姜 艷，高 燕，耿秀英，李澤生，李薇莎，姚 春

(云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南瑞麗 678600)

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辣木外植體消毒試驗研究

姜 艷，高 燕*，耿秀英，李澤生，李薇莎，姚 春

(云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南瑞麗 678600)

[目的] 探討辣木莖段的最佳消毒方法。[方法] 以辣木莖段為外植體，用不同消毒劑(升汞、次氯酸鈉)，選用不同濃度，在不同消毒時間下對辣木莖段進行消毒處理。[結(jié)果] 次氯酸鈉最佳消毒組合為濃度15 g/L消毒20 min，污染率為26%，成活率為34%。升汞最佳消毒組合為0.20 g/L消毒液消毒5 min，污染率為2%，成活率達84%。 [結(jié)論] 辣木莖段最佳消毒方法為：在75%酒精中浸泡30 s后，用0.20 g/L升汞處理5 min，污染率為2%，成活率達84%。

辣木；外植體；消毒

辣木樹(MoringaoleiferaLam.，英文名：Moringa tree)，又稱鼓槌樹、山葵樹，屬于辣木樹科，為多年生常綠小喬木至大喬木，現(xiàn)已知共有14種，供食用栽培的有印度辣木樹和非洲辣木樹2個品種。辣木全株都可利用，含有豐富的營養(yǎng)成分與抗營養(yǎng)成分[1-4]，礦物質(zhì)和維生素含量也高于世界衛(wèi)生組織(WHO)的推薦攝取標準[5-6]。大量研究證明了辣木的醫(yī)療保健功能[7-13]。此外還含有人體必需的各種氨基酸和微量元素等，其營養(yǎng)價值與被稱為“人類營養(yǎng)微型寶庫”的螺旋藻相當。辣木樹作為蔬菜和食品有增進營養(yǎng)和食療保健功能，可用來增強免疫力，對艾滋病(AIDS)有一定的輔助治療作用，可以解決營養(yǎng)不良問題[5-6、14-16]，CWS(Church World Service)呼吁貧困地區(qū)將其作為主要營養(yǎng)食物。

隨著辣木各種用途及產(chǎn)品被人們所認識，在進入21世紀后作為一種新食品資源更加引起人們的重視[17]。辣木喜溫，耐干旱，生長快，非常適宜在云南省熱區(qū)推廣種植[18]。目前，種植辣木的地區(qū)越來越多，傳統(tǒng)的種子育苗已不能滿足市場需要。生產(chǎn)上種植的辣木有90%以上是采用種子育苗，存在性狀不穩(wěn)定、抗病差、產(chǎn)量低等問題，而以辣木莖段為外植體，通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)辣木種苗，可保證品種的穩(wěn)定性、抗病性及品質(zhì)，對促進云南辣木良種選育及種苗繁殖推廣具有重要意義。該研究通過比較多種消毒方法，旨在建立適于辣木外植體的消毒程序，為辣木快速繁殖奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗材料為新抽發(fā)的辣木嫩莖。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體處理及清洗。剪取新抽發(fā)的辣木嫩枝，去除葉片，留帶腋芽的莖段，剪成4 cm左右長度，用自來水沖洗干凈備用。

1.2.2 外植體消毒滅菌。

(1)將清洗干凈的辣木莖段放入玻璃瓶中，在超凈工作臺中用75%酒精浸泡30 s左右。

(2)用鑷子取出后放入事先配制好的消毒劑中(消毒劑濃度及消毒時間見表1)，并不停地輕輕搖動，驅(qū)除氣泡，以促進材料各部分與消毒液充分接觸，消毒材料不宜放多，以保證消毒液充分浸泡辣木莖段，使消毒徹底；消毒時間為外植體加入消毒液開始計時，至取出外植體結(jié)束。

(3)在消毒結(jié)束前1 min，取出辣木莖段并將其放入無菌水中，搖動裝有無菌水和辣木莖段的瓶子30 s。

(4)取出辣木莖段并將其放入干凈的無菌水中，搖動瓶子30 s以上。如此重復(fù)5次，必須洗凈消毒劑。

表1 消毒劑濃度及滅菌時間

1.2.3 接種。將上述沖洗好的辣木莖段，按無菌操作要求將外植體切成一個節(jié)間、長1 cm左右莖段，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(添加一定濃度生長激素的MS培養(yǎng)基)上，每瓶接1個莖節(jié)，每個處理接種50瓶。經(jīng)消毒處理好的外植體，必須切除原傷口，否則原傷口處被消毒劑傷害的細胞會對外植體后期生長產(chǎn)生影響。

1.2.4 培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度為28 ℃，光照強度2 000 lx，光照時間10 h/d。

1.3 統(tǒng)計方法 培養(yǎng)3 d，開始觀察污染情況；培養(yǎng)10 d，統(tǒng)計污染情況；培養(yǎng)21 d后，統(tǒng)計成活率和死亡褐化率。

污染率=(污染的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))×100%

成活率=(成活的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))×100%

死亡褐化率=(死亡褐化的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù))×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 升汞對辣木外植體消毒滅菌的影響 培養(yǎng)3 d，觀察污染情況，HgCl2處理的莖段只有0.05 g/L濃度處理時有少量污染，5 d后0.10 g/L濃度處理的莖段也開始出現(xiàn)污染，在培養(yǎng)10 d統(tǒng)計污染情況時，發(fā)現(xiàn)滅菌時間為15 min的莖段已開始褐化甚至有死亡的現(xiàn)象。從圖1可以明顯看出，無論消毒滅菌時間多久，污染率都隨消毒時間增加而降低，而死亡褐化率都隨HgCl2濃度增加而增加；當滅菌時間為5 min時，成活率隨HgCl2濃度增加而升高，滅菌時間為10 min時，成活率先升高后降低，滅菌時間為15 min時，成活率呈下降趨勢。這樣的升降規(guī)律說明HgCl2消毒滅菌時間對于辣木莖段來說是至關(guān)重要的。

表2 不同消毒方法對辣木外植體影響

2.2 次氯酸鈉對辣木外植體消毒滅菌的影響 NaClO處理的莖段在3 d觀察污染時就已經(jīng)大量污染了，但是培養(yǎng)10 d后仍然沒有發(fā)現(xiàn)褐化死亡。從表2可以看出，采用NaClO對辣木莖段進行消毒，消毒時間≤10 min的外植體污染率為100%；消毒時間≥15 min時，污染率隨著消毒時間的增加而降低，死亡褐化率和成活率隨濃度的增加而升高；消毒時間20 min、消毒液濃度為15 g/L時，效果最好，污染率為26%，成活率為34%，死亡褐化率為40%。

3 結(jié)論與討論

通過該試驗研究得出：以辣木莖段為外植體，先用75%酒精浸泡30 s后，再用0.20 g/L HgCl2消毒處理5 min效果最佳，污染率為2%，成活率高達84%，死亡褐化率為14%；其次是0.15 g/L HgCl2消毒處理5 min，污染率為10%，成活率高達78%，死亡褐化率為12%；NaClO處理效果最好的成活率僅40%。這就說明對于消毒滅菌而言，除了處理時間很關(guān)鍵以外，消毒劑的選擇也至關(guān)重要。該試驗選擇75%酒精浸泡30 s，利用酒精滲透壓吸收細菌的水分，殺死外植體表面細菌，再分別用HgCl2和NaClO處理，HgCl2中含有的重金屬離子可使含有巰基、氨基、二巰基、羥基等的酶受到損傷甚至失去活性，喪失功能，這2種方法互補不足，因此消毒效果顯著；而NaCLO則是利用其氧化作用消毒，僅能殺死外植體表面的少量細菌，效果跟75%酒精相似，將NaCLO與酒精組合，消毒效果欠佳。

[1] 張濤，馬海樂，鐘慧慧.分光光度法測定辣木多糖含量[J].糧油食品科技，2003，12(1)：32-33.

[2] 趙燕南，王力舟.現(xiàn)代化妝品中的經(jīng)典植物油——辣木籽油[J].中國化妝品：專業(yè)版，1997(3)：25.

[3] 王有瓊，段瓊芳，孫龍，等.辣木油浸提方法探討[J].林業(yè)科技開發(fā)，2004(4)：12-13.

[4] RAJANGGAM J，AZAHAKIA MANAVALAN R S.辣木在南印度的生產(chǎn)及利用狀況[J].印度科技，2000(4)：189.

[5] 劉昌芬.辣木的營養(yǎng)價值[J].熱帶農(nóng)業(yè)科技，2004，27(1)：4-8.

[6] 陳惠民，周佳瑩.植物中的鉆石——高經(jīng)濟價值的辣木[M].臺灣：商州出版社，2005：76.

[7] FOLKARD G，SUTHERLAND J.MoringaoleiferaLam：A tree and a litany of potential[J].Agroforestry Today，1996，8(3)：5-8.

[8] RAM J.Moringa:a highly nutritious vegetable tree，in Triades，technical bulletin NO.2[R].1994：12.

[9] CHING L S，MOHAMED S.Alpha-tocopherol content in 62 edible tropical plant[J].Agric Food Chem，2001(4)：101-105.

[10] CHURCH WORLD WORLD SERVICE，The Miracle tree：Moringaoleifera[EB/OL].http：//www.Moringa tree.Org/TMT nutrition.html.

[11] VLAHOV G，KIPRONO CHEPKWONY P，NDALUT P K.13C NMR characterization of triacylglycerols ofMoringaoleiferaseed oil：An “oleic vaccenic acid” oil[J].AGRIC Food Chem，2002，50(5)：970-975.

[12] LIMAYE D A，NIMBKAR A Y，JAM R，et al.Cardiovascular effects of the aqueous extract ofMoringapterygosperma[J].Phytother Research，1995，9(1)：37-40.

[13] RAMACHANDRAN C，PETER K V，GOPALAKRISHNAN P K.Drumstick(MoringaoleiferaLam)：A multipurpose Indian vegetable[J].Economic Botany，1980，34：276-283.

[14] 劉永紅，李會珍.辣木的利用價值與栽培技術(shù)[J].福建熱帶科技，2003，9(2)：34-35.

[15] 劉昌芬.不同品種和產(chǎn)地辣木葉片營養(yǎng)成分含量[J].熱帶農(nóng)業(yè)科技，2004(1)：1-2.

[16] 劉昌芬.辣木的研究現(xiàn)狀及其開發(fā)前景[J].熱帶農(nóng)業(yè)科技，2002，25(3)：20-24.

[17] 楊炎，劉昌芬，龍繼明.不同栽培基質(zhì)對辣木農(nóng)藝性狀的影響[J].熱帶農(nóng)業(yè)科技，2014，37(2)：17-20.

[18] 羅云霞，陸斌，石卓功.辣木的特性與價值及其在云南引種發(fā)展的景況[J].西部林業(yè)科學(xué)，2005，35(4)：137-145.

Research on Explants Disinfection Test ofMoringaoleiferaLam.

JIANG Yan, GAO Yan*, GENG Xiu-ying et al

(Dehong Institute of Tropical Agriculture, Ruili,Yunnan 678600)

[Objective] The aim was to explore the best method ofMoringaoleiferaLam. stem disinfection.[Method]WithM.oleiferaLam. stem as explant, the effects of different concentration of mercuric chloride and sodium hypochlorite with different sterilization time were studied. [Result] The best combination for NaClO was 15 g/L with 20 min disinfection, contamination rate was 26%, and survival rate was 40%. The best combination for HgCl2was 0.20 g/L with 5 min disinfection, contamination rate was 2%, survival rate could reach 84%.[Conclusion] The best method ofM.oleiferaLam. stem disinfection was that 75% alcohol immersion 30 s, after treated with 0.2 g/L mercuric chloride 5 min, contamination rate was only 2%, the survival rate could reach 84%.

MoringaoleiferaLam.; Explants; Disinfection

德宏州科技創(chuàng)新項目(2014-21)；德宏州生物產(chǎn)業(yè)辦項目。

姜艷(1983- )，女，貴州貴陽人，碩士，從事藥用植物選育種與組培快繁技術(shù)研究。*通訊作者，高級農(nóng)藝師，從事藥用植物資源收集與種苗培育技術(shù)研究。

2015-04-21

S 723.1

A

0517-6611(2015)17-232-03