裴紀(jì)文

西安市中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710021)

三烏丸的毒理研究*

裴紀(jì)文

西安市中醫(yī)醫(yī)院 (西安 710021)

目的：觀測(cè)小鼠分別口服大劑量三烏丸的半數(shù)致死量，以評(píng)價(jià)其安全性。方法：在死亡率0 %(Dn) 和100 %(Dm) 范圍內(nèi)確定5個(gè)給藥劑量，每個(gè)劑量組用10 只小鼠，觀察14d，用Bliss 法計(jì)算出半數(shù)致死量(LD50) 等數(shù)據(jù)。結(jié)果：三烏丸小鼠灌胃給藥測(cè)得LD50為5.12±0.4232g /kg。結(jié)論：三烏丸的治療量沒(méi)有發(fā)生任何毒性反應(yīng)，是非常安全可行的。

三烏丸是陜西省中醫(yī)界老前輩裴一民先生緩解疼痛的有效口服藥物，其經(jīng)歷了2～3代人的臨床實(shí)踐，有很好的疼痛緩解率。組方僅有三味藥，其中兩味藥有一定毒性，但經(jīng)過(guò)獨(dú)特的工藝加工后，毒性大大減少，對(duì)藥效學(xué)無(wú)任何影響。由于其獨(dú)特的組方，有必要對(duì)三烏丸毒理學(xué)(急性毒性試驗(yàn))進(jìn)行研究，為臨床安全用藥提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn),24h內(nèi)給藥1次，觀察小鼠接受過(guò)量的三烏丸所產(chǎn)生的急性中毒反應(yīng)，一日灌胃后產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況。分析毒性作用的靶器官、分析人體過(guò)量時(shí)可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、臨床的劑量選擇和觀察指標(biāo)的設(shè)計(jì)提供參考信息等。

1 試驗(yàn)條件

1.1 動(dòng)物品系 昆明種小鼠體重18～22g，♀♂各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(陜)2007-001。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)，選行為活動(dòng)、飲食、精神狀況正常的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 飼養(yǎng)管理 室溫20℃～24℃，相對(duì)濕度40%～70%，室溫20℃～24℃，光照8h/d，排風(fēng)扇通風(fēng)2次/d，每次1h，♀♂分籠飼養(yǎng)，正常顆粒料飼養(yǎng)，水(自來(lái)水)自由攝取。

1.3 受試藥物 三烏丸(每丸0.15g )批號(hào)：20080808西安市中醫(yī)醫(yī)院，用藥量是以成人用量：每日兩次，每次1～2丸。體重按60 kg計(jì)，每公斤體重每日服藥量為0.01g。

2 試驗(yàn)方法

2.1預(yù)試驗(yàn)：

2.1.1 摸索上下限：即用5組動(dòng)物(每組4只)逐步摸索出使全部動(dòng)物死亡的最小劑量(Dm)和一個(gè)動(dòng)物也不死亡的最大劑量(Dn)。找出Dm =100%為8.0/kg和 Dn =0% 的劑量3.276g/kg，此兩量分別為上下限。

2.1.2 確定組數(shù)，組距及各組劑量:①組數(shù)：預(yù)試驗(yàn)100%(Dm)為8.0g/kg和0%(Dn)的劑量3.276g/kg)，設(shè)定5組。②確定組距：組距0.8。

2.1.3 配制等比藥液，實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配成所需濃度，并使每只動(dòng)物在給藥容量上相等(0.4mL/10g )。

2.2 LD50試驗(yàn) 取小鼠50只，♀♂各半，體重18～22g，給藥前禁食12h，將每只小鼠稱重標(biāo)記，隨機(jī)分為5組。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)所得結(jié)果，確定組間三烏丸藥物劑量比值為0.80，三烏丸各劑量組劑量分別為8.0、6.4、5.12、4.096、3.276g/kg，1次灌胃給藥，給藥體積40mL/kg，連續(xù)觀察二周，給藥后按表1觀察14d內(nèi)動(dòng)物的一般活動(dòng)情況及存活情況，并詳細(xì)記錄小鼠行為活動(dòng)、狀態(tài)、飲食、大小便及毛色、分泌物和死亡數(shù)目、死亡時(shí)間及主要毒性反應(yīng)。

3 結(jié) 果 小鼠給藥后自發(fā)活動(dòng)減少、倦臥不動(dòng)、嗜睡，動(dòng)物皮毛光澤，無(wú)震顫、驚厥、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、流涎、流淚、流鼻涕、呼吸困難等現(xiàn)象發(fā)生。小鼠灌服三烏丸后半h開始死亡。無(wú)論高劑量組存活小鼠或死亡小鼠，大多有活動(dòng)減少、嗜睡、抽搐等臨床表現(xiàn)，其中以死亡小鼠表現(xiàn)得更突出(90%)以上。死后立即解剖肉眼可見(jiàn)小鼠胃充盈，腸管脹氣，余未見(jiàn)異常。未死動(dòng)物給藥14d后逐只處死解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔等重要臟器、器官未見(jiàn)顏色、形態(tài)異常，沒(méi)有出血點(diǎn)或其它病理改變，胃粘膜顏色紅潤(rùn)，無(wú)出血點(diǎn)或潰瘍，尸檢無(wú)異常。結(jié)果如下：

3.1 三烏丸不同劑量組小鼠死亡情況 見(jiàn)表1。

3.2 三烏丸灌胃小鼠半數(shù)致死量LD50見(jiàn)表2。

4 試驗(yàn)結(jié)論 實(shí)驗(yàn)完畢，按Bliss's 法統(tǒng)計(jì)各組死亡鼠數(shù)和計(jì)算死亡率，從表1、表2可見(jiàn)，三烏丸三烏丸灌胃給藥在ICR小鼠測(cè)得LD50為5.12±0.4232g/kg，95%可信區(qū)間為 5.5606～4.7143 g/ kg。這個(gè)半數(shù)致死量是人用藥量的1024倍；人用量654倍時(shí)，動(dòng)物是沒(méi)有死亡的，實(shí)驗(yàn)足以說(shuō)明現(xiàn)在人的用量是非常安全的。

表1 三烏丸不同劑量組小鼠死亡率

表2 三烏丸小鼠半數(shù)致死量LD50 ( Bliss's 法 )

5 討 論 三烏丸是生草烏、生川烏及大棗制成的丸劑 ( 0.15g /丸 )，具有祛風(fēng)除濕,溫經(jīng)止痛的作用。用量很小，每次1～2丸,一日 2次 。在臨床上是純中藥、強(qiáng)效止痛劑。組方簡(jiǎn)單，僅有三味藥,三藥作用祛邪而不傷正,鎮(zhèn)痛而無(wú)毒性[1]。我們傳統(tǒng)的研究表明[2]：川烏是通過(guò)不同炮制方法達(dá)到減毒的作用，主要炮制方法有蒸法和煮法，這些炮制法表明微生物發(fā)酵有助于降低川烏中毒性生物堿的含量,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[3]炮制后烏頭毒性降低,但藥效鎮(zhèn)痛作用減弱。而這項(xiàng)課題研究也說(shuō)明：生烏頭的毒性并不是不可改變的，本課題通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察三烏丸毒性是通過(guò)大棗的特殊工藝加工后，藥物的毒性大大減低，幾乎可以忽略不計(jì)，臨床應(yīng)用非常安全可靠，也許這個(gè)辦法不失為又一種烏頭的減毒妙法。三烏丸的臨床觀察也說(shuō)明，鎮(zhèn)痛作用非常強(qiáng)大，小劑量就能起到很好的緩解疼痛，說(shuō)明這種方法在大大減輕毒性的同時(shí)并沒(méi)有影響到臨床藥效。生川烏、生草烏在臨床上很少用于口服，主要是畏懼其毒性作用，三烏丸的毒理學(xué)研究表明，我們現(xiàn)在給人的用量非常安全，并且有很大的用量調(diào)整區(qū)間；其毒性是可控的，方法也是多樣的，也為臨床工作者的進(jìn)一步研究提供幫助。

[1] 裴紀(jì)文，職利琴.三烏丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 226例[J].陜西中醫(yī),2008，29(11)：1489.

[2] 曹國(guó)瓊，張永萍.烏頭的藥理與毒理作用及減毒的研究進(jìn)展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013,41(2)：61-69.

[3] 劉強(qiáng)強(qiáng),郭海東.川烏毒理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2012,19 ( 8 ) ：110-112.

(收稿2015-05-15；修回2015-06-16)

The toxicological study of San-wu pill

Xi’an Chinese Medicine Hospital ( Xi’an710002)

Pei Jiwen

Objective：Observed the median lethal dose of San-wu pill in mouse,to evaluate its safety.Methods：In the mortality rate of 0% (Dn) and 100% (Dm) within the scope of five give medicine doses were determined,each dose group including 10 mouses,observing 14 days,by Bliss method to calculate the median lethal dose (LD50) and other data.Results：The dose of Sanwu pill to fill the stomach to measure LD50 of mouse was 5.12 ±0.4232 g/kg.Conclusions：The treatment dose of Sanwu pill was without any toxic effects,and it is very safe and feasible.

Sanwu pill Acute toxicity Median lethal dose Animal,experiment Mice

*陜西省科學(xué)技術(shù)廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(S2009SF60)

三烏丸 急性毒性 半數(shù)致死量 動(dòng)物,實(shí)驗(yàn) 小鼠

R99

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.090