董 萍

（上海新亞藥業(yè)有限公司新先鋒藥廠，上海201203）

0 引言

由于藥品具有特殊性，因此對其進行檢驗方法學的確認是必須的，其可以確保樣品分析的準確性、精密性，使廣大民眾可以放心安全地使用藥品。根據(jù)新版GMP第223條規(guī)定，符合下列情形之一的，應當對檢驗方法進行驗證：（1）采用新的檢驗方法；（2）檢驗方法需變更的；（3）采用《中華人民共和國藥典》及其他法定標準未收載的檢驗方法；（4）法規(guī)規(guī)定的其他需要驗證的檢驗方法。又根據(jù)《中華人民共和國藥典（2010版增補本）》中殘留溶媒測定項的要求，現(xiàn)對本公司生產(chǎn)的頭孢拉定殘留溶媒分析方法進行確認，以證明該分析方法在實驗室條件下的適用性。

《中華人民共和國藥典（2010版增補本）》規(guī)定對殘留溶媒的測定可采用高效氣相色譜法。高效氣相色譜法（GC）以永久性氣體為流動相（通常叫載氣），利用流動相和固定相中的分配系數(shù)的差別，從而在兩相間反復多次分配，使原來分配系數(shù)差別很小的各組分分離開來。氣相色譜法的分析對象多為分子質(zhì)量小于1 000、低沸點、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定性好的化合物。

1 確認實驗所用儀器與試劑/試藥

1.1 實驗所用的主要儀器

氣相色譜儀：7890A，Agilent；頂空進樣器：7697A，Agilent；分析天平：FA1604S，上海天平儀器廠；色譜柱：HP-1（60m×0.53mm×5 μm），Agilent；色譜工作站：Rev.C.01.03，Agilent。

1.2 實驗所用的試劑/試藥

丙酮（分析純）：500m L/瓶，宜興市達華化工有限公司；頭孢拉定（注射用）：原料藥，上海新亞藥業(yè)有限公司。

2 確認的方法

2.1 色譜條件

檢測溫度：250℃；進樣口溫度：200℃；分流比：10:1；空氣流速：400m L/min；氫氣流速：40m L/min；氮氣流速：15 psi（2.2 kPa）；柱溫：80℃；進樣量：1.0 m L；頂空條件：頂空瓶10m L；平衡溫度：80℃；平衡時間30m in；定量環(huán)溫度：100℃；傳輸管溫度：110℃。

2.2 供試品儲備液配制

精密稱取供試品1.0 g置于10m L容量瓶，加內(nèi)標液至刻度，搖勻。

2.3 對照儲備液配制

精密稱取丙酮0.3 g置于50m L容量瓶，加水至刻度，搖勻。

2.4 供試品溶液配置

吸取供試品儲備液3m L置于頂空瓶，密封瓶蓋，搖勻。

2.5 對照品溶液配置

吸取對照品儲備液10m L置于100m L容量瓶中，加水至刻度，再吸取3m L置于頂空瓶中，密封瓶蓋，搖勻。

2.6 殘留溶劑含量的計算

按外標法以峰面積計算殘留溶劑含量：

3 確認內(nèi)容

3.1 確認依據(jù)

《中華人民共和國藥典（2010版增補本）》中關于殘留溶媒測定項的要求。

3.2 專屬性試驗

吸取對照品儲備液10m L置于100m L容量瓶中，加水至刻度，再吸取3m L置頂空瓶中，密封瓶蓋，搖勻。制備對照品儲備液5份，各進樣1針，得到各物質(zhì)峰面積的平均值的RSD（相對標準偏差）、分離度及保留時間。表1為各溶劑的峰面積、RSD、塔板理論數(shù)，圖1～圖5分別為各專屬性色譜圖，并根據(jù)下列公式計算相對標準偏差：

式中S——樣本標準偏差；

x——計算結(jié)果的算術平均值。

式中 n——樣品總數(shù)；

i——物料中某成分的各次測量值。

根據(jù)表1數(shù)據(jù)，各溶劑峰的塔板理論數(shù)均大于5 000，符合驗證要求。

3.3 定量限

以S/N=10計算定量限（其中，S為靈敏度，N為噪聲），依次稀釋對照品儲備液。表2為丙酮定量限。

3.4 回收率

3.4.1 樣品殘留溶劑原有含量

1 g樣品中殘留溶劑的原有含量如表3所示。

3.4.2 重復性試驗

精密移取儲備液8m L置于100m L容量瓶，加水稀釋至刻度，作為溶液1；精密移取儲備液10m L置于100m L容量瓶，加水稀釋至刻度，作為溶液2；精密移取儲備液12m L置于100m L容量瓶，加水稀釋至刻度，作為溶液3。分別取3份樣品，每份1.0 g，分別置于10 m L容量瓶中，分別加入溶液1、溶液2、溶液3至刻度，作為樣品溶液1、樣品溶液2、樣品溶液3，每種樣品溶液吸取3m L置于頂空瓶，搖勻，各進3針。

表1 各溶劑的峰面積、RSD、塔板理論數(shù)

圖1 專屬性色譜圖1

圖2 專屬性色譜圖2

圖3 專屬性色譜圖3

圖4 專屬性色譜圖4

圖5 專屬性色譜圖5

表2 丙酮定量限

表3 1 g樣品中殘留溶劑原有含量

表4為根據(jù)稱量得k平均值，圖6～圖14分別為回收率色譜圖。

根據(jù)下列公式，分別計算各濃度溶液的回收率，并計算RSD值。表5為丙酮回收率。

表4 根據(jù)稱量和峰面積得k平均值

圖6 回收率色譜圖1

圖7 回收率色譜圖2

圖8 回收率色譜圖3

圖9 回收率色譜圖4

圖10 回收率色譜圖5

圖11 回收率色譜圖6

圖12 回收率色譜圖7

圖13 回收率色譜圖8

圖14 回收率色譜圖9

表5 丙酮回收率

3.5 精密度

連續(xù)進樣6針，根據(jù)峰面積求RSD，表6為精密度。

4 結(jié)語

對本公司生產(chǎn)的頭孢拉定殘留溶媒分析方法學的確認結(jié)果匯總?cè)绫?所示。

表6 精密度

表7 確認結(jié)果匯總

從表7可知，以上方法學確認結(jié)果表明該檢測方法準確、可靠，在本實驗室條件下適用于頭孢拉定殘留溶媒的分析。