆粒與病原粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)不被破壞，又可使蜂膠與病原粒子各自被機體吸收后可繼續(xù)發(fā)揮功效，這一穩(wěn)定的ISCOM結(jié)構(gòu)使蜂膠佐劑疫苗具有高效、持久的特點，同時疫苗中少量游離的病原粒子和蜂膠顆?？纱碳C體在接種后迅速產(chǎn)生免疫應(yīng)答，由此決定了應(yīng)用蜂膠佐劑疫苗后能快速產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)力［2,3］。（2）沈志強等［1］認(rèn)為蜂膠對機體免疫系統(tǒng)具有廣泛的刺激作用，在增強機體體液免疫功能的同時對細(xì)胞免疫功能也有較強的刺激作用，可有效促進(jìn)胸腺、脾臟等免疫器官的功能，使機體各免疫系統(tǒng)的功能得以充分發(fā)揮，另外，在促進(jìn)抗體的生成、增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力和自然殺傷性細(xì)胞的活性等方面作用也極為顯著。研究結(jié)果證明，蜂膠是優(yōu)良的免疫佐劑，其所含有的許多酶類、醇類、脂類和酸類物質(zhì)都具有廣泛的免疫效應(yīng)，正是這些生物活性物質(zhì)使機體的免疫防疫系統(tǒng)全面啟動，有效刺激了集體體液免疫系統(tǒng)、細(xì)胞免疫系統(tǒng)、巨噬細(xì)胞補體免疫系統(tǒng)和紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)等的協(xié)調(diào)啟動，達(dá)到了增強機體免疫反應(yīng)、激活與保護(hù)免疫器官的功效，從而使機體產(chǎn)生了高效的特異性和非特異性免疫力［4］。（3）柴家前等［5］用電子顯微鏡對蜂膠疫苗的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠顆粒是許多大小不等的圓形顆粒，平均直徑為100～200nm，其周圍吸附有大量抗原粒子，蜂膠顆粒之間也相互吸附，使蜂膠顆粒與抗原之間形成“抗原-蜂膠顆粒-抗原-蜂膠顆粒-抗原”的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)或不規(guī)則的聚集狀結(jié)構(gòu)，同時含有少量游離的抗原粒子（約占總抗原的15%）。蜂膠疫苗的這種獨特超微結(jié)構(gòu)使蜂膠疫苗的穩(wěn)定性超強，既可耐冷又可耐熱，具有易儲存且儲存期長的特點，可低溫或高溫保存；獨特超微結(jié)構(gòu)也使蜂膠疫苗微粒在動物體內(nèi)的釋放較為緩慢，從而起到了延長動物體內(nèi)抗體存在時間、延長疫苗免疫保護(hù)期的作用。

2　蜂膠佐劑在動物疫苗的研究及應(yīng)用

據(jù)現(xiàn)代生物學(xué)不完全統(tǒng)計，蜂膠中含有生物體生存所必需的34種化學(xué)元素，另外，蜂膠中還包含70余種黃酮類化合物及多種萜類化合物，含有組氨酸、賴氨酸、纈氨酸等微量氨基酸及維生素B1（硫胺素）、煙酸、泛酸、維生素B2（核黃素）維生素B3等B族維生素，此外，還含有豐富的鈣、磷、鉀等礦物質(zhì)和鋅、硒、錳、鈷等微量元素，這些復(fù)雜的化學(xué)成分，決定了蜂膠有消炎、抗菌、抗病毒、促進(jìn)組織再生和增強機體免疫力等多種生物學(xué)作用。

2.1禽用疫苗（1）沈志強等［6］以蜂膠為佐劑研制的禽霍亂蜂膠菌苗7d后可產(chǎn)生堅強的免疫保護(hù)力，可維持6個月的有效保護(hù)期，保護(hù)期間保護(hù)率近100%。蜂膠作為疫苗佐劑，可有效調(diào)動機體的免疫防護(hù)系統(tǒng)，并全面刺激機體免疫器官發(fā)育。程超等將蜂膠乙醇提取物（EEP）用作佐劑制備雞減蛋綜合征（EDS-76）疫苗，用該疫苗接種雛雞，研究其對雛雞血液中T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞比例的影響，發(fā)現(xiàn)免疫過EEP佐劑的EDS-76疫苗后，雛雞血液中T淋巴細(xì)胞的比例顯著增加。邱昌慶等［7］用3批蜂膠作為佐劑的EDS滅活苗分別免疫成年產(chǎn)蛋母雞后，定期檢測免疫后母雞體內(nèi)HI抗體的動態(tài)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EDS蜂膠苗與EDS油苗的免疫期相當(dāng)。趙恒章等［8］用地方性雞大腸桿菌為菌種制備多價蜂膠滅活苗，并將其應(yīng)用于實踐，結(jié)果顯示，接種本蜂膠佐劑滅活苗后動物產(chǎn)生抗體較早，并且可維持較為理想免疫保護(hù)期。歐陽素貞等［9］以大腸桿菌為菌種，以蜂膠為佐劑研制大腸桿菌多價蜂膠苗，用其免疫肉仔雞，跟蹤研究其對肉仔雞的免疫效果，結(jié)果證實免疫過該蜂膠佐劑滅活疫苗的肉仔雞對大腸桿菌病的免疫效果確實，獲得了較為滿意的免疫效果。沈志強等［10］以禽致病性大腸桿菌常見血清型O1/O154、O2/O66、O18、O78、O8/O93及禽多殺性巴氏桿菌強毒株C48-1、C48-2為菌種，以蜂膠為佐劑制備禽霍亂與大腸桿菌病多價蜂膠二聯(lián)蜂膠佐劑滅活疫苗。經(jīng)動物試驗證實該疫苗安全且免疫效果可靠，二者之間無明顯的干擾現(xiàn)象，免疫后5～7d即可產(chǎn)生高水平的免疫保護(hù)力。短期內(nèi)對雞大腸桿菌病和禽霍亂的保護(hù)率均達(dá)到100%。（2）李琳等［11］以蜂膠為佐劑按比例加入小鵝瘟（GP）病毒滅活液制備小鵝瘟蜂膠佐劑滅活苗，制苗后合并油乳劑滅活苗進(jìn)行應(yīng)用試驗，與油乳劑滅活苗進(jìn)行疫苗效力、安全性、保存期及免疫持續(xù)期對比，結(jié)果表明小鵝瘟蜂膠滅活疫苗不但安全性好，而且第5d即產(chǎn)生有效抗體，有效抗體可維持90d，明顯高于普通油乳劑滅活苗，在免疫效果方面更是遠(yuǎn)遠(yuǎn)勝于普通油乳劑滅活苗。（3）王耀邦等［12］以蜂膠為佐劑，以從患病櫻桃谷鴨群和番鴨群中分離到的鴨疫里氏桿菌（RA）Z-3和W-4株為菌種，研制鴨疫里氏桿菌蜂膠佐劑滅活苗，接種6日齡雛鴨，10d后用相應(yīng)的2株強毒進(jìn)行攻擊，可使雛鴨獲得80%以上的免疫保護(hù)率，應(yīng)用于臨床后其免疫保護(hù)率也均在92%以上，蜂膠疫苗于4℃保存半年后，依舊保持均勻穩(wěn)定的物理性狀。陳潔等［13］利用某肉鴨場分離的I型鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer，RA）菌株研制了蜂膠佐劑滅活疫苗，接種5日齡雛鴨后表現(xiàn)出了良好的安全性及免疫保護(hù)力。4倍劑量注射仍未引起雛鴨接種反應(yīng)，單次免疫雛鴨后分別于3d、7d、10d、14d和21d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗，結(jié)果該蜂膠佐劑滅活苗對雛鴨的平均保護(hù)率達(dá)84%。（4）鄒永新等［14］以蜂膠為佐劑，以篩選出的3株免疫原性良好的鴿禽I型副粘病毒（A/PMV-1）毒株作為種毒，研制成蜂膠佐劑混合毒株滅活疫苗，進(jìn)行安全試驗、效力試驗后證實其使用安全、抗原性良好。田間應(yīng)用后證實其免疫保護(hù)效果確實，4～8℃條件下保存，至少可保存半年。

2.2豬用疫苗竇蘭清等［15］將蜂膠佐劑應(yīng)用于豬旋毛蟲病的防治，發(fā)現(xiàn)蜂膠作為佐劑可顯著提升動物機體的細(xì)胞免疫水平，獲得了滿意的保護(hù)效果。李鵬等［16］以仔豬水腫病致病株O138、O139、O141及地方流行菌株作為菌種、以蜂膠為佐劑研制疫苗，免疫小鼠及仔豬后攻毒發(fā)現(xiàn)，免疫組全部健活，保護(hù)率達(dá)100%。趙恒章等［17］從發(fā)病豬場分離出支氣管敗血波氏桿菌和巴氏桿菌制成蜂膠苗，使該豬場的豬傳染性萎縮性鼻炎得到有效控。陳希文等［18］以豬致病性大腸桿菌綿陽分離株為菌種，分別制備蜂膠滅活苗、鋁膠滅活苗和油乳劑滅活苗，三種疫苗分別免疫小鼠后，對比小鼠體內(nèi)的特異性抗體水平及抗體的消長規(guī)律，發(fā)現(xiàn)相比于鋁膠滅活苗及油乳劑滅活苗，小鼠免疫蜂膠苗后第3天即有明顯抗體產(chǎn)生，第56天時其體內(nèi)的抗體仍維持較高水平，蜂膠佐劑苗具有產(chǎn)生抗體速度快、免疫持續(xù)時間長等優(yōu)點。馬霞等［19］通過對比蜂膠佐劑、油乳劑及鋁膠佐劑對豬細(xì)小病毒滅活疲苗免疫保護(hù)的影響，發(fā)現(xiàn)與傳統(tǒng)油乳劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗相比，蜂膠佐劑疫苗在降低豬細(xì)小病毒對免疫豚鼠免疫機能的損害、增加疫苗的免疫保護(hù)水平方面所起的作用更為顯著。

2.3反芻動物用疫苗羅金印等［20］用4種不同佐劑的乳牛乳隙炎多聯(lián)疫苗進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗，4種佐劑疫苗分別免疫乳牛后，結(jié)果證實蜂膠疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于其他3種佐劑的疫苗。邵洪澤等［21］以蜂膠為佐劑，按比例加入牛病毒性腹瀉、牛傳染性鼻氣管炎地方毒株，制成二聯(lián)多價蜂膠滅活苗，進(jìn)行中間試驗、攻毒試驗等檢驗，表明該蜂膠滅活苗對牛具有良好的保護(hù)效力。

2.4兔用疫苗楊增歧等分別用兔瘟組織滅活苗與蜂膠佐劑的兔瘟滅活苗免疫家兔，對比兩種疫苗的免疫效果，結(jié)果顯示：蜂膠佐劑滅活苗的免疫效果明顯優(yōu)于組織滅活苗。又據(jù)報道，用淫羊藿總黃酮和蜂膠初提物研制出的淫羊藿-蜂膠佐劑（Epimediumpropolisadjuvant，EPA）與疫苗配合后使用，可顯著提高動物機體免疫力水平。向會耀等［22］選用菌株O2、O78及O157菌株，研制多價大腸桿菌蜂膠佐劑滅活苗和氫氧化鋁膠苗，比較兩種苗對E.coli的免疫原性大小，結(jié)果顯示蜂膠佐劑苗對同血清型菌株的攻擊具有良好的保護(hù)作用。

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中圖分類號：S896.6

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1007-1733（2015）03-0057-03

收稿日期：（2015–01–08）