盧光菊等

摘要 建立了高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定飼料中喹乙醇含量的不確定度評(píng)定的數(shù)學(xué)模型，探討了測(cè)量過(guò)程中不確定度的主要來(lái)源及評(píng)定方法。求得喹乙醇含量為3.58 mg/kg時(shí)，擴(kuò)展不確定度為0.32 mg/kg（k=2）。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜法；飼料；喹乙醇；不確定度；評(píng)定

中圖分類號(hào) Q657.7+2；S816.17 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）01-0268-02

Abstract Amathematical mode of uncertainty evaluation of olaquindox content measurement in feed by High Performance Liquid Chromatography was established.The main source of uncertainty and evaluation method in the process of measuring were discussed.Results showed that，expanded uncertainty was 0.32 mg/kg（k=2）when olaquindox content was 3.58 mg/kg.

Key words HPLC；feed；olaquindox；uncertainty；evaluation

測(cè)量不確定度在測(cè)量結(jié)果臨界值的判斷、檢測(cè)方法的確認(rèn)和實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等方面具有重要意義[1]，近年來(lái)，在檢測(cè)分析領(lǐng)域日益受到關(guān)注，尤其是通過(guò)國(guó)家認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室，明確要求應(yīng)有應(yīng)用測(cè)量不確定度的程序。不確定度來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品稱樣量、提取液總體積、取出的提取液體積、定容體積、對(duì)照品和樣品峰面積、樣品前處理過(guò)程以及樣品重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度。根據(jù)《JJF1059—1999測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[2]及《CNAS-GL06：2006化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[3]，以《GB/T8381.7—2009飼料中喹乙醇的測(cè)定-高效液相色譜法》[4]為例，探討了該方法不確定度的來(lái)源、不確定度分量的合成以及結(jié)果表述方法，僅供同行參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

試驗(yàn)用儀器主要有高效液相色譜儀（2695，Waters）；HLB固相萃取柱（30 mg，1 mL）；離心機(jī)（CF16RX，日立）；電子天平（PB602-N、XP205，METTLER）。試驗(yàn)用試劑主要有99.0%喹乙醇對(duì)照品；Dr.Ehrenstorfer；試驗(yàn)用甲醇為色譜純，鹽酸為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

稱取5 g試樣于具塞錐形瓶中，加入50 mL的甲醇+水（比例為5%+95%），室溫下避光振蕩45 min。提取液在3 500 r/min下離心10 min，上清液經(jīng)濾紙過(guò)濾，收集濾液。固相萃取柱依次用2 mL甲醇和2 mL水活化。準(zhǔn)確吸取2 mL濾液加入預(yù)先活化好的HLB固相萃取柱，待樣液完全流出后，依次用0.02 mol/L的HCl 2 mL、0.1 mol/L的HCl 2 mL和2 mL的甲醇+水（比例為5%+95%）淋洗，吹干小柱，用2 mL甲醇+水（比例為40%+60%）洗脫，定容至2 mL，過(guò)膜上機(jī)測(cè)定[5-7]。

式中，X為樣品中喹乙醇的含量（mg/kg）；Ai為樣品中喹乙醇的峰面積；cs為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/L）；V1為提取液總體積（mL）；V2為取出的提取液體積（mL）；V3為定容體積（mL）；As為標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；m為樣品質(zhì)量（g）； f回為回收率校正因子； f重為重復(fù)性校正因子[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

2.2 樣品稱量引入的不確定度

2.3 提取液總體積、分取體積及定容體積引入的不確定度

樣品提取、定容分別用到了50 mL量筒、0～5 mL移液器和2 mL容量瓶。50 mL量筒的容量允差為0.50 mL，充滿溶液至刻度，重復(fù)10次統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.204 mL，溫度變化區(qū)間為0.031 5 mL。0～5 mL移液器的容量允差為0.5%，重復(fù)性為0.2%，溫度變化區(qū)間為0.001 26 mL。2 mL容量瓶的容量允差為0.025 mL，充滿溶液至刻度，重復(fù)10次統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.023 3 mL，溫度變化區(qū)間為0.001 26 mL。計(jì)算方法同上，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為0.007 08、0.001 60、0.013 7。

2.4 樣品峰面積和對(duì)照品峰面積引入的不確定度

2.5 樣品前處理引入的不確定度

對(duì)空白樣品在添加濃度為1、5、10 mg/kg 3個(gè)濃度范圍內(nèi)分別進(jìn)行4次回收試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

3 結(jié)論與討論

由上述分析結(jié)果可知，標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、方法回收率、樣品重復(fù)測(cè)量和定容體積對(duì)HPLC法測(cè)定飼料中喹乙醇含量的不確定度有較大影響，而樣品和對(duì)照品峰面積、提取液總體積及樣品稱樣量對(duì)HPLC法測(cè)定飼料中喹乙醇含量的不確定度影響較小。因此，應(yīng)針對(duì)影響不確定度的關(guān)鍵因素，采取改進(jìn)措施，以有效降低樣品測(cè)試的不確定度，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和置信度。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 倪育才.實(shí)用測(cè)量不確定度評(píng)定[M].3版.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2010：10-11.

[2] JJF1059-1999測(cè)量不確定度評(píng)定與表示[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1999.

[3] 中國(guó)合格評(píng)定委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2002：142-148.

[4] GB/T8381.7-2009.飼料中喹乙醇的測(cè)定 高效液相色譜法[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

[5] 王永紅，丁平，朱英才.飼料中喹乙醇檢測(cè)方法研究[J].南方農(nóng)業(yè)，2011（5）：55-56.

[6] 陳楓，黃海，陶利明，等.HPLC法測(cè)定飼料中維生素B2的不確定度評(píng)定[J].飼料工業(yè)，2008（17）：47-49.

[7] 張秋萍，丁建森.全自動(dòng)固液相測(cè)汞儀測(cè)定汞的不確定度分析[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2006（12）：47-48.

[8] 高洪，陳蓮，楊建發(fā)，等.喹乙醇致雞中毒后線粒體膜的ATPase活性變化研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007（5）：255-258.