陳京都，吳紅軍，成強，王龍根，臧素娟

(揚州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心，江蘇揚州 225101)

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在水產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

陳京都，吳紅軍，成強，王龍根，臧素娟

(揚州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心，江蘇揚州 225101)

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)逐漸成為水產(chǎn)品中獸藥殘留檢測的重要手段。從技術(shù)原理、樣品處理方法的改進和新方法的應(yīng)用，以及多獸藥殘留同時分析等方面論述了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在水產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用與進展。

水產(chǎn)品；獸藥殘留；檢測；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

水產(chǎn)品在養(yǎng)殖過程需要使用獸藥來提高產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量，所用獸藥的種類較為復(fù)雜，除了消毒劑、防腐劑，還有殺蟲、驅(qū)蟲類，抗生素類，磺胺類、呋喃類和喹諾酮類抗菌藥等，個別情況下還會使用某些激素類的獸藥［1］，違規(guī)或過量使用導(dǎo)致的藥物殘留不僅會通過環(huán)境和食物鏈的作用間接對人體健康造成危害，還會造成產(chǎn)地環(huán)境的污染，從而影響我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。水產(chǎn)品中獸藥的使用與殘留越來越受到廣泛的關(guān)注，已經(jīng)頒布實施與水產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)的法律法規(guī)如《漁業(yè)法》、《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》、《動物防疫法》、《獸藥管理條例》、《水產(chǎn)養(yǎng)殖質(zhì)量安全管理規(guī)定》等為水產(chǎn)品質(zhì)量安全提供了有力保障，除此之外，還需要準(zhǔn)確的分析手段為法律法規(guī)的實施提供技術(shù)支撐。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)綜合了液相色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度以及能夠準(zhǔn)確提供化合物的相對分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息等優(yōu)點，具有分析時間短，對高沸點、難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定化合物的分析能力強等優(yōu)勢［2］，在農(nóng)產(chǎn)品和食品質(zhì)量安全檢測分析領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用［2-4］。筆者結(jié)合近幾年來的研究，從樣品前處理的改進及多組分獸藥殘留分析等方面介紹了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在水產(chǎn)品獸藥殘留檢測方面的應(yīng)用，并對今后的發(fā)展趨勢進行了展望。

1 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)原理

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用起步于20世紀(jì)70年代，經(jīng)歷了30多年的發(fā)展，直至大氣壓離子化接口技術(shù)的出現(xiàn)，才成為常規(guī)應(yīng)用的重要分析方法。目前在農(nóng)產(chǎn)品和食品檢測方面應(yīng)用最廣泛的是大氣壓電噴霧離子化(ESI)技術(shù)和大氣壓電化學(xué)離子化(APCI)技術(shù)［5］。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由液相色譜系統(tǒng)和質(zhì)譜系統(tǒng)兩部分組成，樣品由液相系統(tǒng)進入，經(jīng)色譜柱分離，被分離的組分依次進入質(zhì)譜系統(tǒng)，在離子源中離子化，離子聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而分離，分離后的離子信號轉(zhuǎn)化為電信號，傳遞至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，根據(jù)質(zhì)譜峰的強度和位置對樣品的成分和結(jié)構(gòu)進行分析［6］。

2 在水產(chǎn)品獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

2.1 樣品前處理方法的改進

水產(chǎn)品基質(zhì)較為復(fù)雜，含有較多的蛋白質(zhì)、脂肪等物質(zhì)，容易對目標(biāo)化合物的檢測產(chǎn)生干擾。液相色譜法對樣品前處理的凈化要求較高，如果凈化效果不好會干擾目標(biāo)物的定性和定量，甚至導(dǎo)致目標(biāo)物被基質(zhì)掩蓋而無法檢測。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)具有顯著提高檢測靈敏度、選擇性，以及抑制基質(zhì)干擾的特點［7］，與液相方法相比，樣品前處理得到了很大改進，樣品處理過程更加簡單。梅光明等［8］建立的水產(chǎn)品中喹乙醇代謝物殘留量的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法，樣品只需經(jīng)乙酸乙酯提取、液-液萃取凈化、吹干，流動相定容，即可檢測。鄭香平等［9］在孔雀石綠和結(jié)晶紫等前處理中，提取樣品時加入酸性氧化鋁，可以有效去除油脂，省去了氧化鋁小柱脫脂和丙磺酸小柱的凈化步驟，縮短了樣品前處理時間。李小玲等［10］建立的測定諾氟沙星、環(huán)丙沙星與恩諾沙星藥物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，樣品經(jīng)乙腈提取，正己烷脫脂，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，即可進行定性和定量分析。液相方法測定紅霉素殘留的前處理大多采用提取、固相萃取、濃縮等處理步驟，不但成本高，而且時間較長。于慧娟等［11］等研究了氯化鈉凈化和正己烷凈化的液-固萃取和液-液萃取相結(jié)合的凈化方法，可以有效去除乙腈提取液中的部分蛋白質(zhì)，大部分脂溶性雜質(zhì)及對蝦、河蟹樣品中的各種色素處理過程簡單、快速。傳統(tǒng)方法檢測水產(chǎn)品中氯霉素類藥物，需要進行衍生化，操作復(fù)雜，準(zhǔn)確度低，梅光明等［12］采用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀，無需衍生化，樣品經(jīng)乙酸乙酯提取，正己烷脫脂凈化，流動相溶解定容即可檢測，檢測結(jié)果表明該方法適用于水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留的快速檢測。

QuEChERS方法是近年來發(fā)展起來的一種新型藥物多殘留樣品前處理方法［13］，因其具有快速(quick)、簡單(easy)、廉價(cheap)、有效(effective)、可靠(rugged)和安全(safe)的特點而得名。QuEChERS處理過程包括3個步驟［14］：（1）樣品用有機溶劑萃取，同時加入鹽以促使溶劑與水相分離；（2）混合體系經(jīng)過振搖和離心后，取部分有機相與吸附劑混合，利用分散固相萃取進一步凈化；（3）混合物離心后所得上清液被直接用于分析測定。QuEChERS方法雖然面世不久，但已經(jīng)被廣泛采納且應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品和食品檢測中［15-16］，在水產(chǎn)品檢測方面已有不少相關(guān)報道。Molina等［17］采用QuEChERS、液相與飛行時間質(zhì)譜(LC-TOF-MS)聯(lián)用的方法分析蝦中的13種常用抗生素和獸藥，該法能很好地排除基質(zhì)干擾，回收率為58%～133%。Dong等［18］研究了QuEChERS方法在水產(chǎn)樣品前處理中的應(yīng)用，其通過減少樣品量達(dá)到較好的凈化效果，并取得了較好的回收率。羅輝泰等［19］將QuEChERS法應(yīng)用于魚肉的藥物多殘留分析，通過優(yōu)化樣品預(yù)處理方法及色譜-質(zhì)譜測定條件，建立了一次提取同時測定魚肉中激素及氯霉素類共30種藥物殘留的方法。卜明楠等［20］采用QuEChERS前處理方法，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了可以同時測定蝦肉中72種獸藥殘留的方法，通過添加回收試驗驗證，該法可滿足檢測要求。

2.2 多獸藥殘留組分同時分析

水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中使用的獸藥越來越呈現(xiàn)出多樣化、復(fù)雜化，獸藥殘留的檢測需求也從以前的單一品種測定發(fā)展到現(xiàn)在多種獸藥殘留同時檢測。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法因其具有良好的適用性，可同時定性、定量、高靈敏度及分析時間短的特點，已成為多種獸藥殘留檢測的主要方法。王志杰等［21］采用多反應(yīng)監(jiān)測正離子模式，同時對水產(chǎn)品中的15種喹諾酮類藥物進行定性和定量測定，方法簡便快捷，平均回收率為66%～121%。曹軍等［22］采用高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法 測定水產(chǎn)品中19種喹諾酮類獸藥殘留，3個添加水平中，小龍蝦樣品加標(biāo)回收率為70.5%～112.6%，鮰魚樣品加標(biāo)回收率為70.2%～113.8%。黃德鳳等［23］針對水產(chǎn)品中磺胺類藥物的多殘留問題而建立的同時測定水產(chǎn)品中19種磺胺類藥物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法方法，通過梯度洗脫，將具有相同定性離子的磺胺良好分離，方法簡便、快速，回收率為80%～105%，適用于批量樣品的檢測。李向軍等［24］建立的同時測定24種性激素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，實現(xiàn)了3類性激素的同時定量及定性確證分析。

各類獸藥的理化性質(zhì)差異較大，水產(chǎn)品中獸藥殘留檢測主要以分類檢測為主，一次測定僅僅局限于同一類別藥物，存在檢測周期長、成本高、效率低等弊端。實現(xiàn)同時測定不僅節(jié)省了時間，提高了效率，減少了有機溶劑的用量，降低了對環(huán)境的污染，還在一定程度上實現(xiàn)了藥物殘留的快速檢測，為水產(chǎn)品質(zhì)量安全的監(jiān)管和確保消費者安全提供了重要支撐。對此國內(nèi)學(xué)者也做了大量的研究和應(yīng)用工作。劉正才等［25］建立的同時測定鰻魚中15種磺胺、3種喹諾酮類以及4種四環(huán)素族抗生素殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，5，10，20 μg/kg三個添加水平的平均回收率為72.4%～97.3%。萬譯文等［26］建立的水產(chǎn)品中12種喹諾酮類和磺胺類藥物殘留量同時測定的方法，其檢出限為1.0 μg/kg，定量限為2.0 μg/kg，回收率達(dá)到69.5%～121.9%，具有較高的重現(xiàn)性和選擇性。王志杰等［27］建立的鰻魚和蝦中33種喹諾酮類和磺胺類藥物殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，目標(biāo)化合物的峰強度與質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好(r＞0.99)，平均回收率為66%～123%。羅輝泰等［28］建立的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定水產(chǎn)品中四環(huán)素類、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑和三苯甲烷類共5大類33種藥物殘留的方法，目標(biāo)藥物在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，在3個不同濃度添加水平下，平均回收率為63.6%～115.2%。郭萌萌等［29］采用多選擇反應(yīng)監(jiān)測模式、正負(fù)離子切換掃描方式下對氯霉素類、三苯甲烷類染料、磺胺類、氟喹諾酮類和四環(huán)素類5類共23種漁用藥物殘留進行定性和定量分析，目標(biāo)化合物可在12 min內(nèi)實現(xiàn)良好分離，平均添加回收率為50.4%～118.5%。李仲超［30］運用液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)建立的可同時測定水產(chǎn)品(魚、蝦和貝)中78種獸藥的方法，目標(biāo)獸藥在0.1～100 μg/kg范圍內(nèi)線性良好，4 μg/kg和20 μg/kg兩個加標(biāo)量條件下魚、蝦、貝肉的加標(biāo)回收率分別為40.8%～125.6%，42.9%～131.9%和43.5%～136.4%，方法檢測限為0.1～0.5 μg/kg。

3 展望

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問題屢屢出現(xiàn)，農(nóng)產(chǎn)品的分析檢測已成為研究的重點和關(guān)注的焦點。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)雖然已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到農(nóng)產(chǎn)品檢測領(lǐng)域，但由于農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)成分復(fù)雜、無法建立通用的前處理方法依然是面臨的主要問題，充分利用現(xiàn)有技術(shù)建立簡單、低成本、環(huán)保、可靠的分析方法是農(nóng)產(chǎn)品檢測的主要發(fā)展方向。隨著聯(lián)用技術(shù)的日漸成熟，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法在農(nóng)產(chǎn)品檢測分析方面將會發(fā)揮重要的作用。

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《宇航計測技術(shù)》簡介

宇航計測技術(shù)》創(chuàng)刊于1981年，是國家科委批準(zhǔn)的國家級技術(shù)性刊物。《宇航計測技術(shù)》曾榮獲國家、北京市和航天系統(tǒng)優(yōu)秀科技期刊獎；為我國首批中文核心期刊、計量核心期刊和國家統(tǒng)計用刊；目前，本刊已成為《中國學(xué)術(shù)期刊》（光盤版），《中國導(dǎo)彈與航天文摘》(CAMA)與《中國期刊網(wǎng)》全文收錄用刊。

中國標(biāo)準(zhǔn)刊號為ISSN1000-7202/CN11-2052/V，全國各地郵局均可訂閱,郵發(fā)代號為18-123。

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主編：孫海燕電話：010-88528714通信地址：北京市142信箱408分箱郵編：100039

《宇航計測技術(shù)》2015年第4期目次

一種固定式多齒分度臺校準(zhǔn)裝置的自動控制系統(tǒng)

光電跟蹤瞄準(zhǔn)系統(tǒng)的多光軸平行度校準(zhǔn)方法研究

導(dǎo)彈侵切角測量方法研究

國產(chǎn)工業(yè)攝影測量相機精度測評

光學(xué)坐標(biāo)測量機的搭建與實現(xiàn)

電子稱防作弊方法和監(jiān)管系統(tǒng)的研究

無介質(zhì)硅壓阻式壓力/壓差傳感器的研制

變PID參數(shù)控制在電動齒輪燃油泵中的應(yīng)用

一種螺栓拉伸器校準(zhǔn)方法研究

基于火箭測量系統(tǒng)的無線傳感器網(wǎng)絡(luò)技術(shù)研究

基于磁滯電機的無人機舵回路設(shè)計

RNSS/INS深耦合高動態(tài)導(dǎo)航接收機測試方法研究

M-FSVM在可靠性壽命分布模式識別中的應(yīng)用

應(yīng)變測量儀自動校準(zhǔn)系統(tǒng)設(shè)計

一種基于FPGA單芯片的IRIG-B時間編碼技術(shù)及其實現(xiàn)

遙測中間裝置模擬量變換器故障診斷方法

基于量化控制的校準(zhǔn)/檢測實驗室質(zhì)量管理及實踐

對JJG52-2013在使用中的問題探討

Applications of LC-MS Technology in Drug Residues Detection of Aquatic Product

Chen Jingdu, Wu Hongjun, Cheng Qiang, Wang Longgen, Zang Sujuan
(Yangzhou City of Agricultural Products Quality Supervision and Inspection Center， Yangzhou 225101， China)

The liquid chromatography-mass spectrometry was becoming important method for the detection of drug residues in aquatic products. The application and progress of liquid chromatography-mass spectrometry technology in the detection of drug residues in aquatic products were discussed from principle, improvement of sample preparation, new methods and multi-veterinary drug residue analysis.

aquatic product; veterinary drug residue; determination; high performance liquid chromatography-mass spectrometry

O657.6

：A

：1008-6145(2015)05-0105-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2015.05.029

聯(lián)系人：陳京都；E-mail：chenjingdu1985@163.com

2015-06-28