柳 青，劉麗鳳，孫昌友，李慧芳

高效液相色譜法測定奧扎格雷鈉脂質(zhì)體的包封率

柳 青1，劉麗鳳1，孫昌友1，李慧芳2

目的 建立高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)測定奧扎格雷鈉脂質(zhì)體包封率的檢測技術(shù)。方法 采用HPLC，以C18色譜柱分離，以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)為流動相，檢測波長為274 nm測定。結(jié)果 奧扎格雷在10～100 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997。日內(nèi)、日間RSD均小于0.5%，方法回收率為(100.2±0.42)%，樣品的平均包封率為(94.89±0.44)%。結(jié)論 該測定方法簡單，準確度高，靈敏度好，適合奧扎格雷鈉脂質(zhì)體的包封率測定。

奧扎格雷鈉；脂質(zhì)體；包封率；高效液相色譜

奧扎格雷鈉(ozagrel hydroehloride)是一種特異性血栓素合成酶抑制藥，能抑制血栓素A2(TXA2)的生成，具有抗血小板聚集和擴張血管的作用[1]。制劑有注射用奧扎格雷鈉及奧扎格雷鈉注射液，主要用于急性血栓性腦梗死和腦梗死所伴隨的運動障礙，以及改善蛛網(wǎng)膜下腔出血手術(shù)后的腦血管痙攣收縮和并發(fā)腦缺血癥狀的治療[2]。在國家藥品標準中，注射用奧扎格雷鈉及奧扎格雷鈉注射液和凍干粉針的含量測定均采用紫外分光光度法[3]。文獻[4-9]報道，奧扎格雷鈉注射劑和奧扎格雷片的測定方法均為反相HPLC。筆者建立了HPLC法測定奧扎格雷及其脂質(zhì)體包封率的檢測技術(shù)，它方便簡單，結(jié)果準確，能夠滿足實驗需求。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 1200系列高效液相色譜系統(tǒng)(美國Agilent公司)，包括G1315B DAD檢測器，G1311A四元泵，G1329A標準型自動進樣器，G1316A柱溫箱。

1.2 試藥 奧扎格雷對照品(批號100557-201304，中國藥品生物制品檢定所，純度>99.6%)；奧扎格雷鈉脂質(zhì)體(自制，批號為20110623，20 mg/ml)，乙腈、甲醇均為色譜純(山東禹王實業(yè)有限公司)，磷酸二氫鉀為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)；柱溫25 ℃；檢測波長274 nm；流速1 ml/min；進樣量20 μl。理論板數(shù)按奧扎格雷峰計不低于2000，奧扎格雷峰與其他相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度符合要求(R≥1.5)，奧扎格雷峰的拖尾因子<1.5(圖1)。

圖1 奧扎格雷HPLC色譜圖

2.2 線性試驗 精密稱取奧扎格雷對照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取上述貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μl注入色譜儀，記錄色譜圖。以奧扎格雷的濃度(μg/ml)為橫坐標，以奧扎格雷的峰面積為縱坐標，其回歸方程為：A=12.379C+6.3358，r=0.9998。結(jié)果表明，奧扎格雷在10～100 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系(圖2)。

2.3 溶液穩(wěn)定性試驗 精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液6份，于0、2、4、8 h分別進樣測定，記錄色譜圖。試驗結(jié)果表明，奧扎格雷峰面積RSD為0.3%，樣品溶液在8 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度試驗 精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液3份，平行進樣，每份溶液重復(fù)進樣6次，測定峰面積的RSD%為0.4%，方法的日內(nèi)精密度符合試驗要求。精密配制濃度為50 μg/ml的供試品溶液3份，平行進樣，同一時間連續(xù)進樣6 d，測定峰面積的RSD%為0.3%，方法的日間精密度符合試驗要求。

2.5 回收率試驗 精密量取奧扎格雷鈉脂質(zhì)體適量，加入適量四氫呋喃破乳后，加入甲醇制成一定濃度的溶液，加入等量的奧扎格雷對照品，按上述色譜條件進行加樣回收率試驗，其平均回收率為100.2%，RSD為0.42%(n=6)，見表1。

圖2 奧扎格雷對照品溶液標準曲線

表1 奧扎格雷鈉脂質(zhì)體檢測結(jié)果

2.6 奧扎格雷脂質(zhì)體包封率測定 精密量取奧扎格雷脂質(zhì)體0.5 ml，上預(yù)先處理好的Sephadex-G50凝膠柱，用pH6.5的磷酸鹽緩沖液以0.8 ml/min速度洗脫，收集藥物流出液70～80 ml，用甲醇定容至100 ml，取20 μl進樣，計算溶液中奧扎格雷的含量(W游)；另取0.5 ml奧扎格雷脂質(zhì)體18份，分別加入適量的甲醇、乙醇、水-異丙醇-乙醚(2∶2∶1)、乙醚、乙酸乙酯、四氫呋喃破乳，各做3份，用甲醇定容至100 ml，取20 μl進樣，計算脂質(zhì)體中藥物的總量(W總)。計算包封率，包封率(%)=(1-W游/W總)×100%。結(jié)果顯示：四氫呋喃效果最好，最終選用四氫呋喃作為破乳溶劑(表2)。

表2 奧扎格雷脂質(zhì)體包封率檢測結(jié)果 (n=3)

注：四氫呋喃與其他各組比較，P均<0.01

3 討 論

筆者通過實驗建立了奧扎格雷脂質(zhì)體的包封率檢測方法。該方法線性范圍寬，精密度、準確度、回收率都滿足要求，且操作簡單、方法靈敏，能夠準確檢測奧扎格雷脂質(zhì)體中奧扎格雷的包封率，為質(zhì)量控制提供了可靠的方法。在色譜條件摸索過程中，對多種流動相體系進行篩選，確定以磷酸二氫鉀-甲醇-乙腈體系為最佳，通過調(diào)整有機相比例，使主峰與相鄰雜質(zhì)峰得到了分離，最終確定以0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=7.0)-甲醇-乙腈(80∶15∶5)為流動相，滿足了實驗需求。

對包封在脂質(zhì)體中藥物的測定，需加入一定量破膜溶劑以對磷脂雙分子層進行破壞，讓藥物從載體中完全釋放出來，從而保證測定結(jié)果的準確性，最終選用四氫呋喃作為破乳溶劑，能夠達到很好的效果，是符合試驗的破乳劑。

該方法與以往的檢測方法比較，操作簡單，精密度、準確度均能達到藥典要求，且容易實施，為后期含量測定和制定質(zhì)量標準提供有力的依據(jù)。

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(2014-11-15收稿 2015-03-06修回)

(責(zé)任編輯 武建虎)

Encapsulation efficiency of ozagrel hydroehloride liposome by HPLC

LIU Qing1，LIU Lifeng1, SUN Changyou1，and Li Huifang2.

1.Department of Pharmacy, Shanxi Provincial Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Taiyuan 030006, China；2.Department of Pharmacy, Shanxi Labor Medical School，Taiyuan 030012，China

Objective To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the encapsulation efficiency of ozagrel hydrochloride liposome. Methods The HPLC was used for determination. A C18 column was used with the mobile phase of 0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution (pH=7.0) - acetonitrile - methanol (80∶15∶5) at the detection wavelength of 274 nm. Results The calibration curve was linear in the concentration range of 10-100 μg/ml,r=0.9997. The inter- and intra- day RSD was less than 0.5 %. The method recoveries were (100.2±0.42) %. The average entrapment efficiency of tartrate indoquinoline liposome was (94.89±0.44)%. Conclusions This method is simple，accurate and can be used to determine the encapsulation efficiency of ozagrel hydroehloride in ozagrel hydrochloride liposome.

ozagrel hydroehloride; liposome; encapsulation efficiency；HPLC

柳 青，本科學(xué)歷，副主任藥師，E-mail：594924223@qq.com

1.030006 太原，武警山西總隊醫(yī)院藥劑科；2.030012 太原，山西職工醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系

孫昌友，E-mail:scy196410@163.com

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