寇學(xué)良 臧巧真 龍凱花 王春柳□ 李曉堯 蘇 瑞

陜西省商洛市中心醫(yī)院(商洛 726000)

心壓平膠囊中丹酚酸B含量測(cè)定的方法學(xué)研究

寇學(xué)良 臧巧真△龍凱花▲王春柳▲□李曉堯△蘇 瑞△

陜西省商洛市中心醫(yī)院(商洛 726000)

目的：建立心壓平膠囊中丹酚酸B( C36H30O16)含量測(cè)定的方法。方法：采用Kromasil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-1.0%甲酸水(20∶80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm，柱溫25℃，流速1.0 mL/min。結(jié)果：丹酚酸B在進(jìn)樣量為113.40 μg/mL～680.40 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均回收率為102.86%，RSD為0.95%(n=6)。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為控制心壓平膠囊中丹酚酸B的含量提供了依據(jù)。

心壓平膠囊是由鉤藤、丹參、夏枯草、豬膽膏等十味中藥組成的復(fù)方中藥制劑。具有瀉火養(yǎng)陰，平肝熄風(fēng)，舒脈通絡(luò)之功效，主要用于高血壓病I、II級(jí)，肝陽上亢，陰血不足等癥候。丹參中的酚酸類化合物是心壓平膠囊發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，而丹酚酸B則是丹酚酸中含量最多、生物活性最強(qiáng)的化合物[1-2]。故本文以丹酚酸B作為檢測(cè)指標(biāo)對(duì)心壓平膠囊處方中的丹參進(jìn)行質(zhì)量控制，為保證臨床療效穩(wěn)定發(fā)揮奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料 1.1 儀器 美國安捷倫1260系列高效液相色譜儀，四元梯度泵，二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，自動(dòng)進(jìn)樣器，OpenLAB CDS ChemStation工作站。U-2910紫外可見分光光度計(jì)，Sartorius BP211D分析天平，Sartorius BP61分析天平，KH-300DE超聲清洗器等。

1.2 材料 丹酚酸B對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111562-201514)；心壓平膠囊(批號(hào)：140501、140502、140503)由陜西步長(zhǎng)制藥有限公司提供；陰性樣品由陜西省中醫(yī)藥研究院自制。水為超純水，甲醇、乙腈為色譜純(美國Fisher)。其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-1.0%甲酸水(20∶80)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)以丹酚酸B峰面積計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1mL含0.57 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品膠囊內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加75%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 專屬性考察 按心壓平膠囊處方比例及制備工藝制成不含丹參藥材的陰性對(duì)照，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示陰性對(duì)照無干擾，見圖1。

(1、2對(duì)照品；3、4陰性對(duì)照；5、6心壓平膠囊)

圖1 丹酚酸B對(duì)照品、心壓平膠囊、陰性對(duì)照重疊HPLC色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 丹酚酸B對(duì)照品溶液(0.567 mg/mL)分別進(jìn)樣2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以丹酚酸B進(jìn)樣量(μL)與峰面積(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程：Y=349.37X+325.30，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，丹酚酸B進(jìn)樣量在113.40 μg/mL～680.40 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄其峰面積值。結(jié)果對(duì)照品溶液的RSD為0.08%(n=6)，表明方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品(批號(hào)：140503)0.5 g，平行6份，按2.3項(xiàng)下方法制備成樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算丹酚酸B含量。結(jié)果平均含量為10.16 mg/g，RSD為0.41%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一心壓平膠囊樣品溶液(批號(hào)：140503)分別于放置0、2、4、6、8、12、24 h時(shí)測(cè)定。結(jié)果RSD為0.28%(n=6)，表明方法穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量樣品約0.25 g(批號(hào)：140503；含量10.16 mg/g)，平行6份，分別精密加入已知濃度的丹酚酸B對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算其含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為102.86%，RSD為0.95%，表明方法準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.10 樣品含量測(cè)定 取3批心壓平膠囊樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，并計(jì)算其結(jié)果。結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討 論 流動(dòng)相的選擇:參考《中國藥典》2010年版一部丹參項(xiàng)下丹酚酸B含量測(cè)定色譜條件甲醇-乙腈-甲酸-水[3-4](30∶10∶1:59)、甲醇-乙腈-1.0%甲酸(25∶10∶65)、乙腈-1.0%甲酸(20:80)，結(jié)果三種流動(dòng)相的供試品色譜圖中丹酚酸B均可達(dá)到基線分離，其中流動(dòng)相乙腈-1.0%甲酸(20∶80)預(yù)測(cè)定峰型較好，流動(dòng)相配制簡(jiǎn)捷，陰性無干擾，故確定流動(dòng)相為乙腈-1.0%甲酸(20∶80)。提取方法的選擇:考察了常用的超聲提取與加熱回流提取方法。結(jié)果超聲提取較回流提取丹酚酸B含量高，且超聲提取快捷方便，故確定超聲為提取方法。溶劑的選擇：分別考察以甲醇、75%乙醇、75%甲醇為提取溶劑時(shí)的峰面積，75%甲醇平均峰面積/稱樣量大于甲醇、75%乙醇，故確定75%甲醇為提取溶劑。超聲時(shí)間的考察：分別考察超聲20 min、30 min、40 min時(shí)的平均峰面積/稱樣量，超聲30 min丹酚酸B含量測(cè)定結(jié)果較高且節(jié)省時(shí)間，故確定超聲時(shí)間為30 min。

[1] 豐成相.丹參的化學(xué)成分及藥理作用概況[J].中國民族民間醫(yī)藥，2012，2：25-26.

[2] 林 超，劉兆國，錢 星，等．丹酚酸B在心血管疾病中藥理作用研究進(jìn)展[J]．中國藥理學(xué)通報(bào)，2015，31(4)：449-452．

[3] 楊亞麗，樊寶娟.HPLC法測(cè)定消栓通絡(luò)膠囊中丹酚酸B的含量測(cè)定[J].陜西中醫(yī)，2011，32(10)：1402-1404.

[4] 國家藥典委員會(huì).中國藥典: 第一部[S ] .北京: 中國醫(yī)藥科技出版社，2015: 70-71.

(收稿2015-04-20；修回2015-05-18)

△陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽 712046)

▲陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

□通訊作者

色譜法，高壓液相 @丹酚酸B @心壓平膠囊

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.10.087