余鵬等

摘要 于2014年在安徽省青陽縣進(jìn)行了大口黑鱸人工提早繁殖的研究，并對(duì)其胚胎發(fā)育整個(gè)過程進(jìn)行觀察和記錄，結(jié)果表明：2012年12月，將1齡的大口黑鱸從廣東省運(yùn)至安徽省青陽縣，專塘培養(yǎng)至2013年12月，轉(zhuǎn)至溫室大棚培育至翌年4月初，成熟率達(dá)80%；性腺成熟的親魚經(jīng)催產(chǎn)，平均產(chǎn)卵率達(dá)78%，受精率達(dá)85%，孵化率達(dá)68%。大口黑鱸胚胎發(fā)育從受精卵到孵化出膜可分為20個(gè)時(shí)期，在水溫18.6～20.6 ℃條件下，胚胎發(fā)育共歷時(shí)58 h 20 min，發(fā)育總積溫為1 207.50 h·℃。

關(guān)鍵詞 大口黑鱸；人工提早繁殖；胚胎發(fā)育；觀察；安徽省

中圖分類號(hào) S917 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）01-0272-02

大口黑鱸（Micropterus salmoides）也稱加州鱸，屬鱸形目、太陽魚科、鱸魚屬，原產(chǎn)于美國加利福尼亞州[1]。我國臺(tái)灣省于20世紀(jì)70年代引進(jìn)，并于1983年人工繁殖獲得成功[2]，同年大口黑鱸進(jìn)入廣東省，隨后逐漸向江蘇、山東、浙江、安徽和湖北等地引進(jìn)。經(jīng)過30余年的發(fā)展，大口黑鱸己成為國內(nèi)重要的淡水養(yǎng)殖品種之一[3]，具有廣闊的市場前景[4]。目前，對(duì)大口黑鱸的疾病預(yù)防[5]、飼料營養(yǎng)需求[6]、微衛(wèi)星[7]及遺傳多樣性[8]等方面有很多研究。

青陽縣（皖江特種養(yǎng)殖有限公司）有安徽省最大的大口黑鱸養(yǎng)殖基地，養(yǎng)殖水面313.33 hm2，年產(chǎn)量約3 500 t，產(chǎn)值近1億元。目前，安徽省大口黑鱸的苗種一直依賴從廣東購進(jìn)，沒有開展人工繁殖，從而抑制了安徽地區(qū)大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此，為突破早繁的瓶頸，從廣東省引進(jìn)大口黑鱸親本，在安徽省進(jìn)行強(qiáng)化培育，建立溫室大棚，提早繁殖，采用人工催產(chǎn)、自然受精孵化、鹵蟲開口等技術(shù)措施，初步取得成功。

1 材料與方法

1.1 親魚培育與選擇

2012年12月從廣東省購買當(dāng)年大口黑鱸商品魚，在安徽省養(yǎng)殖基地池塘內(nèi)培育至2013年12月，然后轉(zhuǎn)入透光溫室大棚內(nèi)，雌雄分池培育，池中放養(yǎng)花白鰱餌料魚，并適當(dāng)投喂冰鮮魚。

2014年3月底至4月初，挑選肥滿度好、個(gè)體大、體型佳、體色鮮亮、無傷病的的成熟親本進(jìn)行人工催產(chǎn)。繁殖季節(jié)成熟的雌魚體形較粗短，體色較淡，鰓蓋部光滑，胸鰭呈圓形，腹部膨大，卵巢輪廓明顯，腹部柔軟，生殖孔稍凸，產(chǎn)卵期呈紅潤狀，上有2個(gè)孔，前、后分別為輸卵管和輸尿管開口；雄魚較狹長，體色較深，鰓蓋部略粗糙，胸鰭較狹長，雄魚生殖孔凹陷，只有1個(gè)孔，輕壓腹部有乳白色精液流出，且精液入水即散開為好。

1.2 催產(chǎn)與受精

采用一針注射法，用激素LRH-A2、HCG和DOM 3種激素組合對(duì)大口黑鱸胸鰭基部進(jìn)行注射。注射劑量：1 kg雌魚注射5 mg DOM+5 μg LRH-A2+1 500 IU HCG，雄魚劑量減半。LRH-A2、HCG和DOM均由寧波市三生有限公司生產(chǎn)。親魚注射后，放入池塘中，在池邊水深30 cm左右處安放沸水浸泡過的柳樹根和棕櫚片制作的魚巢。

1.3 孵化

將受精卵連同柳樹根、棕櫚一起帶水移至直徑為3 m、水深0.6 m的孵化池內(nèi)，流水充氧孵化。每天在魚巢周邊潑灑亞甲基藍(lán)防治水霉。

1.4 觀察與取樣

親魚發(fā)情時(shí)，會(huì)在水面游動(dòng)，濺起水花；親魚尾鰭露出水面并不斷擺動(dòng)，身體傾斜，頭部朝下，此時(shí)守候在池邊，定時(shí)查看各柳樹根和棕櫚上有無受精卵。發(fā)現(xiàn)受精卵后，立即取部分卵于培養(yǎng)皿中，并在顯微鏡底下連續(xù)觀察。觀察時(shí)，用顯微鏡自帶軟件Motic Plus 2.0和佳能1 600萬像素?cái)?shù)碼相機(jī)通過目鏡進(jìn)行拍照。以樣本中60%胚胎發(fā)育到某個(gè)時(shí)期的時(shí)間作為該時(shí)期的發(fā)育時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工繁殖情況

在青陽縣共催產(chǎn)3次，催產(chǎn)時(shí)親魚平均成熟率達(dá)80%，平均產(chǎn)卵率達(dá)78%，平均受精率85%，平均孵化率68%。第1批繁殖獲得魚苗50萬尾，第2批獲得魚苗190萬尾，第3批出苗65萬尾。3次催產(chǎn)的具體效果見表1。

2.2 胚胎發(fā)育觀察

2.2.1 胚胎發(fā)育時(shí)序。大口黑鱸胚胎發(fā)育整個(gè)過程可劃分為25個(gè)時(shí)期，在水溫為18.6～20.6 ℃條件下，歷時(shí)約58 h 20 min，胚胎發(fā)育總積溫為1 207.50 h·℃。從受精卵到出膜各個(gè)發(fā)育時(shí)期的時(shí)序及特征見表2。

2.2.2 胚胎發(fā)育過程中的外部形態(tài)特征。受精卵胚盤形成期：受精卵大口黑鱸受精卵呈圓球形，為淡黃色、半透明黏性卵，內(nèi)有橙黃色油球1個(gè)。卵徑1.1～1.3 mm，吸水后1.2～1.5 mm。受精時(shí)，卵子由于精子的進(jìn)入而激活，此時(shí)，原生質(zhì)向動(dòng)物極集中，受精40 min左右時(shí)，原生質(zhì)形成丘狀隆起，即為胚盤（圖1a）。

卵裂期：受精后1 h，胚盤第1次分裂成大小相等的2個(gè)細(xì)胞，此為2細(xì)胞期（圖1b）；第2次分裂，與第1次垂直分裂成大小相等的4個(gè)細(xì)胞，此為4細(xì)胞期（圖1c）；第3次分裂成2行4列，為8細(xì)胞期（圖1d）；第4次分裂成4行4列，為16細(xì)胞期（圖1e）；第5次分裂成32細(xì)胞期（圖1f），后分裂細(xì)胞越來越小，距受精4 h 30 min，細(xì)胞團(tuán)隆起呈桑葚狀，形成桑椹胚（圖1g）。

囊胚期：受精5 h 10 min時(shí)，細(xì)胞界限模糊不清，在卵黃上方形成高的隆起，胚胎進(jìn)入囊胚早期階段（圖1h）；接著細(xì)胞界限消失，囊胚高度降低，進(jìn)入囊胚中期（圖1i）；囊胚表面形似彎月向卵黃部分下包，此為囊胚晚期（圖1j）。

原腸胚期：受精13 h時(shí)，胚層下包約1/2時(shí)，出現(xiàn)胚環(huán)，此為原腸早期（圖1k）；胚層繼續(xù)下包超過1/2時(shí)，出現(xiàn)胚盾，此為原腸中期（圖1l）；胚層下包至3/4時(shí)，進(jìn)入原腸晚期（圖1m）。

神經(jīng)胚期：受精21 h 50 min，胚層下包約4/5時(shí)，神經(jīng)板形成，胚體側(cè)臥，進(jìn)入神經(jīng)胚期階段（圖1n）。神經(jīng)胚期外觀上只能觀察到胚體不斷伸長，實(shí)質(zhì)上，胚體內(nèi)部神經(jīng)外胚層逐漸形成神經(jīng)管，神經(jīng)管后分化為腦及脊髓的原基，再進(jìn)一步分化形成各種神經(jīng)器官原基。

胚孔封閉期：受精22 h 10 min后，胚層完全包圍卵黃囊，胚孔關(guān)閉，神經(jīng)板中線略下凹，為胚孔封閉期（圖1o）。

器官形成期：受精27 h 30 min后，在胚體中部出現(xiàn)2對(duì)體節(jié)，神經(jīng)板頭端隆起，進(jìn)入體節(jié)出現(xiàn)期（圖1p）；后在前腦兩側(cè)，出現(xiàn)1對(duì)腎形的突起，即眼原基，此時(shí)為基眼期。1 h后，胚體前段兩側(cè)出現(xiàn)長橢圓形的眼囊，腦分為原始的前、中、后3個(gè)部分。受精34 h 30 min后，隨著尾部的不斷延伸，尾部呈圓形，眼睛開始變圓，為尾芽期。受精36 h 30 min，在眼杯口出現(xiàn)圓形的晶體，腦部分化明顯，為晶體出現(xiàn)期。隨后，胚胎開始出現(xiàn)微弱的肌肉收縮，第四腦室出現(xiàn)，晶體很清楚，為肌肉效應(yīng)期。受精41 h 30 min后，在眼后下方出現(xiàn)橢圓形的圍心腔，腔內(nèi)有數(shù)個(gè)串狀細(xì)胞，為心臟原基，此時(shí)期為心臟出現(xiàn)期。后心臟逐漸變成管狀，分為心房、心室，開始做輕微的搏動(dòng)，不規(guī)律，時(shí)快時(shí)慢，稍后心跳開始加快，進(jìn)入心跳期（圖1q）。

出膜期：受精58 h 20 min后，胚胎利用尾部的擺動(dòng)，頭部沖破卵膜，開始出膜（圖1r），出膜時(shí)仔魚全長4.5 mm。

3 討論

3.1 大口黑鱸適應(yīng)性廣

大口黑鱸耐低氧能力強(qiáng)[9]，在拉網(wǎng)過程中，皮膚及鰭條均未出現(xiàn)類似花白鰱在捕撈過程中出現(xiàn)的充血現(xiàn)象，且整個(gè)催產(chǎn)過程應(yīng)激反應(yīng)小，表現(xiàn)出很強(qiáng)的適應(yīng)能力。

3.2 安徽地區(qū)早繁要點(diǎn)

安徽地區(qū)較大口黑鱸主產(chǎn)區(qū)的廣東省溫度低，為提高競爭能力需要開展早繁，試驗(yàn)中，親魚培育池上建有塑料保溫透光大棚，配備微孔增氧機(jī)[10]，解決了溶氧問題。大口黑鱸在水溫10 ℃以上開始攝食，但考慮到部分時(shí)段白天溫度接近10 ℃，因此12月在親魚放入塑料大棚前，向大棚內(nèi)投放充足的花白鰱餌料魚，以供親魚攝食；當(dāng)水溫達(dá)到10 ℃以上時(shí)，開始投喂冰鮮魚，并向冰鮮魚中加入適量VC，以提高親魚體質(zhì)[11]。人工催產(chǎn)前，將雌雄魚分開培育14 d以上[12]。采用LRH-A2、HCG和DOM 3種激素混合催產(chǎn)效果良好。早期孵化時(shí)水溫較低，容易感染水霉，需使用亞甲基藍(lán)或食鹽水進(jìn)行預(yù)防處理[13-14]。

3.3 胚胎發(fā)育觀察

經(jīng)觀察，大口黑鱸受精卵為半透明黏性卵，這與劉文生等[15]的研究一致，這種受精卵在胚胎發(fā)育過程中，難以用相機(jī)記錄全部時(shí)期的特點(diǎn)，也許可以嘗試用胰蛋白酶將受精卵細(xì)胞膜去除，以便更清楚地觀察。

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