白 潔 郝武常 郭 冬

西安交大醫(yī)用器材廠 (西安 710061)

愈骨佳膠囊含量測定方法

白 潔 郝武常△郭 冬▲

西安交大醫(yī)用器材廠 (西安 710061)

目的：通過控制愈骨佳膠囊中蘆丁的含量，來控制制劑的質(zhì)量。方法：用高效液相色譜法，以乙腈-甲醇-0.4%醋酸(16∶6∶78)為流動相，檢測波長為360nm。結(jié)果：含測方法針對性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，質(zhì)量可控。結(jié)論：將該方法列入本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

愈骨佳膠囊為醫(yī)院制劑，臨床使用多年。由三棱、莪術(shù)等七味中藥組成，具有破氣行血、散結(jié)止痛功能。用于治療風(fēng)、寒、濕、邪等多種原因引起的髖部疼痛、腫脹、屈伸活動受限、行走困難的功能障礙性疾病，主治股骨頭環(huán)死。處方中三棱為君藥，主要含有揮發(fā)油、黃酮類等成分[1-3]?，F(xiàn)代藥理研究說明三棱黃酮具有抗血小板聚集、抗血栓、鎮(zhèn)痛作用[4]，是其活性部位之一，因此可用三棱總黃酮的量來控制制劑的質(zhì)量，以保證制劑的臨床治療效果。

1 設(shè)施設(shè)備、試藥 1.1 儀器設(shè)備 H-CLSS 超高效液相色譜儀， Waters公司， C18色譜柱(Diamosil 4.6×250mm，5μm)，超聲波清洗機(jī)(H66025T)，TGL-16G離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 試 藥 乙腈、甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈食品有限公司)，其余試劑為分析純(天津富宇化學(xué)試劑廠)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(購于中國生物制品檢定所，批號0021-1205，含測用)，愈骨佳膠囊為我院自制制劑。

2 實驗與結(jié)果 2.1 試驗條件 色譜柱為Diamosil C18；流動相：乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16∶6∶78)，流速：1.0mL/min；檢測波長360nm；柱溫30℃。

2.2 對照品溶液制備[5]精密稱定在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加一定量甲醇溶解，制成每1mL含0.3mg的溶液。

2.3 供試品溶液制備 稱取25g膠囊內(nèi)容物，加甲醇120mL，超聲提取30min，過濾，濾液放于150mL容量瓶中，用洗滌液洗滌并轉(zhuǎn)入到量瓶中，補(bǔ)加甲醇到刻度，搖勻，過濾，濾液留用。

2.4 陰性溶液制備 取缺三棱的供試品內(nèi)容物25g，依據(jù)供試品溶液制備方法制備，得濾液留用。

2.5 空白試驗 按上述實驗條件，吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性溶液各10μL，分別注入高效色譜儀中。在供試品色譜峰中，選擇與對照品色譜峰位置相一致的吸收峰作為含量測定峰，而陰性溶液在此處無吸收峰。

2.6 含量測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效色譜儀中，進(jìn)行測定，得含量結(jié)果。

2.7 方法學(xué)驗證實驗 2.7.1 線性關(guān)系考察:分別吸取對照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL放置于10mL容量瓶中，混勻，加甲醇至刻度，采用上述色譜條件進(jìn)行含量測定。峰面積(A)為縱坐標(biāo)、蘆丁進(jìn)樣量(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其線性回歸方程為A=5.3254×10-8C-5.1585×10-5(R= 0.9998)，蘆丁的含量在2.98μg～23.19μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7.2 精密度試驗方法:精密吸取對照品溶液(0.3mg/mL)10μL注入高效色譜儀中，連續(xù)進(jìn)5次樣，得蘆丁吸收峰面積的RSD<3% ，表明測定方法精確度高。

2.7.3 重復(fù)性試驗方法:取供試品溶液(批號20140301)5份，采用含量測定方法進(jìn)行測定，其蘆丁含量的RSD<3% ，表明該方法重現(xiàn)性好。

2.7.4 穩(wěn)定性試驗 將供試品溶液室溫放置，于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h取樣，測定，得峰面積值，其蘆丁含量的RSD% <3%，顯示供試品液在12h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7.5 回收率試驗:精密稱取已知含量的供試品(批號20140301)適量，分別精密加取不同體積的蘆丁對照品溶液，依據(jù)供試品溶液制備方法制備，進(jìn)行含量測定，回收率在95%～105%(n=6)之間，證明蘆丁的提取和檢測方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定。

2.8 樣品測定 取三批樣品，依據(jù)供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取10μL，注入高效色譜儀中，按外標(biāo)法以峰面積計算蘆丁的含量，結(jié)果見表1。

表1 含量測定結(jié)果

3 討 論 用高效液相色譜法對愈骨佳膠囊中的蘆丁含量進(jìn)行測定，具有方法適當(dāng)、精確度高、專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好的特點。

通過在200～500 nm波長范圍內(nèi)，掃描對照品溶液、供試品溶液顯示在360 nm波長處有最大吸收，陰性溶液無干擾。

以甲醇為供試品的提取液，對比了索氏提取法和超聲提取法，蘆丁含量無太大的差異，鑒于超聲提取法簡單、易操作，因此選用超聲提取法處理供試品較好。

[1] 毛春芹, 陸兔林 . 三棱總黃酮鎮(zhèn)痛作用研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2001，17(5):299-300.

[2] 張恩戶,趙 銳. 活血化瘀藥鎮(zhèn)痛作用的文獻(xiàn)再評價[J].中藥藥理與臨床成藥,2010，26(6):79-81.

[3] 王新勝,吳啟南.三棱化學(xué)成分與質(zhì)量評價的研究進(jìn)展[J]. 中國藥房,2013,24(15):1417-1419 .

[4] 胡旭光，鄧小慧. 三棱總黃酮抗血小板聚集及抗血栓作用研究[J].陜西中醫(yī),2009,30(8):1091-1093.

[5] 張 媛，崔 蓉.金華產(chǎn)三棱中總黃酮的含量測定[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2011,17 (1):89-90.

(收稿2015-06-17；修回2015-08-05)

@愈骨佳膠囊 蘆丁 色譜法，高壓液相

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.045

△陜西省新藥評審中心 ( 西安 710065)

▲陜西省中醫(yī)藥研究院 ( 西安 710003)