范少敏 史亞軍 周玉凱 王 卉 鄧 輝 張小飛

陜西中醫(yī)學院藥學院(咸陽 712046)

·方藥縱橫·

丹參總酚酸鼻用原位凝膠的制備工藝研究*

范少敏 史亞軍△周玉凱 王 卉 鄧 輝 張小飛

陜西中醫(yī)學院藥學院(咸陽 712046)

目的：優(yōu)化丹參總酚酸提取物鼻用原位凝膠的制備工藝。方法：采用單因素結(jié)合正交試驗法，以膠凝溫度為評價指標，對處方中泊洛沙姆P407、泊洛沙姆P188、PEG6000的用量進行考察。結(jié)果：最終確定鼻用凝膠的制備工藝為：取0.84g藥物，加入60mL三乙醇胺溶液(0.1%)攪拌使溶解，加入16g泊洛沙姆P407、1g泊洛沙姆P188、1g PEG6000，于冰浴條件(4℃)下，磁力攪拌使其分散均勻，加蒸餾水調(diào)整總量至100mL，然后置于4℃冰箱中保存24h，即得澄清溶液。結(jié)論：優(yōu)選的工藝適用于丹參總酚酸提取物鼻用原位凝膠的制備。

丹參是臨床常用的活血化瘀中藥，也是諸多治療缺血性疾病中藥制劑，如丹紅注射液、丹參注射液的主要組成藥物，丹參能顯著改善微循環(huán)，對抗腦缺血損傷，對腦缺血及缺血再灌注損傷有保護作用[1]。有研究報道，丹參制劑應用于中風的治療，取得良好效果?；诘⒅苿┲饕钥诜妥⑸涞默F(xiàn)狀，口服制劑生物利用度較低，而注射方式存在潛在的風險，而鼻腔給藥作為一種傳統(tǒng)的給藥方式沿用至今[2]。王清任在《醫(yī)林改錯·腦髓說》中有 “鼻通于腦,所聞香臭歸于腦”的表述，現(xiàn)代解剖學發(fā)現(xiàn)，鼻腔是大腦與外界相通的唯一部位，鼻腔與中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有天然聯(lián)系，存在一條特殊的“鼻腦通路”，可將藥物直接遞送至腦部，避免了首過效應和血腦屏障的阻礙，有效改善藥物的腦部吸收[3]。現(xiàn)代藥劑學已將鼻腔給藥作為腦靶向制劑的重要手段。原位凝膠作為一種新型凝膠劑，基于特殊的相轉(zhuǎn)變過程，能有效改善制劑在施藥部位的滯留時間，增加藥物的吸收，特別適用于鼻腔給藥制劑。因此，本研究擬將丹參有效部位制成原位凝膠遞藥，通過鼻腔施藥，從而降低臨床風險，顯著提高藥物的腦組織生物利用度。

1 儀器與試藥

5-2型數(shù)顯恒溫磁力攪拌儀；BP61型sartorius電子分析天平；JM-B5002電子天平；精密溫度計(精度0.1℃)。 丹參總酚酸總提取物為自制、泊洛沙姆407(批號：50011254)；泊洛沙姆188 (批號：50011388)；聚乙二醇6000(PEG6000)；三乙醇胺，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1丹參總酚酸提取物制備 取丹參，切成小段，加水于80℃提取兩次，合并提取液，濾過，濾液于60℃減壓濃縮至相對密度為1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使藥液中的含醇量達到70%，靜置12h，取上清液，于60℃條件下，減壓回收乙醇并濃縮，將稠膏置減壓干燥，即得[4]。

2.2 原位凝膠制備工藝及評價指標 將上述提取物溶于三乙醇胺溶液(0.1%)中，分別加入泊洛沙姆407(P407)、泊洛沙姆4188(P188)、聚乙二醇6000(PEG6000)，在4℃條件下置于磁力攪拌上使均勻分散，再將其在4℃冰箱中放置24h，使其完全分散溶解，即得。

考慮到本制劑的使用環(huán)境，以膠凝溫度為評價指標，根據(jù)文獻[8]，采用攪拌子法進行測定，即在玻璃容器中加入相關(guān)凝膠溶液一定量，置于磁力攪拌器上，投入攪拌子(測定時轉(zhuǎn)速控制在300rpm)，以精密溫度計計量體系溫度,保持體系中的溫度持續(xù)緩慢升高(溫度升高頻率為1～2℃ /min)，觀察體系中的變化，當磁力攪拌的轉(zhuǎn)子停止轉(zhuǎn)動的溫度即為膠凝溫度?？紤]到鼻腔環(huán)境溫度為32℃～34℃，過低的膠黏溫度會導致制劑儲存和使用不便，因此采用制劑膠凝溫度與31.5℃的差值作為評價指標，差值越小越優(yōu)。

2.3 單因素考察 P407作為常用的制備原位凝膠劑材料，具有受熱反向膠凝的性質(zhì)，即較低溫度時為澄清溶液，可自由流動，超過一定溫度后黏度迅速增加，流動性迅速降低而轉(zhuǎn)變成半固體透明凝膠，再以適量的P188和PEG6000對膠凝溫度進行微調(diào)，從而形成膠凝溫度適合鼻腔環(huán)境的原位凝膠制劑。

2.3.1 泊洛沙姆P407濃度對凝膠形成的影響：按照上述制備工藝制備凝膠(藥物0.2g，P188 1g，PEG6000 1g)，洛沙姆P407用量分別為14%、15%，16%、18%、20%、 22%、24%，利用恒溫攪拌器在冰浴條件下攪拌使分散均勻，然后置于4℃冰箱中保存24 h，使其充分溶解，次日，在電磁攪拌器上加熱，精密控制溫度。按上述測定膠凝溫度方法測定，記錄形成凝膠的溫度。結(jié)果表明，當體系中泊洛沙姆P407的濃度大于15%時，體系可轉(zhuǎn)變成半固體狀的凝膠態(tài)，不同處方凝膠的膠凝溫度隨著濃度的升高而降低，根據(jù)鼻腔溫度，暫定用量為15%～17%。

2.3.2 泊洛沙姆P188濃度對凝膠形成的影響：P188可起到調(diào)節(jié)膠凝溫度的作用，設(shè)定P188的濃度為1%，2%，3%，4%，5%，P407比例為16%，其余條件同上制備凝膠，測定膠凝溫度。結(jié)果表明，凝膠的成型與體系中泊洛沙姆P188濃度有較大關(guān)系，膠凝溫度與其濃度呈正相關(guān)，根據(jù)鼻腔溫度，暫定泊洛沙姆P188的含量控制在3%以內(nèi)。

2.3.3 聚乙二醇PEG6000對凝膠形成的影響：設(shè)定PEG6000的量為1%，1.5%，2%，3%，4%，P188含量為2%，其余條件同上，按照上述工藝制備凝膠，測定膠凝溫度。實驗結(jié)果表明，原位凝膠的成型受PEG6000影響顯著，體系的膠凝溫度隨著其濃度的變大而升高；當體系中聚乙二醇6000的比例為3%時，體系失去膠凝能力，因此，設(shè)定PEG6000控制在2%以內(nèi)。

2.4 正交試驗優(yōu)選 進一步通過正交試驗對上述基質(zhì)進行優(yōu)化，考察P407(A)、P188(B)、PEG6000(C)等三個因素的水平，根據(jù)預實驗結(jié)果，設(shè)定P407三個水平數(shù)15%、16%、17%，P188選用最接近鼻腔溫度三個水平數(shù)：1%、2%、3%，PEG6000設(shè)定為0.5%、1.0%、1.5%。結(jié)合制劑載藥量的要求，研究中投藥量為0.84%。正交試驗表、實驗結(jié)果直觀分析及方差分析見表2、3。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交試驗結(jié)果

根據(jù)直觀分析和方差分析結(jié)果(見表3)，P407對膠凝溫度影響最大，且具有極顯著性， P188和PEG6000對膠凝溫度影響無顯著性，結(jié)合評價指標越小越有的原則，最終確定處方優(yōu)化結(jié)果為A2B1C2，最終確定的三種基質(zhì)的最佳配比為P407含量 16%、P188含量為1%、PEG6000為1% 。

表3 統(tǒng)計學分析結(jié)果

注： F1-0.50(2，2)=19.00，F(xiàn)1-0.10(2，2)=99.0

2.5 驗證試驗 根據(jù)上述單因素和正交試驗研究所確定的最佳工藝參數(shù)，按照制成100mL原位凝膠投料量分別制備三批樣品，測定三批樣品的膠凝溫度。結(jié)果顯示，三批制劑的膠凝溫度分別為31.2℃、30.9℃、31.5℃，結(jié)果理想。

3 討 論

原位凝膠與普通凝膠制備工藝類似，但其在使用過程中的狀態(tài)有著顯著差異，由于輔料的不同，原位凝膠是以溶液態(tài)施藥后，在用藥部位受機體生物因素的影響會發(fā)生相的轉(zhuǎn)變，使其液態(tài)形式轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍腆w態(tài)的凝膠[5]。與傳統(tǒng)凝膠制劑相比，原位凝膠可延長藥物在機體給藥部位的滯留時間，提高藥物的生物利用度，特別適用于黏膜或皮膚施藥系統(tǒng)。原位凝膠依據(jù)施藥后相轉(zhuǎn)變機制的差異分為三種類型，即溫度敏感型(受機體溫度影響而轉(zhuǎn)相)、pH 敏感型(受施藥部位pH環(huán)境變化而轉(zhuǎn)相)以及離子敏感型(受施藥部位離子環(huán)境變化而轉(zhuǎn)相)三種，其中溫度敏感型原位凝膠使用過程中影響因素少，特別適用于鼻腔給藥。

鼻腔給藥作為一種腦靶向遞藥有效的實現(xiàn)方式，有著扎實的中醫(yī)藥、現(xiàn)代醫(yī)學理論基礎(chǔ)。楊開清等觀察了腦醒噴鼻劑治療急性缺血型中風，結(jié)果提示鼻腔給藥能改善缺血性中風患者癥狀，且其是通過溶液劑形式給藥，可以預見，通過原位凝膠技術(shù)可顯著減少藥物損失，增加藥物的吸收時間[6]。目前，臨床尚未見原位凝膠鼻腔給藥制劑形式，本研究期望通過將丹參有效成分制成鼻用原位凝膠，以液體噴霧形式給藥至鼻腔，接觸鼻腔后在體溫作用下轉(zhuǎn)相為半固體凝膠態(tài)，與施藥部位緊密結(jié)合，從而達到延長制劑在機體的黏附時間，顯著提高藥物的生物利用度。

[1] 葉 劍.丹參的藥用成分及藥理作用探析[J].陜西中醫(yī)學院學報，2013，35(5)：71-73.

[2] 張景秋，黨 磊，趙喜慶，等.丹參針劑治療腦出血后半身不遂75例[J].陜西中醫(yī)，2013，33(6)：163-165.

[3] 陳明霞，張玉杰，李維峰，等．重組水蛭素-2鼻腔給藥納米顆粒制備工藝研究[J].中草藥，2012，14(2) :135．

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：373-374.

[5] 仇海鎮(zhèn)，李 娟.原位凝膠的研究進展及其在藥劑學中的應用[J].醫(yī)學信息2010，23(4)：1524-1526.

[6] 李澎灝，王金平.丹參噴鼻劑對實驗性腦缺血的保護作用[J].中國藥師，2013，16(8)：28.

(收稿2015-01-10；修回2015-2-12)

Optimization for preparation technology of Salvia total phenolic acids in situ nasal gel

Pharmacy Faculty,Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Fan Shaoming Shi Yajun Zhou Yukai et al

Objective: To optimize the preparation technology of salvia total phenolic acids in situ nasal gel.Methods:Taking the gelation temperature as index，the amount of poloxamer407,poloxamer188 and polyethylene glycol 6000 were optimized by single factor and orthogonal design.Results:The optimized preparation as follows：salvia total phenolic acids(0.84 g) was dissolved in 0.1% triethylamine solution,P407 (16 g),P188 (1 g),PEG 6000 (1 g) and distilled water were added to reach 100 mL.The mixture was uniformly dispersed in ice bath (4℃) under the magnetic stirring and then was stored at 4℃ in refrigerator for 24 h.The fully dissolved and clear solution was obtained.Conclusion:The optimized preparation technology of salvia total phenolic acids in situ nasal gel is stable and suitable.

Gels Orthogonal test @Salvia total phenolic acids

* 陜西省科技廳科技攻關(guān)計劃項目(2013K12-07-03)

陜西省重點科技創(chuàng)新團隊項目(2013KCT-26)

陜西中醫(yī)學院創(chuàng)新基金項目(14XJZR01)

△通訊作者

凝膠劑 正交試驗 @丹參總酚酸

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.06.045