郝改梅 韓 靜 徐 濤 何 潔 吳 晏 武志黔 袁悅瑩 呂甜甜 王宏亮 王 偉 畢力夫

北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院(北京 100029)

·實驗研究·

復方血栓通膠囊對糖尿病周圍神經病變的影響*

郝改梅 韓 靜△徐 濤▲何 潔 吳 晏△武志黔 袁悅瑩△呂甜甜 王宏亮 王 偉 畢力夫■

北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院(北京 100029)

目的：觀察復方血栓通膠囊對糖尿病大鼠周圍神經病變的療效并探討其作用機制。方法：選取SD 大鼠32只，禁食12 h，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素( 65 mg/kg) 誘導糖尿病模型，造模后將大鼠隨機分為模型組和復方血栓通膠囊組。另選取11只大鼠做為正常對照組。每組每天干預1次，12周后檢測大鼠的熱痛潛伏期、神經血流量、微循環(huán)血流灌注量及神經傳導速度，并觀察坐骨神經病理變化。結果：與正常組比較，模型組大鼠熱痛潛伏期延長，神經血流量減少，神經傳導速度減慢；髓鞘松解；耳部及上肢末端微循環(huán)血流灌注量明顯減少；下肢末端血流灌注量減少。與模型組比較，復方血栓通膠囊組大鼠熱痛潛伏期縮短，神經血流量增大，神經傳導速度增快，神經束膜整齊，耳部及上肢末端微循環(huán)血流灌注量明顯增加，下肢末端血流灌注量增加。結論：復方血栓通可能是通過增加周圍神經組織的微循環(huán)灌注量，對糖尿病大鼠周圍神經病變進行改善。

糖尿病周圍神經病變( diabetic peripheral neuropathy,DPN)是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，也是導致足部潰瘍和截肢的重要原因之一，其發(fā)病率高，受累神經廣泛。目前已經證明坐骨神經血管舒縮功能紊亂，血管通透性增加，血流灌注減少是糖尿病周圍神經病變的重要因素之一[1]。本研究通過觀察復方血栓通膠囊對糖尿病大鼠熱痛潛伏期、神經血流速度、微循環(huán)血流灌注量及坐骨神經病理變化的影響，探討其對糖尿病周圍神經病變的防治作用及可能機制。

1 材 料

1.1 動 物 SPF級雄性SD大鼠32只，體重160～190 g。購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號 SCXK(京) 2012-0001。動物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學實驗動物中心，SPF實驗室，室內溫度為20 ℃～25℃，相對濕度為45 %～70 %，換氣次數(shù)為10～15 次/h，12h光照維持，晝夜循環(huán)。動物自由攝食飲水，顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2 藥品與試劑 復方血栓通膠囊(國藥準字Z20030017)，制成 0.105 g/mL水溶液。鏈脲佐菌素( streptozotocin,STZ)，Sigma S0130。Optium 試紙(雅培糖尿病護理有限公司)。

1.3 儀 器 Optium Xceed“安妥超越”血糖儀；RB-200 智能熱板儀；BH-2顯微照相系統(tǒng)；激光多普勒血流儀 PeriFlux 5000；激光散斑血流監(jiān)測視頻系統(tǒng)(型號:PeriCam PSI systerm)；多通道生理信號采集處理系統(tǒng)(型號：RM-6240BD)。

2 方 法

2.1 動物模型的建立、分組與給藥 SD大鼠適應性喂養(yǎng)2周后，禁食12h，STZ溶解于0.1mmol/L檸檬酸鈉溶液(低溫現(xiàn)配，pH4.5)，隨機選取大鼠21只，以65mg/kg的劑量予STZ一次性腹腔注射，誘導糖尿病模型。另選取11只作為正常對照組，腹腔注射等劑量的溶劑(0.1mmol/L檸檬酸鈉溶液，pH4.5)。一周后尾靜脈采血檢測血糖，以禁食6h血糖≥16.7mmol/L為成模標準。STZ造模20周后，將糖尿病模型大鼠按照體重和血糖隨機分為模型組和復方血栓通膠囊組，開始藥物干預。復方血栓通膠囊組每天給藥一次，劑量1.05g /kg(相當于臨床用藥量的14倍灌胃)，正常組和模型組用與中藥組等容的蒸餾水灌胃，持續(xù)12周。

2.2 檢測指標及方法

2.2.1 熱痛潛伏期：將大鼠放入溫度設定為55℃的熱板儀中，記錄從大鼠雙后足接觸到熱板開始，到因其足部受到熱刺激出現(xiàn)第一次舔后足反應的時間，即熱痛潛伏期，以此作為疼痛反應指標。

2.2.2 神經血流量：將大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉 50 mg/kg麻醉，俯臥位固定，剪除一側臀部和下肢的皮毛，暴露大鼠臀部的坐骨神經，使用PeriFlux 5000型彩色超聲多普勒顯像儀，用探針型探頭尖端輕輕接觸神經，測定神經血流量。

2.2.3 神經傳導速度：大鼠麻醉后，刺激電極插入大鼠的坐骨切跡處，記錄電極分別插入大鼠第1、2腳趾間和第2、3腳趾間皮膚下。設置刺激參數(shù)為：采集頻率4k，濾波頻率10k，正電壓刺激，刺激波寬1 ms，波幅10 v，掃描速度1 s/div。記錄大鼠的神經傳導的時間，并測量刺激電極與記錄電極之間的距離，用距離除以傳導時間，計算出神經傳導速度。每只大鼠測量3次求出平均值。

2.2.4 微循環(huán)血流灌注量：使用PeriCam PSI激光散斑血流監(jiān)測視頻系統(tǒng)，進行耳部、上下肢末端體表血流圖的記錄、分析、處理。激光多普勒血流成像儀(LDPI)其輸出結果以單位時間內流量單位PU(灌注量)值表示，PU值越大表示微循環(huán)缺血程度越低。

2.2.5 病理切片：取大鼠右側坐骨神經，長度約1 cm，多聚甲醛充分固定后，乙醇梯度脫水，石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察。

2.3 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件分析比較，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結 果

3.1 熱痛潛伏期 與正常組比較，模型組熱痛潛伏期延長(P<0.001)；與模型組比較，復方血栓通膠囊組熱痛潛伏期縮短(P<0.05) ，見表 1。

3.2 神經血流量 與正常組比較，模型組神經血流量明顯減少(P<0.001)；與模型組比較，復方血栓通膠囊組神經血流量增加(P<0.05) ，見表 1。

3.3 神經傳導速度 與正常組比較，模型組大鼠的神經傳導速度明顯減慢(P<0.01) 。與模型組比較，復方血栓通膠囊組大鼠神經傳導速度明顯增快(P<0.01 ) ，見表 1。

表1 大鼠間熱痛潛伏期、神經血流量及神經傳導速度的比較

注：與正常組比較，△P<0.001,▲P<0.01；與模型組比較，□P<0.01，■P<0.05

3.4 微循環(huán)血流灌注量 與正常組比較，模型組大鼠耳部及上肢末端微循環(huán)血流灌注量明顯減少(P<0.05)，下肢末端血流灌注量減少(P>0.05)；與模型組比較，復方血栓通膠囊組耳部及上肢末端微循環(huán)血流灌注量明顯增加(P<0.01或P<0.05)，下肢末端血流灌注量增加(P>0.05)，見表2。

表2 大鼠微循環(huán)血流灌注量比較

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.01，□P<0.05

3.5 坐骨神經病理情況 正常組神經束膜較為整齊，厚度均勻一致，無明顯增厚，神經纖維排列較為整齊，有髓神經纖維的數(shù)目未見減少。模型組神經束膜可見明顯增厚，厚度不均一；神經纖維排列紊亂，軸索可見節(jié)段性增粗，髓鞘松解，有髓神經纖維的數(shù)目減少。復方血栓通膠囊組神經束膜整齊，厚度一致，神經纖維排列比較整齊，有髓纖維數(shù)目略減少，見圖 1 。

4 討 論

DPN嚴重危害糖尿病患者的身體健康和生活質量，而目前臨床尚無十分有效的治療方法,DPN的發(fā)病機制有很多，其中微循環(huán)障礙是關鍵環(huán)節(jié)之一[2]。周圍神經的血液供應多來自于鄰近血管,神經組織自身調節(jié)血液供應的能力非常有限，一旦微血管發(fā)生病變，將會引起缺氧惡性循環(huán)，導致神經病理改變[3]。病理研究顯示，糖尿病導致微血管壁基底膜增厚，內皮細胞腫脹，血管管腔狹窄，血流阻力增大，從而導致神經灌注量減少和神經內膜缺氧，進而出現(xiàn)神經的變性壞死。因此，在研究周圍神經病變時有必要對神經血液供應進行深入研究。

中醫(yī)文獻對糖尿病周圍神經病變沒有確切的記載和病名，但根據(jù)其臨床表現(xiàn)，可將其歸屬于“消渴”合并“痹證”、“痿證”、 “血痹”、“脈痹”等范疇，2010年國家中醫(yī)管理局首次把糖尿病周圍神經病變定名為“消渴病痹癥”[4]。此DPN的治療主要從瘀論治，以活血通脈為大法，結合益氣、養(yǎng)血、滋陰以扶正，使血脈暢通，麻痛消減。

復方血栓通膠囊由三七、黃芪、丹參、玄參四味藥物組成。三七通脈行瘀，黃芪益氣補虛，丹參涼血活血，祛瘀止痛，玄參養(yǎng)陰生津，全方具奏活血化瘀、益氣養(yǎng)陰之效。目前研究發(fā)現(xiàn)，復方血栓通膠囊有擴張血管，降低血液黏度，清除氧自由基，抑制脂質過氧化，提高抗缺氧能力，抗血栓形成，促進血栓溶解，改善微循環(huán)等作用[5]。本實驗中，模型組大鼠熱痛潛伏期延長，同時神經血流量減少，神經傳導速度減慢，四肢末端及耳部血流灌注量減少，坐骨神經病理觀察可見神經纖維紊亂、髓鞘松解等，表明糖尿病大鼠坐骨神經病變已形成。與模型組比較，復方血栓通膠囊組大鼠熱板反應潛伏期縮短，神經血流量增加，神經傳導速度增快，四肢末端及耳部血流灌注量明顯增加；病理觀察可見神經束膜整齊，厚度一致，神經纖維大部分排列整齊，結果提示復方血栓通膠囊對DPN有明顯的改善作用。本實驗中模型組下肢末端血流灌注量略低于正常組和血栓通組，但差異無統(tǒng)計學意義，考慮與糖尿病模型組大鼠部分后足底部皮膚因感染出現(xiàn)充血水腫，導致局部血流灌注量增高有關，這是今后實驗應注意避免的干擾因素。

綜上所述，復方血栓通膠囊對DPN有較好的療效，其機制可能是通過促進機體血液循環(huán)、增加周圍神經組織的微循環(huán)灌注量，改善其缺血、缺氧狀態(tài)，促進受損神經組織的營養(yǎng)代謝及其功能的恢復，從而起到保護坐骨神經、延緩糖尿病周圍神經病變的作用。

[1] 趙紅燕.肢體缺血預適應在糖尿病周圍神經病變治療中的應用效果觀察[D].天津：天津醫(yī)科大學,2013.

[2] 張世有,張 雯.糖尿病周圍神經病變發(fā)病機制及治療進展[J].中國老年保健醫(yī)學,2014,12(3): 67-69.

[3] 呂翠巖.糖痹康干預糖尿病周圍神經病變臨床及作用機制研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學,2014.

[4] 沈 璐,胡筱娟,李 婷,等.糖尿病周圍神經病變與血瘀證的相關性探討[J].陜西中醫(yī),2013,34(5): 577.

[5] 劉 鵬,李小娟.李小娟.調營衛(wèi)化痰瘀論治糖尿病周圍神經病變經驗擷菁[J].陜西中醫(yī),2014,35(1): 70-71.

(收稿2015-01-18；修回2015-03-06)

The effect of compound Xueshuantong capsule on diabetic peripheral neuropathy

Basic Medical College of Beijing University of Chinese Medicine (Beijing 100029)

Hao Gaimei Han Jing Xu Tao et al

Objective:To observe the effect of compound Xueshuantong(XST) capsule on diabetic peripheral neuropathy(DPN) in rats and to explore its mechanism of action.Methods:32 SD rats were selected and fasted for 12h.Streptozotocin(STZ,65mg/kg) was intraperitoneally injected to rats to induce diabetes.The diabetic rats were randomly divided into the model group and the XST group.Other 11 rats were recruited as the normal control group.The intervention was carried out once daily and continued for 12 weeks.The threshold of hot pain test,nerve blood flow,microcirculatory perfusion,nerve conduction velocity and pathological changes were observed.Results: Compared with the normal group,the latency of hot pain was delayed,the nerve blood flow was reduced and the conduction velocity was decreased in the model group.Myelin sheaths was loose.The microcirculatory perfusion of ear and upper end was decreased; while the perfusion of lower extremities reduced.Compared with the model group,the latency of hot pain was shortened,the nerve blood flow was reduced and the conduction velocity was increased in XST group.The perineurium was in order.The microcirculatory perfusion of ear and upper end was increase,while the perfusion of lower extremities induced.Conclusion: XST can improve the DPN in rats by increasing the microcirculatory perfusion of peripheral nerve tissue.

Diabetic peripheral neuropathy/traditional Chinese medicine therapy Animal experimentationt Rat @Xueshuantong capsule

*國家科技部“十二五”支撐計劃項目( 2012BAI29B07)

北京中醫(yī)藥大學研究生自主課題項目( 2014-JYBZZ-XS-004)

△北京中醫(yī)藥大學科研實驗中心(北京100029)

▲北京王府中西醫(yī)結合醫(yī)院神經內科(北京102209)

■通訊作者：內蒙古醫(yī)學院(呼和浩特 010059)

糖尿病神經病變/中醫(yī)藥療法 動物實驗 大鼠 @復方血栓通膠囊

R587.1

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.055