王綠林，赫亞歌，高新玉，辛春燕，高培濱，鄧立新*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，鄭州 450002；2.河南省項城市秣陵鎮(zhèn)人民政府，項城 466232)

妊娠母犬不同時期生殖系統(tǒng)超聲聲像圖變化

王綠林1，赫亞歌1，高新玉2，辛春燕1，高培濱1，鄧立新1*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，鄭州 450002；2.河南省項城市秣陵鎮(zhèn)人民政府，項城 466232)

為探索不同生殖時期母犬生殖系統(tǒng)的超聲聲像圖變化特征，以8只標準試驗比格犬為對象，利用彩色多普勒超聲診斷儀，在二維灰階、彩色多普勒超聲模式下分別對子宮、卵巢、胎兒進行實時跟蹤監(jiān)測，將獲取的聲像圖進行總結(jié)分析，同時對母犬在不同時期進行陰道涂片鏡檢。結(jié)果表明，超聲條件下可見發(fā)情期母犬卵巢、子宮體積明顯逐漸增大，邊界清晰，單個卵泡成像明顯，子宮腔內(nèi)可見呈“細線”狀的子宮乳，妊娠后23 d超聲即可探查到孕囊；彩色多普勒超聲下，發(fā)情期卵巢內(nèi)血流明顯豐富，后腔靜脈和腹主動脈分出的卵巢動靜脈相互纏繞，呈紅藍條帶相互交織狀態(tài)進入卵巢；妊娠后子宮血流逐漸豐富，血管內(nèi)徑及血流信號強度迅速增大。超聲條件下可實時監(jiān)測卵巢、子宮及胚胎在不同時期的大小、血流分布變化及其聲像圖規(guī)律，為母犬生殖系統(tǒng)發(fā)育過程多普勒超聲聲像圖研究及臨床檢查提供相應(yīng)參考依據(jù)。

多普勒超聲；B超；母犬；生殖系統(tǒng)；聲像圖

作為寵物，犬備受人們喜愛；作為工作犬，主要用于軍隊、武警、公安等領(lǐng)域，為人們的生活提供安全保障，功勞顯著。隨著人們生活水平的提高和社會發(fā)展變化，寵物犬的飼養(yǎng)量不斷增大，社會對工作犬的需求也成倍增加[1]。犬的生產(chǎn)繁殖逐漸引起人們的重視，同時犬科動物生產(chǎn)繁殖對于改進犬科珍貴物種及保護瀕臨犬種十分重要[2]，目前在犬的繁殖過程中，確定母犬最佳配種時間，必須用具體排卵期前指標來鑒定。這些指標主要涉及在卵巢血流變化，卵泡/黃體數(shù)和排卵期前指標聲像圖回聲特性。母犬發(fā)情時間的準確判斷極為重要，必須根據(jù)母犬所處的不同發(fā)情時期選擇合適的配種時間。因此，臨床上找到一種簡單、高效的鑒定母犬發(fā)情周期的方法顯得尤為迫切。為了更加精確的判定母犬最佳配種時間，需要一種實用便于操作的方法。

超聲檢查是一種方便、快捷、無損傷的檢查方法，深受臨床醫(yī)師的喜愛，彩色多普勒超聲成像技術(shù)可對感興趣區(qū)的血流情況進行監(jiān)測，可用于犬生殖系統(tǒng)的評估研究。彩色多普勒超聲對犬生殖系統(tǒng)評估的研究已有十幾年，但此類研究報道較少，國內(nèi)更是一片空白，而國外一些文獻對該領(lǐng)域僅僅做了部分縱向研究，如：L.H.Bergeron等[3]和K.K?ster等[4]對發(fā)情周期中卵巢的血流灌注情況進行了研究；P.R.Batista等[5]和Cda.C.Barbosa等[6]對圍產(chǎn)期及子宮復(fù)舊過程中子宮動脈血流變化情況進行了研究；P.Di Salvo等[7]和 P.G.Blanco等[8]對正常妊娠母犬子宮動脈及胎兒的一些大血管的血液動力學進行了研究。目前，該領(lǐng)域研究內(nèi)容較為分散，缺少全面完整的研究，并不能對生殖系統(tǒng)進行系統(tǒng)的評估。

本試驗利用多普勒超聲檢查方法對母犬的卵巢血流變化、卵泡、卵巢黃體等回聲特性進行實時追蹤監(jiān)測，從發(fā)情前期開始每天進行檢查，直到黃體生成素到達峰值4 d以后，并對所獲得的聲像圖進行分析。用二維灰階超聲進行卵巢黃體數(shù)量及其回聲特性分析，用彩色多普勒對卵巢血流特性進行分析，觀察卵巢子宮的形態(tài)變化。確定發(fā)情各期與聲像圖的對應(yīng)關(guān)系，為通過超聲檢查以確定最佳配種時間方法的應(yīng)用，建立一套科學合理的參考標準。同時本試驗還對胎兒的心血管系統(tǒng)發(fā)育進行了實時超聲監(jiān)測，為監(jiān)測胎兒是否健康發(fā)育提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

標準試驗比格犬8只(陜西西安迪樂普生物科技公司提供)。雌性，1.5歲，平均體重11 kg，健康狀態(tài)良好。

1.2 試驗儀器

祥生Q6VET型彩色多普勒超聲診斷儀(配有：微凸變頻探頭，中心頻率5.0 MHz，線陣探頭，中心頻率7.5MHz)；顯微鏡，載玻片，瑞氏染液；寵物專用保定架；獸用耦合劑。

1.3 動物準備與超聲檢查

每次試驗前對動物進行饑餓處理12 h。將試驗比格犬上界劍狀軟骨部，右側(cè)至第11肋骨末端，左側(cè)至最后肋骨部，后界為恥骨聯(lián)合部進行備毛處理。按照各器官的空間解剖位置及相互之間位置關(guān)系，在相應(yīng)區(qū)域進行掃查。分別獲取卵巢、子宮及胚胎的不同切面聲像圖，將聲像圖和數(shù)據(jù)進行保存分析，根據(jù)聲像圖及生殖生理特征，總結(jié)不同階段聲像圖的規(guī)律。整個檢查周期包括：乏情期、發(fā)情前期、發(fā)情期和妊娠后每隔一周進行檢查直至恢復(fù)正常。

采集各個階段犬陰道分泌物，常規(guī)瑞氏吉姆薩染色法染色，顯微鏡下觀察拍照記錄。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

2 結(jié) 果

2.1 卵巢聲像圖變化

探頭掃查右腎頭部稍偏向腹側(cè)即可見右側(cè)卵巢，分別對右側(cè)卵巢進行不同生殖時期聲像圖掃查分析。在B型超聲條件下：發(fā)情間期，卵巢內(nèi)整體呈現(xiàn)均勻中等強度回聲，邊界清晰，并可見黃體存在，黃體與卵巢的邊界清晰可辨；發(fā)情前期，卵巢內(nèi)可見清晰卵泡，卵泡邊界清晰，回聲強度較高，卵泡內(nèi)為液性暗區(qū)，卵巢體積較發(fā)情間期增大；發(fā)情后期，卵巢內(nèi)卵泡體積變大，卵泡邊界清晰，同時有紅體產(chǎn)生，卵巢整體體積變大；妊娠第7天，卵巢內(nèi)出現(xiàn)黃體，同時有腔黃體和紅體并存，并且三者之間界限清晰分明；妊娠第14天，卵巢內(nèi)可見黃體，紅體和有腔黃體消失，卵巢的體積較發(fā)情期小，與發(fā)情間期接近。

在彩色多普勒超聲條件下：發(fā)情間期，卵巢內(nèi)血流不明顯，但可見卵巢下方的卵巢動靜脈；發(fā)情前期，可見卵巢內(nèi)部有血流存在，分布在各個卵泡之間，同時卵巢下方的卵巢動靜脈搏動清晰可見；發(fā)情后期，卵巢內(nèi)血流豐富，血管環(huán)繞卵泡分布，并呈交織纏繞狀態(tài)；妊娠第14天，卵巢內(nèi)的血流減少，與發(fā)情期相同的量程等條件下，血流圖像不可見，只能觀察到卵巢后方的動靜脈。具體見圖1～10。

圖1 乏情期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.1 Diestrus，dimensional ultrasound image of right ovary

圖2 乏情期右側(cè)卵巢彩色多普勒聲像圖Fig.2 Diestrus，dimensional Doppler ultrasound image of right ovary

圖3 發(fā)情前期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.3 Proestrus，dimensional ultrasound image of right ovary

圖4 發(fā)情前期右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.4 Proestrus，Doppler ultrasound image of right ovary

圖5 發(fā)情期右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.5 Metestrous，dimensional ultrasound image of right ovary

圖6 發(fā)情期右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.6 Metestrous，Doppler ultrasound image of right ovary

圖7 右側(cè)卵巢配種7 d二維聲像圖Fig.7 Right ovary dimensional ultrasound image at breeding 7 d

圖8 右側(cè)卵巢配種7 d多普勒聲像圖Fig.8 Right ovary Doppler ultrasound images at breeding 7 d

圖9 配種14 d右側(cè)卵巢二維聲像圖Fig.9 Breeding 14 d，two-dimensional ultrasound images of right ovary

圖10 配種14 d右側(cè)卵巢多普勒聲像圖Fig.10 Breeding 14 d，Doppler ultrasound image of right ovary

2.2 卵巢變化

不同生殖時期的卵巢進行實時監(jiān)測，測量左右兩側(cè)卵巢大小與生殖時期的相關(guān)規(guī)律，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.3 子宮聲像圖變化

定位于恥骨前緣，在膀胱直腸三角區(qū)找到子宮，分別進行橫切面與縱切面掃查，觀察發(fā)情間期、發(fā)情期、妊娠第16、23天時母犬子宮二維灰階超聲聲像圖特征。結(jié)果顯示：發(fā)情前期子宮二維聲像圖回聲無明顯變化，呈低回聲強度勻質(zhì)結(jié)構(gòu)，如圖11；發(fā)情期時，子宮變化不明顯，但可觀察到子宮開始增粗，子宮壁開始變厚，如圖12；妊娠第16天，子宮體積變大，子宮腔擴張內(nèi)部開始出現(xiàn)條帶狀液性暗區(qū)，子宮壁開始增厚，如圖13；妊娠第23天(犬一般20 d左右能檢查到孕囊)，檢查發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)有圓形，邊界清晰，回聲較強聲像圖，如圖14。妊娠第29天時可觀察到胎心搏動，胎兒雛形已基本形成。

Table 1 The size of ovary at the genesial cycle(±s)mm

圖11 發(fā)情間期子宮橫切二維聲像圖Fig.11 Diestrus，uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image

圖12 發(fā)情期子宮橫切二維聲像圖Fig.12 Estrus，uterine cross-section of the two-dimensional ultrasound image

圖13 配種16 d子宮矢狀切二維聲像圖Fig.13 Breeding 16 d，uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image

圖14 配種23 d子宮矢狀切二維聲像圖Fig.14 Breeding 23 d，uterine longitudinal section of two-dimensional ultrasound image

2.4 母犬不同生殖時期陰道涂片

根據(jù)超聲檢查結(jié)果，對處于不同生殖時期的母犬進行陰道涂片，染色鏡檢，觀察不同階段陰道涂片中脫落的有核鱗狀上皮細胞比例判定發(fā)情時期，對超聲檢查結(jié)果進行分析。通過顯微鏡觀察顯示：乏情期陰道涂片可見視野內(nèi)幾乎全部為未角化的有核上皮細胞，如圖15；發(fā)情前期陰道涂片可見視野內(nèi)角化的無核上皮細胞增多，約占60%，如圖16；發(fā)情期陰道涂片可見視野內(nèi)角化的無核上皮細胞大量增加，占90%以上，如圖17；發(fā)情后期陰道涂片可見視野內(nèi)未角化的有核上皮細胞增多，視野內(nèi)幾乎不可見角化的無核上皮細胞，如圖18。

大量未角化的有核上皮細胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic圖15 乏情期陰道涂片(400×) GSFig.15 Diestrus smear of vagina

角化的無核上皮細胞增多Keratotic non-nuclei epithelial cells were increased圖16 發(fā)情前期陰道涂片(400×) GSFig.16 Proestrus smear of vagina

大量角化的無核上皮細胞A great quantity of non-nuclei keratotic epithelial cells 圖17 發(fā)情期陰道涂片(400×) GSFig.17 Estrus smear of vagina

2.5 不同時期孕囊變化特征

母犬妊娠后逐漸開始出現(xiàn)孕囊，并且孕囊及胚胎變化呈現(xiàn)一定的規(guī)律。具體數(shù)據(jù)見表2。

大量未角化的有核上皮細胞A great quantity of nuclei epithelial cells aren’t keratotic>

圖18 發(fā)情后期陰道涂片(400×) GSFig.18 Late estrus smear of vagina

3 討 論

在過去的近半個世紀，超聲醫(yī)學取得突飛猛進的發(fā)展，隨著基礎(chǔ)理論研究的深入，儀器性能和檢查方法的改進，超聲圖像的分辨力和清晰度都得到了極大地提高[9]，同時，彩色多普勒技術(shù)的應(yīng)用，可以顯示器官的血液供應(yīng)狀態(tài)及組織器官的發(fā)育過程[10]。近年來，超聲診斷技術(shù)在臨床上應(yīng)用正在飛速發(fā)展，其中B型超聲、彩色多普勒超聲應(yīng)用最為普遍。臨床上有B超對腎組織損傷檢查[11]、腹腔疾病的診斷[12]以及彩色多普勒對肝動脈檢查[13]、超聲引導(dǎo)下穿刺技術(shù)[14]的應(yīng)用等，超聲影像技術(shù)正逐步成為獸醫(yī)臨床上不可或缺的一種重要檢查方法。生殖系統(tǒng)疾病是犬常見的多發(fā)病，特別雌性生殖系統(tǒng)疾病正極大地威脅著動物的生命安全。超聲影像技術(shù)以其獨特的優(yōu)勢在生殖系統(tǒng)檢查和疾病診斷方面發(fā)揮著巨大的作用，如犬隱睪的超聲診斷[15]、犬子宮蓄膿的影像學診斷[16]等，超聲技術(shù)已在寵物臨床上得到了廣泛地應(yīng)用。

表2 妊娠期胚胎大小與超聲所見

Table 2 The size and contents of ultrasound of embryo in the gestational period

妊娠時間/dPregnancydays孕囊大小(x-±s)/mmPregnancysacsize(x-±s)超聲所見Ultrasoundfeatures232．28±0．37可探查到早期孕囊出現(xiàn)2613．38±1．58出現(xiàn)較強回聲的胚胎細胞2921．35±1．66可見初具胎兒形態(tài)的組織3328．05±1．08胎兒頭部和體部已經(jīng)分化3835．02±1．14已經(jīng)出現(xiàn)完整的胎兒形態(tài)4655．60±1．02胎兒的內(nèi)臟器官和肢體完全出現(xiàn)5580．58±1．25骨骼已經(jīng)鈣化有明顯聲影，胎兒已經(jīng)具備出生的基本條件

雌性生殖系統(tǒng)主要包括卵巢和子宮。犬卵巢是產(chǎn)生卵母細胞的器官，同時能分泌雌激素，以促進其生殖器官和乳腺的發(fā)育，發(fā)情期卵巢內(nèi)可見卵泡，由于卵泡細胞的增生、分化及透明帶的生長，卵泡明顯增大[17]，子宮在胎兒著床及后期的生長發(fā)育有著不可替代的作用。為了提高雌性犬生殖效率，本試驗通過對卵巢、子宮及妊娠后胎兒的實時超聲監(jiān)測，找出不同生殖時期雌性生殖器官的影像學變化。試驗中可見超聲條件下卵巢形態(tài)、大小及卵泡大小的變化，經(jīng)過對不同生殖時期卵泡大小的實時監(jiān)測及對比分析，發(fā)現(xiàn)卵巢最小時直徑9 mm，最大時直徑25 mm，大小隨著發(fā)情周期的變化而變化。卵泡最早在發(fā)情前期能夠監(jiān)測到，最小直徑2.5 mm，最大直徑7.9 mm，發(fā)情后期伴有紅體和黃體的出現(xiàn)。發(fā)情間期可以清晰看到黃體的存在，發(fā)情前期黃體逐漸消失并被卵泡取代，通過監(jiān)測發(fā)現(xiàn)母犬卵巢內(nèi)卵泡個數(shù)一般在5～9，并且卵泡大小不一，同側(cè)卵巢內(nèi)相同時期卵泡大小相差不超過3 mm。彩色多普勒超聲條件下，發(fā)情間期卵巢內(nèi)幾乎不可見血流，發(fā)情前期卵泡開始出現(xiàn)，卵巢內(nèi)血流出現(xiàn)并且較為豐富，圍繞卵泡分布。同時，可看到由后腔靜脈和腹主動脈分出的卵巢動靜脈相互纏繞，彩色多普勒條件下呈紅藍條帶相互交織狀態(tài)進入卵巢。超聲條件下對子宮在各個發(fā)情時期形態(tài)變化監(jiān)測時發(fā)現(xiàn)，子宮體大體位于最后一對乳房頭側(cè)，并且在距離其1 cm左右時開始分叉，形成左右子宮角。不同時期聲像圖中可見發(fā)情間期和發(fā)情前期的形態(tài)變化不大，進入發(fā)情后期，子宮形態(tài)開始發(fā)生變化，子宮壁增厚、回聲增強及子宮腔形成可見有液性暗區(qū)。

試驗發(fā)現(xiàn)超聲監(jiān)測比格犬孕囊最早可在配種后23 d，監(jiān)測到孕囊第一周時間內(nèi)其發(fā)育較快，體積不斷增大，短短2 d內(nèi)胚胎細胞已逐漸分化形成各功能區(qū)。胎兒發(fā)育早期變化較大，后期觀察中變化較小，胎兒在發(fā)育過程中體積變大、骨骼逐漸鈣化，形成聲影。彩色多普勒條件下，妊娠早期子宮內(nèi)無明顯變化，不能探查到血管，僅能觀察到沿子宮前進的子宮動靜脈，直至孕囊出現(xiàn)以后，子宮內(nèi)血流逐漸豐富。當孕囊內(nèi)出現(xiàn)胚胎細胞時，可見細胞團與囊壁接觸區(qū)有小血管出現(xiàn)，隨著胚胎的不斷發(fā)育，心肌細胞開始出現(xiàn)并能監(jiān)測到搏動頻率在200 次·min-1以上。胚胎發(fā)育38 d時，可見其基本的血管網(wǎng)絡(luò)已經(jīng)形成，隨著胎兒發(fā)育，次級血管開始出現(xiàn)。妊娠55 d時，胎兒的血管網(wǎng)絡(luò)已基本發(fā)育完善，不再有明顯變化。

超聲影像技術(shù)對犬不同生殖時期的不同生殖器官實時監(jiān)測，同時將獲取的聲像圖與陰道涂片進行對比觀察分析，使得通過超聲技術(shù)鑒定雌性犬發(fā)情狀態(tài)的方法更加成熟可靠。超聲技術(shù)有著無損傷、實時性、攜帶方便和操作簡單[18]的優(yōu)越性，未來寵物臨床上運用超聲技術(shù)鑒定發(fā)情周期必將不斷得到推廣應(yīng)用。

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(編輯 白永平)

The Ultrasound Image Change of Pregnant Bitches of the Reproductive System at Different Time

WANG Lü-lin1，HE Ya-ge1，GAO Xin-yu2，XIN Chun-yan1，GAO Pei-bin1，DENG Li-xin1*

(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2.ThePeople’sGovernmentofMolingTownofXiangchengcity，HenanProvince，Xiangcheng466232，China)

The aim of the present study was to explore the ultrasound image features of pregnant bitches of the reproductive system at different times.In our study，8 standard test Beagles are selected，and the color Doppler instrument was used.The uterus，ovaries and fetus were observed by real-time tracking and monitoring under the two-dimensional gray-scale and color Doppler ultrasound mode.The ultrasound images we got were summarized and analyzed，meanwhile the bitches testing by vaginal smear microscopy.The result of ultrasound image showed that the ovaries and uterus’s volume increased significantly，the line was clear，the follicle was obviously，and the womb milk like ‘thin’ in uterine cavity was visible during the heat period.We tested the fetus at the 23 d of gestation by ultrasound.The blood stream of ovaries was obviously and plentiful，the arteriovenous fistula of ovary from the back cavity vein and the abdominal aorta twisted together as red and blue strap interlace，and flow into the ovary during the estrus by color Doppler ultrasound machine；the blood of uterine was more plentiful gradually after pregnancy，internal diameter and signal intensity of blood vessel rising quickly.The size，blood stream distribution can change during physiology period，and real-time monitored regular pattern of ultrasound image of the ovary，uterus and embryo by ultrasound will provide reference information for bitches reproductive system development and clinical examination.

Doppler ultrasound；B model ultrasound；bitches；reproductive system；ultrasound image

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.08.023

2014-11-04

王綠林(1988- )，河南項城人，碩士生，主要從事動物超聲影像學研究，E-mail：wll6666666@163.com

*通信作者：鄧立新，副教授，E-mail：lx8198@sohu.com

S854.7

A

0366-6964(2015)08-1455-08