竇建衛(wèi) 陳 曦 劉素香 吳文平 徐敏妮 楊利生 白麗君 王顯著

西安市中醫(yī)醫(yī)院(西安710021)

化痰理氣口服液的祛痰作用與急毒實(shí)驗(yàn)研究*

竇建衛(wèi)△陳 曦△劉素香▲吳文平 徐敏妮 楊利生 白麗君 王顯著

西安市中醫(yī)醫(yī)院(西安710021)

目的：評價化痰理氣口服液的祛痰作用并進(jìn)行急毒實(shí)驗(yàn)。方法：采用小鼠酚紅祛痰實(shí)驗(yàn)觀察其祛痰作用，急毒實(shí)驗(yàn)測定化痰理氣口服液對小鼠的最大給藥量。結(jié)果：化痰理氣口服液能顯著增加昆明小鼠氣管酚紅排泌量，以最大濃度，最大給藥體積，測得化痰理氣口服液的最大給藥量為252 g 生藥/kg，相當(dāng)于推薦人臨床用量的504倍。結(jié)論：化痰理氣口服液具有明顯的祛痰功效，且急性毒性小。

化痰理氣口服液源于全國名老中醫(yī)黃保中主任驗(yàn)方蔞貝枳桔二陳湯，由全栝蔞、浙貝母合枳術(shù)丸、六君子湯化裁而成，具有健脾益氣，化痰散結(jié)，寬胸理氣，止咳平喘之功效[1-2]。臨床療效確切，本實(shí)驗(yàn)通過祛痰的藥效學(xué)試驗(yàn)評價其作用，為進(jìn)行院內(nèi)制劑及新藥的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。并通過觀察小鼠經(jīng)口24 h內(nèi)多次灌胃給予化痰理氣口服液流浸膏所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，為臨床安全用藥提供依據(jù)。

1 小鼠酚紅祛痰實(shí)驗(yàn) 1.1 材料 1.1.1 藥物與試劑：化痰理氣口服液(批號：20130301)。鹽酸氨溴索沐舒坦片(批號: H 20030360 )，酚紅(批號： 20131225)伊文思藍(lán)(批號：WC20090209)，醋酸(批號：20100329)，0.9%氯化鈉注射液(批號：A100712031)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物：72只昆明小鼠，SPF級，體重18～22 g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證：SCXK(陜)2012-003號，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(陜)2012-005。

1.1.3 主要儀器：Stat Fax 2100型分光光度計(Awareness Technology Inc., Palm City, FL, USA)，JM型電子天平(余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法[3]1.2.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)酚紅曲線[4]：準(zhǔn)確稱取酚紅200 μg，加5%碳酸氫鈉溶液溶解至2 mL，配成1 mL含100 μg的溶液，然后順次稀釋成每毫升含7.0、5.0、3.0、2.0、1.5、1.0、0.5 μg酚紅的溶液，利用分光光度計，測546 nm處的OD值。以酚紅劑量為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)所測出的OD值，即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出各鼠酚紅的排泌量。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟:72只昆明小鼠，體重18～22 g，雌性。隨機(jī)分為6組，即模型對照組、陽性藥鹽酸氨溴索組(0.27 g/kg)、橘紅丸組(4.8 g/kg)化痰理氣口服液高、中、低劑量組(3.0 g/kg,1.5 g/kg,0.75 g/kg)，每組12只。各組小鼠按20 mL/Kg灌胃給藥，共7d,1d1次。其中模型對照組給等體積蒸餾水。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水12 h，末次給藥后0.5 h，各小鼠按劑量20 mL/Kg腹腔注射5%酚紅溶液，注射后0.5 h，頸椎脫臼處死小鼠，仰位固定于手術(shù)板上，剪開頸前皮膚，剝離氣管周圍組織，分離氣管，剪下甲狀軟骨下緣至氣管分叉處的氣管，用0.5 mL 5%碳酸氫鈉溶液沖洗氣管，連續(xù)3次，合并洗出液，用分光光度計測546 nm波長處的光密度(OD)值，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)前制定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出氣管沖洗液中酚紅濃度。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1.4.1 酚紅排泌的標(biāo)準(zhǔn)曲線:酚紅排泌標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.1376X+0.0608(R=0.9823)，結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，達(dá)到準(zhǔn)確測定酚紅含量的第1步。

1.4.2 化痰理氣口服液對小鼠氣管酚紅排泌的作用:與模型對照組相比，鹽酸氨溴索組、橘紅丸組、化痰理氣口服液高、中劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增多(P<0.01)。提示，鹽酸氨溴索、橘紅丸組、化痰理氣口服液高、中劑量均使昆明小鼠呼吸道酚紅排泌量增多，見表1。

表1 化痰理氣口服液對小鼠氣管酚紅排泌的作用

2 急毒實(shí)驗(yàn) 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 2.1.1 受試藥物：化痰理氣口服液，試驗(yàn)時用流浸膏(批號：20130301)。

2.1.2 試驗(yàn)動物及飼養(yǎng)環(huán)境：SPF級KM小鼠40只，體重為18～22 g，雌雄各半。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證：SCXK(陜)2012-003號，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(陜)2012-005。動物購入實(shí)驗(yàn)室后，雌雄分開，分籠飼養(yǎng)于SPF實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。動物適應(yīng)性馴養(yǎng) 3 d。小鼠籠具及托盤清洗消毒后使用。動物飲水、進(jìn)食自由，飼料為滅菌全價營養(yǎng)顆粒飼料。動物飼養(yǎng)條件：室溫23±2oC，相對濕度40%～70%，每天光照12h。

2.2 試驗(yàn)方法[5]取KM小鼠，40只，雌雄各半，分性別隨機(jī)分為2組，即空白對照組和給藥組，每組20只，雌雄各10只?？瞻讓φ战M灌胃生理鹽水，每10 g體重灌胃0.4 mL；給藥組灌胃化痰理氣口服液流浸膏2.1g生藥/mL，每10 g體重灌胃0.4 mL，1日內(nèi)給藥3次，給藥間隔6 h。給藥首日每次給藥后立刻、2 h、4 h、6 h連續(xù)觀察動物活動情況，包括小鼠的呼吸、運(yùn)動、反射、眼瞼指征、唾液分泌、豎毛、肌張力、大便、尿液、皮膚反應(yīng)，以及中毒或死亡等情況，見表2。給藥后第2d～14d，每天觀察一般表現(xiàn)及死亡情況，連續(xù)觀察14d。7d時稱體重，14d稱體重(JM型電子天平，余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司)后處死小鼠，將中毒死亡動物及處死動物尸檢，肉眼觀察主要臟器的病變情況，若有異常變化，進(jìn)行病理組織學(xué)觀察記錄體重變化。

表2 動物急性毒性試驗(yàn)觀察表

2.3 試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)口灌胃給予化痰理氣口服液流浸膏日劑量合計252 g生藥/kg，給藥當(dāng)日小鼠活動減少，大便呈黑褐色，便稀軟，次日排便恢復(fù)正常。兩組小鼠呼吸正常，行為活動與自主活動未見異常，角膜、翻正、牽張反射存在，無流淚、無眼球突出。14d觀察期間，動物一般情況良好，攝食正常，體重增長，毛色光滑，尿液無明顯變化。整個實(shí)驗(yàn)期間未見動物死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，處死動物，解剖并觀察心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、氣管、食管、胃、十二指腸、結(jié)腸、膀胱、睪丸、子宮、卵巢等臟器，未見到明顯的病理性改變。實(shí)驗(yàn)期間空白對照組和給藥組體重增長一致，兩組動物分性別進(jìn)行比較，體重增長未見差異(P>0.05)，結(jié)果見表3。提示本實(shí)驗(yàn)測得最大給藥劑量為252g生藥/kg，相當(dāng)于推薦人臨床日用劑量的504倍。

表3 化痰理氣口服液急性毒性小鼠體重表

3 討 論 本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的氣管酚紅排泌量實(shí)驗(yàn)來評價化痰理氣口服液的化痰作用。酚紅是一種顯示劑，腹腔注射后，可通過血液循環(huán)達(dá)到肺部，可通過氣管的分泌作用在氣管壁檢測到酚紅，因此酚紅排泌量能夠反映氣管的排痰量。小鼠酚紅祛痰實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，化痰理氣口服液高、中劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增加，顯示出本品具有明顯的化痰功效。急毒試驗(yàn)以最大濃度，最大給藥體積，測得化痰理氣口服液的最大給藥劑量為252 g生藥/kg，相當(dāng)于推薦人臨床用量的504倍。試驗(yàn)結(jié)果表明化痰理氣口服液急性毒性小。

[1] 楊利生，徐敏妮，王婷霄，等. 化痰理氣口服液配合吸入劑治療慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期臨床研究[J].陜西中醫(yī)，2015，36(3)：302-304.

[2] 徐敏妮，劉素香.樓貝枳桔二陳湯治療慢性阻塞性肺疾病痰氣交阻證療效觀察[J].陜西中醫(yī)，2013，33(12)：1573-1574.

[3] 徐叔云,卞入濂,陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1359-1363.

[4] 魏 偉,吳希美,李元建.藥理試驗(yàn)方法[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:1174-1191.

[5] 陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:107-110.

(收稿2015-07-10；修回2015-08-31)

*陜西省中醫(yī)藥管理局課題(13-LCO32)

@化痰理氣口服液 動物，實(shí)驗(yàn) 小鼠

R271.11

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.12.055

國家級名老中醫(yī)黃保中工作室

△西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院(西安 710061)

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