徐培培　馬　強

（1江蘇省如東縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心　226400；2蘇州大學(xué)衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所）

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使用高效液相色譜儀檢測蔬菜農(nóng)藥殘留的幾點體會

徐培培1馬強2

（1江蘇省如東縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心226400；2蘇州大學(xué)衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所）

本文主要從農(nóng)產(chǎn)品的前處理、使用器皿、流動相及色譜使用前的預(yù)處理等幾個方面介紹高效液相色譜儀的正確使用和日常維護。

高效液相色譜儀；農(nóng)產(chǎn)品；正確使用；日常維護

高效液相色譜儀是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應(yīng)用越來越廣泛。在使用過程中，若使用方法不當(dāng)會導(dǎo)致分析數(shù)據(jù)錯誤，直接影響所測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全現(xiàn)在越來越受到廣大消費者的重視，本文主要介紹在使用高效液相色譜儀測定農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留時，前處理需要注意的事項。

1　農(nóng)產(chǎn)品的前處理環(huán)節(jié)

檢測時需稱取樣品25.00g。新鮮剛粉粹的樣品可直接稱??；解凍后的樣品，在稱取時應(yīng)先混勻解凍液和解凍物再稱取。加入乙腈進(jìn)行勻漿的過程，每次勻漿完1個樣品應(yīng)徹底清洗勻漿機，勻漿的時間和頻率一定要按標(biāo)準(zhǔn)操作。加鹽過濾后，1批樣品需同時搖勻和靜置，保證搖勻次數(shù)和靜置時間一樣，確保平行性。靜置后吸取定量溶液置于燒杯中，可以進(jìn)行蒸干或風(fēng)干。蒸干時應(yīng)確保有1～2滴溶液的狀態(tài)，避免完全蒸干，否則會損失農(nóng)藥殘留的量。蒸干操作不熟練，可采用風(fēng)干方法。在過凈化柱的環(huán)節(jié)，應(yīng)先清洗凈化柱，操作過程中應(yīng)確保凈化柱的海綿部分不能過干，要使溶液與海綿上部分相切。甲醇定容環(huán)節(jié)，應(yīng)采用少量多次方法用甲醇清洗燒杯進(jìn)行定容，以確保農(nóng)藥殘留量不會損失。

2　儀器使用時對環(huán)境的要求

使用高效液相色譜儀時，控制環(huán)境溫度在4～35℃，操作期間應(yīng)盡量降低溫度變化幅度，防止形成露珠；環(huán)境相對濕度保持45%～85%；保證通風(fēng)良好，沒有酸性或堿性氣體，沒有溶劑蒸汽。儀器不可直接暴露在陽光下，保持環(huán)境整潔，避免強烈振動和晃動。

3　使用器皿的選擇及清洗

高效液相色譜儀對環(huán)境條件特別敏感，實驗器具應(yīng)保持潔凈，否則影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有些樣品會在試管壁、燒杯壁吸附殘留，每次使用的燒杯、試管都應(yīng)進(jìn)行超聲清洗，后用蒸餾水清洗、烘干。測定標(biāo)準(zhǔn)樣品，濃度較高，進(jìn)樣針最好專針專用，每次用完后用甲醇進(jìn)行浸泡、清洗。

4　色譜分析前的準(zhǔn)備工作

采用高效液相色譜分析法，最常用紫外檢測器，因此所用溶劑的吸光度要非常小，可使用甲醇、乙醇、乙腈等。有機溶劑空氣含量高，在未使用失效的流動相時，應(yīng)盡量除去溶解在流動相中的氣體，否則基線會因為氣泡干擾、單向閥的故障、柱效降低而產(chǎn)生波動。分析前，重視色譜柱的預(yù)處理和平衡過程。實驗前，首先用純甲醇進(jìn)行排氣、沖洗色譜柱和管路30min左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用所需流動相進(jìn)行足夠時間的平衡，大約1h。在色譜柱平衡30min時打開檢測器，平衡近1h時打開色譜工作站，點擊查看基線是否走平直，基線走平直后方可進(jìn)行分析檢測，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和保留時間的重復(fù)性。調(diào)流速時，要按小梯度向上調(diào)節(jié)，緩慢進(jìn)行，直至調(diào)到所需流速。分析前的流動相脫氣、色譜管路及泵內(nèi)排氣非常重要，否則在實驗過程中就會造成檢測器噪聲加大、泵的流速不穩(wěn)、壓來回波動很大、降低柱效、檢測器采集的圖像基線很難穩(wěn)定和走直、出現(xiàn)基線漂移和波動、色譜峰面積不重現(xiàn)，最終影響峰面積的讀取。

5　色譜分析過程中操作進(jìn)樣

手動進(jìn)樣，樣品要通過0.45um的過濾器進(jìn)行過濾，除去樣品中外來的物質(zhì)和灰塵。若樣品杯中有上次進(jìn)樣時的樣品殘留，應(yīng)先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次，然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置，再以流動相清洗幾次，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里。按照上述步驟操作，可避免由進(jìn)樣閥引起的污染，從而消除干擾峰并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

6　數(shù)據(jù)和圖像結(jié)果分析

色譜工作站的積分設(shè)置方式有兩種：一種是自動積分，一種是手動積分。要將兩者積分方法有效結(jié)合使用。

7　高效液相色譜議的日常維護

色譜分析結(jié)束后，應(yīng)及時清洗色譜柱。用純甲醇溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來，清理30min以上，色譜柱中不可進(jìn)入含有微粒的樣品。高壓泵在有氣泡時，功能正常，在更換試劑瓶或給瓶中添加溶劑時必須停泵。若不經(jīng)常使用色譜儀，也應(yīng)定期清洗色譜柱，每月清理1次，每次30min以上。每4個月用超聲波清洗機清洗溶劑過濾器。

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