李月梅，種貝貝，辛?xí)詡ィ?張穎穎

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 1.藥學(xué)院；2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

石韋中綠原酸的提取工藝優(yōu)化及含量分析

李月梅1，種貝貝1，辛?xí)詡?， 張穎穎2*

(山東中醫(yī)藥大學(xué) 1.藥學(xué)院；2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

通過正交試驗(yàn)，以綠原酸提取率為指標(biāo)，對(duì)石韋中綠原酸的提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立石韋中綠原酸的最佳提取方法。并在此優(yōu)化條件下，對(duì)不同石韋藥材中的綠原酸含量進(jìn)行分析。石韋中綠原酸的乙醇提取最佳工藝參數(shù)組合為：乙醇濃度50%，超聲時(shí)間60 min，料液比1∶12(g∶mL)，超聲溫度80 ℃。這為中藥石韋的合理開發(fā)和利用提供依據(jù)。

石韋; 綠原酸；提取率；含量測(cè)定；紫外-可見分光光度法

石韋是水龍骨科(Polypodiaceae)石韋屬(Pyrrosia)有柄石韋、石韋和廬山石韋的干燥葉，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有清肺泄熱，利尿通淋等功效，臨床上常用于治療熱淋，血淋，小便不通，淋瀝澀痛等[1]。石韋中主要有效成分是綠原酸，具有抑菌、抗氧化、抗腫瘤，降血壓,保肝利膽等功能，對(duì)生殖系統(tǒng)，血液循環(huán)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)均有治療作用[2-3]。綠原酸作為一種有強(qiáng)抗氧化能力的天然物質(zhì), 目前已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健和日用化工等行業(yè)，其開發(fā)利用前景良好[4]。因此本實(shí)驗(yàn)旨在探究石韋中綠原酸的提取工藝，為石韋的開發(fā)研究提供基礎(chǔ)材料。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料

石韋,有柄石韋，廬山石韋，華北石韋，中越石韋，氈毛石韋，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：20140318，上海金穗，分析純)。石韋樣品經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)高德民副教授鑒定。

1.2 儀器與試劑

754PC紫外-可見分光光度計(jì)(上海菁海)；FXB101-1加熱鼓風(fēng)干燥箱(上海樹立)；KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山)；FA2004N電子天平(上海菁海)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(菏澤鑫源)；DS-T250型高速多功能粉碎機(jī)(上海頂帥)；95%乙醇；娃哈哈純凈水。

2 方 法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[5]

精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，用EtOH溶解，混勻。將其配制成不同濃度的綠原酸溶液，以70% EtOH為參比置于330 nm處測(cè)定吸光度，以濃度對(duì)吸光度值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得其回歸方程y=46.51x+0.042 2，R2=0.998 5。

2.2 樣品中綠原酸含量的測(cè)定[6]

工藝優(yōu)化：精確稱取石韋粉末90.00g(過40目篩)，平均分成9份，按表1條件提取綠原酸。

樣品液的制備：將不同產(chǎn)地石韋的葉，葉柄及根莖分別粉碎，過40目篩。精確稱取各樣品1.00 g, 按照上述工藝優(yōu)化的最佳條件進(jìn)行提取。

含量測(cè)定：將樣品提取液稀釋備用，以50% EtOH作空白，在330 nm處測(cè)定各吸光度值，計(jì)算各樣品中綠原酸的含量[7]。

3 結(jié)果和分析

3.1 工藝優(yōu)化

結(jié)果顯示不同的提取方法，綠原酸的提取率有很大差異( 表1，表2) 。其中實(shí)驗(yàn)號(hào)3 條件下提取率最高，且明顯高于其它條件下的提取率。實(shí)驗(yàn)號(hào)5，7，8的得率最低，試驗(yàn)號(hào)1，4，6，9的提取率相差不大。綜合分析可知，影響因素的大小順序?yàn)椋阂掖紳舛? 超聲時(shí)間>超聲溫度> 料液比。最佳提取條件為：乙醇濃度50%，超聲時(shí)間60 min，料液比1∶12，超聲溫度80 ℃，即A1B3C2D3。

表1 因素水平表

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

3.2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果對(duì)A1B3C2D3條件進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證該工藝的合理性和穩(wěn)定性，結(jié)果無(wú)顯著差異。

3.3 綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果顯示,不同種石韋,同種石韋不同產(chǎn)地和不同部位中綠原酸的含量均有明顯差別(表3,表4)。同種石韋中綠原酸在葉中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于葉柄和根莖。產(chǎn)地和品種對(duì)其含量也有一定的影響，其中云南昆明的廬山石韋，陜西洋縣的有柄石韋和廣西宜州的石韋含量較高，浙江,吉林,四川,湖北,河北,山東相差不大。

表3 不同石韋中不同部位的綠原酸含量

表4 六種石韋藥材綠原酸的平均含量 %

經(jīng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)后,發(fā)現(xiàn)石韋中綠原酸的含量測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠。

4 討 論

超聲提取作為一種新型的提取技術(shù)，在天然產(chǎn)物提取方面得到廣泛應(yīng)用[8]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，乙醇濃度對(duì)綠原酸提取效果影響顯著，超聲時(shí)間影響次之，超聲溫度影響較小，料液比的影響最小。超聲的最佳提取條件是A1B3C2D3，即料液比為1∶12的50%的乙醇在80 ℃條件下超聲提取60 min。在此工藝下得到的綠原酸含量最大。由于市場(chǎng)上石韋混用現(xiàn)象較明顯，本實(shí)驗(yàn)為提高臨床用藥質(zhì)量，以及對(duì)藥用石韋的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，也為石韋進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)材料。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典:一部[S]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010：83-84.

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[3] 姚新生. 天然藥物化學(xué)[M].3版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2002: 29-30.

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[5] 武雪芬，李玉賢，魏煒，等. 金銀花越冬老葉有效成分測(cè)定[J].中藥材, 1997,20(1): 6-7.

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The Process Optimization and Content Analysis ofChlorogenic Acid fromPyrrosialingua

Li Yuemei1, Zhong Beibei1, Xin Xiaowei1, Zhang Yingying2*

(1. School of Pharmacy; 2. School of Basic Medical Science, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)

Through orthogonal test, the extraction yield of chlorogenic acid as index, optimizating chlorogenic acid inPyrrosialinguaethanol extraction process parameters. And under optimized conditions, analying the content of chlorogenic acid in the differentPyrrosialeaves. The optimum conditions were: 50% ethanol concentration, ultrasonic time 60 min, solid-liquid ratio 1∶12g/mL, ultrasonic temperature 80 ℃. It provides the reference for the rational development and utilization ofPyrrosia.

Pyrrosia; chlorogenic acid; extraction rate; content determination; UV-Vis spectrophotometry.

2015-03-12

山東中醫(yī)藥大學(xué)2014年SRT資助(2014376)。

李月梅(1993—)，女，2012級(jí)中藥學(xué)本科生。

*通訊作者：張穎穎，男，講師，研究方向：微生物學(xué)。E-mail：zhangyy19@aliyun.com

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.06.010

R284.2

A

1006-9690(2015)06-0037-03